正交試驗優選關黃柏炭最佳炮制工藝研究

劉會民 ，劉蓬蓬

(1.朝陽市第二人民醫院，遼寧 朝陽 122000；2.遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600)

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正交試驗優選關黃柏炭最佳炮制工藝研究

劉會民1，劉蓬蓬2

(1.朝陽市第二人民醫院，遼寧 朝陽 122000；2.遼寧中醫藥大學，遼寧 大連 116600)

目的：優選關黃柏炭的炮制工藝。方法：以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為指標，選擇炒制溫度、炒制時間為考察因素并結合飲片炒炭后的外觀性狀要求，采用正交試驗優選關黃柏炭的最佳炮制工藝。結果：關黃柏炭的炮制工藝為每100g關黃柏在240℃條件下炒4min。結論：優化的關黃柏炭炮制工藝穩定、可行。

關黃柏；炮制；炒炭；正交試驗

關黃柏為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮,其藥性苦、寒，入腎、膀胱經，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效[1]。關黃柏中生物堿為其主要有效成分，其中包含小檗堿、黃柏堿、巴馬汀、藥根堿，具有抗炎、解熱的功效。關黃柏制炭后，苦寒之性大減，收澀之性增加，清濕熱之中兼具澀性，可用于治療便血，崩漏下血[2]。本實驗以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為指標，選擇炒制溫度、炒制時間為考察因素，采用正交試驗優選關黃柏炭的最佳炮制工藝，為工業化大生產提供研究基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，Waters 2998型檢測器；METTLER AE240型十萬分之一分析天平(瑞士METTLER公司)；FA1004B型電子天平(上海精密科學儀器有限公司)；DFT-100型高速萬能粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)；KQ-250DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)等。

1.2 藥材

生關黃柏飲片購自大連開發區保健大藥房，經遼寧中醫藥大學翟延君教授鑒定為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮。

1.3 試藥

鹽酸巴馬汀對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號110732-200506)，鹽酸小檗堿對照品(成都曼斯特生物科技有限公司，純度≥98%，批號MUST-10090303)；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 正交試驗

根據炮制規范對炒炭工藝進行正交實驗設計，對關黃柏按照L9(34)正交因素水平表進行炮制，以關黃柏中的主要成分鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量為考察指標，結合生產實際選擇炒制時間、炒制溫度為考察因素，因素水平見表1。

表1 關黃柏炭工藝因素水平

2.2 樣品制備

取9份關黃柏，每份20g，按照正交試驗因素表炮制樣品。

2.3 鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀含量測定[3]

2.3.1 對照品溶液制備 取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含105.2、14.96μg的對照品溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液制備 取各樣品粉末(過60目篩)約0.2g，精密稱定，置50mL量瓶中，加入60%乙醇40mL，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)45min，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 色譜條件 Agilent TC-C18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液(加入磷酸二氫鈉使其達到0.02mol/L)為流動相B，按表2中的規定進行洗脫，檢測波長：345nm，流速：1.0mL·min-1，柱溫：25 ℃，進樣量：10μL，結果見表3。色譜見圖1-圖3。

表2 流動相洗脫

圖1 鹽酸巴馬汀對照品色譜

圖2 鹽酸小檗堿對照品色譜

圖3 關黃柏炭炮制品色譜

2.3.4 線性關系考察 精密吸取各生物堿對照品溶液適量，注入液相色譜儀，按“2.3.3”項下色譜條件測定，并記錄峰面積，以對照品的進樣量(μg)為橫坐標X，峰面積(A)為縱坐標Y，繪制標準曲線，得鹽酸小檗堿與鹽酸巴馬汀回歸方程分別為：Y=4 062 106.770 8X- 12 224.201 8(r=0.999 3)，Y=4 131 597.030 5X+9 112.494 4(r=0.999 1)，結果表明鹽酸小檗堿在0.005 26～0.157 8μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，鹽酸巴馬汀在0.006～0.09μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.5 精密度試驗 分別精密吸取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品溶液5μL，連續進樣6次，按“2.3.3”項下條件測定各對照品的色譜峰面積，計算其RSD分別為1.1%和1.3%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩定性實驗 取同一關黃柏炭供試品，放置于室溫，于0、2、4、6、8、10、12、24h后，按“2.3.3”項下條件操作，結果鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的峰面積RSD分別為1.5%和2.3 %，表明該供試品溶液在室溫下24h內穩定。

2.3.7 重復性試驗 取同一關黃柏炭供試品6份，按“2.3.3”項下條件測定鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀各成分的含量，計算其RSD分別為1.8%和1.5%，結果表明供試品重復性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗 取6份已知含量樣品0.2g，精密稱定，分別精密加入鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品各10mL，按“2.3.2”項下條件操作。測得鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的平均回收率分別為101.97%和99.83 %，RSD分別為1.9%和1.2%。

2.4 炒炭工藝優選

鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀均為關黃柏中指標性成分，且在2010 年版《中國藥典》中以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為檢測指標，故在綜合評分中將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀權重系數均定為0.5。綜合指標OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/mBmax)×100。炒炭試驗結果見表3，方差分析見表4。

表3 正交試驗優化關黃柏炭炮制工藝測定結果

表4 方差分析結果

注：F0.05(2,2)=19.0。

2.5 結果

方差分析結果表明，炒制溫度和炒制時間對關黃柏炭中小檗堿和巴馬汀含量均有顯著性影響，主次順序為A(炒制溫度)>B(炒制時間)。從正交試驗結果可以看出A1B3綜合評分最高，但結合關黃柏炭成品質量，即表面焦黑色，內部深褐色的要求，最終選定關黃柏的制炭優化工藝為A2B2，即每100g關黃柏在240℃條件下炒4min。

2.6 驗證試驗

按“2.5”項得到的炮制參數進行驗證性試驗，得到以下結果，見表5。從結果可以看出所指定的關黃柏炭工藝穩定可行。

3 討論

試驗中考察指標為鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，為盡量客觀反映各個因素之間的關系及因素水平對關黃柏炮制品質量的影響，擬采用綜合加權評分法。即以一個綜合指標(overall desirability，OD)，將各個考察指標統一綜合考察，以綜合指標進行直觀分析。在綜合評分中將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀權重系數均定為0.5。綜上，綜合指標OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/ mBmax)×100。同時，在確定關黃柏炒炭的最佳工藝時將炮制后的飲片外觀性狀是否符合要求作為首要篩選條件。

本試驗中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量測定方法參照2010版藥典中關黃柏的含量測定內容。由于在實際進樣時發現在同一進樣量下各樣品中指標成分含量差別較大，為了使其在同一線性范圍內，故在1～20μL范圍內根據實際情況選取不同的進樣量。

本實驗參照了文獻中的關于鹽酸小檗堿和巴馬汀的測定方法，最終選定藥典的方法，其操作方法簡單，測定結果快捷。最終制定的關黃柏炒炭工藝在驗證實驗中結果良好，說明本工藝穩定可行，適合工業化大生產。

[1] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典[S] .一部. 北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2] 賈天柱.中藥炮制學[M].上海：上?？茖W技術出版社，2008.

[3] 張煊,崔征,周海燕,等. 高效液相色譜法測定關黃柏不同采收期及黃檗不同部位的小檗堿、巴馬汀含量[J]. 沈陽藥科大學學報,2003,20(3):194-197.

(責任編輯：魏 曉)

Study on Processing Technology of Phellodendron Amurense Rupr Carbonisatus by Orthogonal Experiment Design

Liu Huiming1,Liu Pengpeng2

(1.The second peoples hospital of chaoyang city, Chaoyang 122000,China; 2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600,China)

Objective:To optimize the processing technology of phellodendron amurense rupr carbonisatus. Methods:The content of palmatine chloride and berberine hydrochloride was regarded as evaluated index, the heating temperature and heating time as examine factors, associate with appearance to optimize the best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus by orthogonal experiment design. Results:The best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus is frying for 4minutes at 240℃per 100g. Conclusion:The optimized processing technology is stable and feasible.

Phellodendron；Processing；Carbonizing by Stir-frying；Orthogonal Experiment Design

2014-09-25

國家自然科學基金項目(81274083)

劉會民(1968-)，男，遼寧省朝陽市第二人民醫院副主任中藥師，研究方向為中藥制劑。

R283

A

1673-2197(2015)03-0019-03

10.11954/ytctyy.201503008