大青葉配方顆粒中靛玉紅含量測定方法驗證

王小敏，王盼盼，薛艷許，魯倩倩，耿 碩，袁亞蘭

(神威藥業集團有限公司，河北 欒城 051430)

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大青葉配方顆粒中靛玉紅含量測定方法驗證

王小敏，王盼盼，薛艷許，魯倩倩，耿 碩，袁亞蘭

(神威藥業集團有限公司，河北 欒城 051430)

目的：確定所采用的HPLC法適用于大青葉配方顆粒中靛玉紅的含量檢測。方法：靛玉紅含量測定采用HPLC法，色譜柱：Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇-水(75∶25)；檢測波長為289nm。對3個批次的大青葉配方顆粒進行含量測定方法學驗證。結果與結論：大青葉顆粒中靛玉紅的含量測定可采用HPLC法。

大青葉配方顆粒；靛玉紅； HPLC法；含量測定

大青葉配方顆粒是由大青葉經過現代科學方法精制而成，具有清熱解毒、涼血消斑的作用，用于治療溫病高熱、神昏、發斑發疹、痄腮、喉痹、丹毒、癰腫。大青葉為十字花科植物菘藍IsatisindigoticaFort.的干燥葉[1]，其化學成分復雜，含有靛玉紅、靛藍、扶桑甾醇等多種成分，其活性成分為靛玉紅和靛藍[2]。藥理研究表明，靛玉紅和靛藍具有抑菌、抗病毒、解熱抗炎等功效。本文選擇靛玉紅作為指標，采用HPLC法進行含量測定，控制大青葉配方顆粒的質量。

1 材料

1.1 樣品

大青葉配方顆粒(生產廠家：神威藥業集團有限公司)，批號14110621、15010121、15010821。規格：每袋裝1.3g。

1.2 儀器與試藥

高效液相色譜儀(戴安，U3000紫外檢測器，化學工作站)；電子分析天平(型號：CPA225D)；甲醇為色譜純(天津市科密歐化學試劑有限公司)、水為純化水，其它試劑均為分析純。靛玉紅對照品為中國食品藥品檢定研究院提供(批號110717-200204)。

1.3 色譜條件

色譜柱：Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：甲醇-水(75∶25)；紫外檢測器檢測，檢測波長為289nm。理論塔板數按靛玉紅峰計算應不低于4 000。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液制備

精密稱取靛玉紅對照品0.009 97g、0.009 61g，分別置100mL量瓶中，加甲醇溶液并稀釋至刻度，作為對照品儲備液；精密量取1mL于50mL量瓶中，加甲醇適量，搖勻，加甲醇溶液并稀釋至刻度，作為對照品溶液(10℃以下保存)。

2.2 供試品溶液制備

分別取上述三批大青葉配方顆粒適量，批號4110621：1.014 2g、1.013 2g；批號15010121：1.004 7g、1.004 1g；批號15010821：1.023 2g、1.019 6g。精密稱定，各加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。

2.3 含量測定

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，即得。上述三批樣品所對應的峰面積測定結果見表1。含量測定結果見表2。

表1 不同批號樣品峰面積測定結果

表2 含量測定結果

2.4 方法學驗證

以下均取15010821批大青葉配方顆粒進行試驗。

2.4.1 重復性考察 分別取供試品粉末各6份，精密稱定，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行分析，精密吸取對照品溶液20μL，供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數方程計算，即得。測得對照品20μL的平均峰面積為3.824 2；供試品結果見表3，RSD<2%，表明重復性良好。

2.4.2 靛玉紅標準曲線繪制 精密吸取靛玉紅對照品溶液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0μL注入色譜儀，測定和記錄靛玉紅的面積，峰面積依次為：0.961 72、1.937 25、2.899 84、3.850 72、4.880 03、5.860 65。以面積為縱坐標，

以進樣量為橫坐標，得標準曲線方程為Y=101.82X-0.025 5，R2=0.999 9(r=0.999 7)。結果表明，靛玉紅在0.01～0.06μg范圍內具有良好的線性關系。標準曲線見圖1。

表3 重復性考察結果

圖1 靛玉紅標準曲線

2.4.3 陰性對照試驗 按照生產工藝制備陰性樣品，取陰性樣品適量，研細，精密稱取1.021 5g，各加甲醇25mL，稱定重量，超聲處理30min，放至室溫，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。精密吸取靛玉紅對照品溶液、陰性對照品溶液、供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明：陰性對照無干擾。各樣品溶液HPLC圖譜見圖2-圖4。

圖2 靛玉紅HPLC圖譜

2.4.4 穩定性試驗 精密稱取15010821批供試品溶液1.001 9g，室溫放置，在不同放置時間分別取樣測定，按上述色譜條件進行分析，結果表明供試品溶液在8h內穩定，見表4。

2.4.5 回收率試驗 分別精密稱取供試品適量，精密加入定量的靛玉紅對照品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進行分析，進行回收率測定，結果見表5。

2.4.6 精密度試驗 精密吸取15010821批溶液，連續進樣6次，RSD=0.23%,表明該儀器精密度良好。測定結果見表6。

圖4 陰性對照HPLC色譜

時間(h)樣品面積RSD(%)05．908810．6725．8993145．9532065．9908685．97126

3 討論

根據上述結果可以看出：大青葉配方顆粒中靛玉紅含量采用Thermo ODS-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)分離，檢測波長為289nm，流動相為甲醇-水(75∶25)，流速1.0mL/min，靛玉紅在0.01～0.06μg范圍內與峰面積呈良好線性關系，r=0.999 9，平均回收率為101.3%(RSD=1.3%,n=9)。所以大青葉配方顆粒在進行靛玉紅含量檢測時可以采用高效液相色譜法進行測定。

表5 樣品回收率試驗結果

表6 精密度試驗結果

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010:27.

[2] 趙國平，戴慎，陳仁濤.中國大辭典[M].第2版.上海：上海科學技術出版社，2006:165-166.

(責任編輯：魏 曉)

Verification Method of the Content of Indirubin in Folium Lsatidis Granules

Wang Xiaomin,Wang Panpan,Xue Yanxu,Lu Qianqian,Geng Shuo,Yuan Yalan

(Shineway Pharmaceutical Group Co.，ltd，Hebei 051430,China)

Objective:HPLC method for determining the suitable detection method of indirubin in Folium Isatidis granules.Methods:Determination of indirubin content by HPLC method,Thermo ODS-C18column(4.6mm×250mm，5μm); Methanol-water(75∶25) as mobile phase; The detection wavelength was 289nm.Validation of Folium Granule on 3 batches of content determination method.Results and Conclusion:the determination of indirubin in Folium Isatidis granules can be Indigo by HPLC method.

Folium Isatidis Granules；Indirubin；HPLC；Contented Determination

2015-07-01

王小敏(1981-)，女，神威藥業集團有限公司助理工程師，研究方向為化學藥品檢驗。

R284.1

A

1673-2197(2015)23-0024-03

10.11954/ytctyy.201523010