溫腎方對乙肝攜帶者血清、精子HBV-DNA的影響

余 顏，俞旭君，王永磊，李俊君，白松林

(成都中醫藥大學附屬第二醫院，四川 成都 611137)

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溫腎方對乙肝攜帶者血清、精子HBV-DNA的影響

余 顏，俞旭君，王永磊，李俊君，白松林*

(成都中醫藥大學附屬第二醫院，四川 成都 611137)

目的：觀察溫腎方對脾腎陽虛型慢性乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者血液和精子HBV-DNA的影響，探討中醫藥阻斷慢性HBV攜帶者父嬰垂直傳播的方法。方法：采用隨機對照雙盲試驗將106例精子HBV-DNA為陽性的慢性HBV攜帶者隨機分為治療組和對照組各53例，治療組患者給予溫腎方治療；對照組患者予以安慰劑。治療6個月，觀察比較兩組患者中醫證候積分、血液和精子HBV-DNA陰轉率等指標。結果：治療后，脫落患者11例，其中治療組患者血清HBV-DNA轉陰率為6.2%(3/48)，低于對照組的4.2%(2/47),比較差異無統計學意義(P>0.05)；治療組患者精子HBV-DNA轉陰率為37.5%(18/48)，高于對照組的4.2%(2/47)，比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論：溫腎方可改善患者中醫證候情況,提高患者精子HBV-DNA轉陰率，但對患者血清HBV-DNA轉陰率無明顯影響。

慢性HBV攜帶者；脾腎陽虛證；溫腎方；血液；精子

受乙肝病毒感染的精子與正常卵細胞受精，可能會在胎兒體內某些組織形成病毒顆粒，使其一出生就成為病毒攜帶者，因此有必要把血清和精液HBV-DNA同時作為臨床主要檢測指標，研究臨床治療方案。

目前，臨床對于慢性HBV攜帶者建議暫不給予西藥抗病毒治療，有必要探索中藥對慢性乙肝攜帶者父系精子HBV-DNA的影響。本研究采用溫腎方治療陽虛證慢性HBV攜帶者，觀察其對患者血清、精子HBV-DNA載量的影響，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2011年3月—2013年3月我院收治的106例脾腎陽虛型慢性乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者作為研究對象，以DPS v8.01軟件，按隨機對照雙盲試驗分為治療組和對照組各53例，患者年齡為25～35歲，平均年齡28歲。

1.2 病例選擇

1.2.1 西醫診斷標準 西醫診斷符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010版)相關標準，確診為慢性CHB攜帶者。

1.2.2 中醫診斷標準 參照《中藥新藥臨床研究指導原則(試行)》(2002版)制定。

1.3 納入標準

符合西醫慢性CHB攜帶者診斷標準，且血清105copies/mL≤HBVDNA≤109copies/mL；精子HBV-DNA陽性者；舌脈辨證符合CHB脾腎陽虛證辨證標準；年齡25～35歲；依從性好，知情同意，并簽署知情同意書。

1.4 排除標準

近6個月接受抗病毒或免疫抑制治療；合并嚴重原發性疾病、精神病者；排除精液異常者，參數按第五版WHO對人類精子的分級標準；正在使用影響精子生成及活力藥物者；先天性生殖系統畸形或睪丸、附睪、輸精管存在器質性病變者。

1.5 剔除標準

納入后發現不符合納入標準；試驗中因各種原因破盲者；受試者依從性差(試驗用藥依從性<80%或>120%)，中途停藥或換藥、加藥者。

1.6 脫落標準

未按規定用藥無法判斷療效；雙盲試驗中由于嚴重不良事件需被破盲者；發生嚴重不良反應，不宜接受繼續治療；發生不良反應者,記入不良反應統計。

病例完成情況:本試驗共有11例病例退出，總脫落率為10.3%。其中試驗組5例，對照組6 例，共有95例完成實驗。兩組脫落率比較無統計學差異(P>0.05)。治療前兩組患者疾病資料比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。見表1。

表1 兩組患者一般資料比較 (±s)

1.7 方法

1.7.1 治療組 給予患者溫腎方(藥物組成：制附片6g、巴戟天30g、菟絲子15g、淫羊霍15g、黃芪20g、熟地黃15g、桑寄生15g、黃芩30g、青蒿9g、炙甘草5g)治療。統一煎煮，每劑藥物煎煮為2袋(每袋100mL)，分早晚2 次服用,連用6個月。

1.7.2 對照組 將原煎藥作20倍稀釋后加入淀粉，作為安慰劑使用，服用方法同治療組，均由成都中醫藥大學第二附屬醫院中藥房提供。

1.7.3 精子HBV-DNA檢測方法 采用熒光定量PCR技術,精液液化后，將精子與精漿分離，精子以PBS洗3～5次，末次洗液PCR檢測HBV-DNA陰性，以PBS稀釋精子，調節精子濃度30×106個/mL，將精子保存備用。將上述制備精子100μL移入0.5 mL小試管，加入100μL提取液，按照說明書操作，提取HBV-DNA，進行實時熒光PCR擴增試驗，對HBV-DNA檢測定量。HBVDNA檢測下限為5.0×102copies/mL，以標本檢測數值>1.0×103copies/mL判為陽性。采用Bio-rad icycler熒光定量PCR檢測儀(美國BIO-RAD公司)，HBV熒光定量PCR檢測試劑購自深圳凱杰公司。

1.8 觀察指標

分別于治療時、治療后第6個月檢測精液常規2次，取其中精液質量最接近正常值作為實驗結果；精子及血清HBV-DNA各檢測2次，以最接近正常值為實驗結果；肝功能、腎功、血尿常規、心電圖各檢測1次。記錄不良反應發生情況。

1.9 統計學方法

2 結果

2.1 兩組患者治療前后血清、精子HBV-DNA陰轉率比較

治療6個月后，治療組患者血清HBV-DNA轉陰率為6.2%(3/48)，低于對照組的4.2%(2/47),比較差異無統計學意義(P>0.05)；治療組患者精子HBV-DNA轉陰率為37.5%(18/48)，高于對照組的4.2%(2/47)，比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者治療前后血清、精子HBV-DNA陰轉率比較 (n)

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 不良反應

治療過程中兩組患者未發生嚴重不良反應, 常見不良反應為疲乏、腹瀉等, 均未用相關藥物干預能夠自行緩解。

3 討論

研究表明精子為乙肝病毒父嬰垂直傳播的載體，部分乙肝病毒攜帶者精子中攜帶乙肝病毒DNA, 在受精過程中以精子作載體，將病毒基因帶到胚胎，進而使子代感染HBV。研究[1]認為，針對父嬰傳播的阻斷方法為孕前對丈夫進行抗病毒治療，最大限度降低父親的血清HBV-DNA 水平。研究[2]表明：血清HBV-DNA陽性者其新生兒發生HBV父嬰垂直傳播的危險性為HBV-DNA 陰性者的2.1倍，精液陽性者其新生兒發生HBV父嬰垂直傳播的危險性為陰性者的34.3倍，而精子內部HBV-DNA陽性檢出率遠遠低于精漿內[3]；精子已被HBV感染，在受精過程中整合HBV-DNA精子不會受到選擇性淘汰，能順利完成受精過程，其父嬰垂直傳播的風險遠大于血清。因此，縮短精子攜帶HBV-DNA時間及減少精子攜帶HBV-DNA載量可能阻斷乙肝父嬰垂直傳播。藥理學研究證明，溫腎方中巴戟天、桑寄生、黃芪等均有較好的免疫調節作用、抑制HBV病毒的功能。溫腎法可明顯降低部分免疫耐受期CHB患者外周血中CD4+、CD25+、Tregs/CD4+ T細胞的比例和FoxP3的基因表達水平,明顯改善患者外周血DC共刺激分子CD86、CD80、CD40、CD11c表達,從而有助于HBV的清除。精子攜帶乙肝病毒受多種因素影響，對于中藥干預后患者精子攜帶乙肝病毒減少或消失的作用機制尚未見報道，需設計更加嚴謹的試驗加以驗證。

本研究結果顯示，溫腎方可改善中醫證候療效, 提高患者精子HBV-DNA轉陰率，但對患者血清HBV-DNA轉陰率無明顯影響。對于精子HBV-DNA陽性的HBV攜帶者生育前進行中醫辨證治療,可提高精子HBV-DNA轉陰率，降低父嬰傳播的風險。

[1] 盧銀平，曹偉，洪梅，等.父親HBV攜帶與嬰兒HBV感染的關系[J].中國婦幼保健,2011，26(2):221.

[2] 陳起燕，張榮蓮，黃欣欣，等. 乙肝父嬰垂直傳播的臨床觀察[J]. 中國婦幼保健,2013，28(11):1747.

[3] 楊勤德，張玉芳. HBV 感染者精液HBV-DNA 載量的相關影響因素研究[J].中國當代醫藥，2013，20(3)：7.

(責任編輯：李嵐春)

2014-12-04

余顏(1979-)，男，成都中醫藥大學附屬第二醫院醫師，研究方向為泌尿男科。

白松林(1973-)，成都中醫藥大學附屬第二醫院醫師，研究方向為中西醫結合臨床。E-mail：smg-7327@163.com

R259

A

1673-2197(2015)10-0082-02

10.11954/ytctyy.201510036