附子細辛、芍藥甘草配伍前后對小鼠鎮痛作用研究

梁澤華，李范珠，楊元宵，翁錦妮，許夢捷，徐姍姍

(浙江中醫藥大學 藥學院，浙江 杭州 310053)

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附子細辛、芍藥甘草配伍前后對小鼠鎮痛作用研究

梁澤華，李范珠，楊元宵，翁錦妮，許夢捷，徐姍姍

(浙江中醫藥大學 藥學院，浙江 杭州 310053)

目的：研究附子細辛、芍藥甘草配伍前后對小鼠鎮痛作用的影響。方法：鎮痛實驗采用小鼠熱板法和扭體法，觀察附子細辛、芍藥甘草配伍前后對小鼠的鎮痛作用。結果：對熱板所致疼痛的影響：給藥前，生理鹽水組、附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組四組小鼠的痛閾值比較差異無統計學意義(P>0.05)。給藥15、30、60、90min時附子細辛組小鼠痛閾值較附子組均顯著提高，芍藥甘草組較芍藥組均顯著提高，差異均有統計學意義(P<0.05)。對醋酸所致疼痛的影響：附子細辛組與附子組相比，芍藥甘草組與甘草組相比，小鼠發生扭體反應的潛伏時間均顯著延長，在15min內的扭體發生次數明顯減少，差異均有統計學意義(P<0.05)；附子細辛組扭體抑制率>附子扭體組抑制率，芍藥甘草組抑制率>芍藥組扭體抑制率。結論：相比與配伍前，附子細辛配伍后鎮痛作用增強，芍藥甘草配伍后鎮痛作用亦增強。

附子細辛；芍藥甘草；配伍；熱板法；扭體法；鎮痛

附子是毛茛科烏頭屬植物烏頭(AconitumcarmichaeliDebx.) 的干燥子根加工品[1]，能回陽救逆、補火助陽、散寒止痛；細辛能解表散寒、祛風止痛、通竅、溫肺化飲。兩者均有止痛功效。附子細辛湯出自《傷寒論》，為臨床常用方劑，現代藥理研究證實其具有抗炎、鎮痛、免疫調節等作用，其他作用如清除身體局部產生的活性氧[2]。近年來，該藥新的治療用途也不斷被挖掘出來，如治療頑固性失眠[3]、抖動癥[4]等。芍藥酸寒，能養血斂陰、柔肝止痛；甘草性溫，能健脾益氣、緩急止痛。二藥相伍，酸甘化陰，調和肝脾，有柔筋止痛之效。芍藥甘草湯源自于張仲景《傷寒論》，由芍藥、甘草兩味藥組成，有柔肝舒筋、緩急止痛之功效，其化學成分和藥理學的研究已有較多報道[5]。

已有相關文章說明附子細辛和芍藥甘草有抗炎鎮痛的作用，而鎮痛作用雖經過報道，但是較少有明確的試驗予以證實。本實驗用經典的熱板法和醋酸扭體法來研究附子細辛和芍藥甘草兩個藥對配伍前后對小鼠鎮痛作用的影響，現報道如下。

1 材料與儀器

1.1 材料

附子、細辛均由浙江中醫藥大學中醫門診部購得，經浙江中醫藥大學資源鑒定教研室熊耀康教授鑒定；實驗動物為清潔級健康成年ICR小鼠，體重(20±2)g，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物生產許可證：SCXK(滬)2013-0016；飼養于浙江中醫藥大學動物實驗研究中心，實驗動物使用許可證號：SYXK(浙)2013-0184。溫度(22±2)℃，濕度50%～60%，12h光照，自由飲水，標準普通飼料喂食。

1.2 儀器

智能熱板儀，YLS-6B，山東省醫學科學院設備站；電子計價秤，ACS-3型，杭州友恒稱重設備有限公司。

2 方法

2.1 藥物配制

采用常規煎煮法，稱取附子10g、細辛20g，加12倍量蒸餾水用文火煎煮45min，濾過得到濾液①，濾渣再加入10倍量蒸餾水用文火煎煮45min，濾過得到濾液②。合并濾液①和②，靜置去渣，用旋轉蒸發儀濃縮為60%的水煎液。此為樣品1。稱取白芍10g，甘草10g，按上述方法制備，此為樣品2。稱取附子10g，按上述方法制備，此為樣品3。稱取白芍10g，按上述方法制備，此為樣品4。

2.2 造模方法

2.2.1 熱板法致痛模型 將雌性小鼠置于溫度設定為55.0℃的智能熱板儀上，以小鼠出現舔后足所需時間作為小鼠的痛閾值[6]；給藥方式為灌胃，給藥劑量0.2mL/10g。測量小鼠給藥前以及給藥后15、30、60、90min的痛閾值(超過60s的以60s計)，記錄數據。

2.2.2 扭體法致痛模型 6%醋酸溶液腹腔注射，引起深的、大面積而持久的疼痛刺激，致使小白鼠產生“扭體”反應，腹部內凹、軀干與后腿伸張、臀部高起。給藥劑量為0.2mL/10g，分別給藥20min后，注射6%醋酸溶液0.2mL/10g[8]，記錄15min內小鼠出現扭體反應的潛伏時間及其扭體次數。

2.2.3 分組處理 將實驗用的50只清潔級雌性ICR小鼠隨機分為附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組、空白對照組共5組，每組10只。

2.3 統計學方法

3 結果

3.1 藥對配伍前后對熱板法所致小鼠疼痛作用的影響

根據表1和圖1所示，給藥前，空白對照組與附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組四組小鼠的痛閾值比較無統計學意義(P>0.05)。與空白對照組相比，給藥15min時附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值明顯升高，有統計學意義(P<0.05)，附子細辛組、芍藥甘草組痛閾值極顯著性升高(P<0.01)；給藥30min時附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值均明顯升高，有統計學意義(P<0.05)，附子細辛組、芍藥甘草組痛閾值極顯著性升高(P<0.01)；給藥60min時附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值明顯升高(P<0.05)，附子細辛組、芍藥甘草組痛閾值極顯著性升高(P<0.01)，均有統計學意義；附子細辛組較附子組顯著提高，芍藥甘草組較芍藥組顯著提高(P<0.05)。給藥90min時附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組痛閾值均極顯著性升高，有統計學意義(P<0.01)；附子細辛組較附子組顯著性提高，芍藥甘草組較芍藥組顯著性提高(P<0.05)。在不同時間段，附子組、與附子細辛組痛閾值相比，芍藥組與芍藥甘草組痛閾值相比，均無統計學意義(P>0.05)。結果說明附子細辛和芍藥甘草藥對配伍后對鎮痛作用有所提高。

表1 藥對配伍后對小鼠鎮痛作用的影響 (±s，s)

注：和空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

3.2 藥對配伍前后對醋酸扭體法所致疼痛的作用影響

根據表2和圖2、3結果所示，與空白對照組相比，附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組給藥后小鼠發生扭體反應(腹部收縮內凹，后肢伸展，臀部抬高，蠕動)的潛伏時間極顯著性延長(P<0.01)，在15min內的扭體發生次數極顯著性減少(P<0.01)，附子細辛組較附子組結果相比，潛伏時間顯著延長，扭體發生次數顯著減少(P<0.05)，芍藥甘草組較芍藥組結果相比，潛伏時間顯著延長，扭體發生次數顯著減少(P<0.05)，均有統計學意義，見圖2、圖3。附子細辛組扭體抑制率>附子扭體組制率，芍藥甘草組抑制率>芍藥組扭體抑制率，同見圖2。結果說明附子細辛和芍藥甘草藥對配伍后對鎮痛作用有所提高。

圖1 各藥對配伍前后對小鼠鎮痛作用的影響

表2 藥對配伍后對小鼠醋酸扭體法鎮痛作用的影響 (±s)

注：與空白對照組比較，**P<0.01。

圖2 藥對配伍后對小鼠醋酸扭體法鎮痛作用的影響

注：扭體抑制率[7](%)=(空白組扭體反應次數-給藥組扭體反應次數)/空白組扭體反應次數*100%。

圖3 藥對配伍后對小鼠醋酸扭體法鎮痛作用的影響

4 討論

就功效而言，附子能回陽救逆、補火助陽、散寒止痛；細辛能解表散寒、祛風止痛、通竅、溫肺化飲,兩者均有止痛功效，遂選取附子細辛作藥對。附子細辛為臨床常用藥材，現代藥理研究證實其具有抗炎作用、鎮痛作用、免疫調節作用，其他作用如清除身體局部產生的活性氧。從實驗結果看，藥對的抗炎鎮痛作用比附子單藥作用強，可能是由于附子細辛通過配伍相互產生協同增效作用而提高療效。白芍味苦酸而性微寒，可養血調經、柔肝止痛、斂陰止汗；炙甘草味甘而性平，可益氣補中、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛。二藥配伍，甘苦相合而氣血雙補，酸甘化陰而滋陰液，共奏補益和中、柔肝緩急、解痙鎮痛等功效。現代研究表明，中藥白芍所含的主要成分白芍苷，可與甘草產生協同作用，顯著抑制胃腸道平滑肌及骨骼肌收縮，對全身各部位肌肉強烈收縮所致的痙攣性疼痛具有明顯的緩解作用。現代藥理研究證實，芍藥甘草藥對具有抗炎鎮痛的作用。從實驗結果看，藥對的抗炎鎮痛作用比芍藥單藥作用強，這是由于芍藥甘草通過配伍相互產生協同增效作用從而提高療效。

本研究表明，與空白對照組相比，附子組、附子細辛組、芍藥組、芍藥甘草組小鼠發生舔后足跳躍反應的痛閾值顯著升高，小鼠發生扭體反應的潛伏時間明顯延長，次數顯著降低；附子細辛組相對附子組痛閾值升高，扭體反應的潛伏時間明顯延長，次數顯著降低；附子細辛組比附子組鎮痛作用強；芍藥甘草組相對芍藥組痛閾值升高，芍藥甘草組比芍藥組鎮痛作用強。為其綜合開發利用提供了實驗依據，其鎮痛有效成份及機制有待進一步研究。

綜上所述，附子細辛藥對抗炎鎮痛作用比附子單藥作用強，可能是因為附子細辛通過配伍相互產生協同增效作用從而提高療效。二藥表里兼顧，陽復表解，在內之寒附子溫之細辛助之，在外之寒細辛疏之附子輔之，加強溫陽解表、散寒止痛功效，為止痛藥對。芍藥甘草藥對抗炎鎮痛作用比芍藥單藥作用強，這是因為芍藥甘草通過配伍相互產生協同增效作用而提高療效。二藥配伍結合，能夠加強解痙、抗炎止痛之功效，為止痛藥對。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].第1部.北京:中國醫科技出版社,2010.

[2] 王艷宏,包蕾,劉振強,等.麻黃附子細辛湯藥理作用研究進展[J].時珍國醫國藥,2010,21(1):216-217.

[3] 劉國華,林大勇,關慶增,等.麻黃附子細辛湯新用及機理探討[J].遼寧中醫雜志,2008,35(6):913-914.

[4] 金樹武.麻黃附子細辛湯治療抖動癥[J].中外健康文摘,2007,4(4):62-63.

[5] 項琪,程剛,陳濟民.芍藥甘草湯在大鼠體內藥代動力學研究[J].中國藥學雜志,2000,35(9):615-618.

[6] 黃禮德,郭立強,潘廷啟,等.半邊蓮不同提取物鎮痛抗炎作用[J].醫藥導報,2012,31(8):982-985.

[7] 付遠清,陸海鵬,陸翠林.星宿萊水提取物及醇提取物毒性及抗炎鎮痛作用初探[J].黑龍江醫學,2013,37(2):157-159.

[8] 張玲莉,韓瑞玲.酮洛芬二元醇質體凝膠抗炎鎮痛作用考察[J].中國藥師,2013,16(10):1537-1539.

(責任編輯：尹晨茹)

Study on Effects of the Separated and Integrative Decoction of Aconite and Asarum or Paeonia Lacliflora and Glycyrrhiza on Analgesia in Mice

Liang Zehua,Li Fanzhu,Yang Yuanxiao,Weng Jinni,Xu Mengjie,Xu Shanshan

(College of Pharmacy,Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,China)

Objective:Research analgesic effect of Aconite and Asarum or paeonia lacliflora and glycyrrhiza in mice before and after combination.Methods:Hot-plate procedure and writhing test in mice were adopted in experimental analgesic mod-el,survey analgesic effect of Aconite and Asarum or paeonia lacliflora and glycyrrhiza in mice before and after combination.Results:the influence of the hot plate induced pain: before dosing, the pain threshold of saline group, aconite group,aconite and asarum group,paeonia lacliflora group,paeonia lacliflora and glycyrrhiza group were not statistically significant (P>0.05). When administered 15min,30min,60min and 90min,the pain threshold of aconite and asarum group increased pain than aconite group(P<0.05), the pain threshold of paeonia lacliflora and glycyrrhiza group increased pain than paeonia lacliflora group(P<0.05), which is statistically significant.The influence of the Combined decoction and decoction on pain induced by acetic acid:The aconite and asarum group compared with aconite group,The paeonia lacliflora and glycyrrhiza group compared with paeonia lacliflora group,combined group of mice was significantly longer occur writhing latency (P<0.05), within 15min, the number of writhing occurred has significantly reduced (P<0.05), which is statistically significant. Inhibition rate of aconite and asarum grouP> Inhibition rate of aconite group,Inhibition rate of paeonia lacliflora and glycyrrhiza grouP>Inhibition rate of paeonia lacliflora group.Conclusion:This study showed that, compared with the separation,the combination of aconite and asarum and the combination of paeonia lacliflora and glycyrrhiza group have the stronger analgesic effect.

Aconite and Asarum;Paeonia Lacliflora and Glycyrrhiza; Hot Plate Test;Body Torsion Test; Analgesic Effect

2014-12-10

浙江省科技廳項目(2012R10044-04)

梁澤華(1976-)，女，博士，浙江中醫藥大學副教授，研究方向為中藥炮制技術與藥效結合技術。

R285.5

A

1673-2197(2015)10-0013-03

10.11954/ytctyy.201510006