OHAA安全性毒理學評價

陸健康 李述剛 唐 翠 艾明艷

(南疆特色農產品深加工兵團重點實驗室， 新疆 阿拉爾 843300)

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OHAA安全性毒理學評價

陸健康 李述剛 唐 翠 艾明艷*

(南疆特色農產品深加工兵團重點實驗室， 新疆 阿拉爾 843300)

目的：研究新型保鮮材料環氧乙烷高級脂肪醇(OHAA)的毒理學安全性。方法：通過小鼠急性毒性試驗、小鼠精子畸形試驗及小鼠骨髓細胞微核試驗對OHAA進行毒理安全性評價。結果：OHAA對昆明小鼠的急性經口LD50>21. 5 g/(kg·bw)，判屬無毒物；OHAA在5. 0 g/(kg·bw)劑量范圍內，不會造成小鼠精子畸形；骨髓微核發生率與陰性對照組比較差異不顯著(p>0. 01)。結論：OHAA屬實際無毒，且在一定劑量范圍內，小鼠精子畸形及小鼠骨髓細胞微核試驗結果均為陰性，表明OHAA可以作為一種潛在新型保鮮材料在果蔬和禽蛋保鮮中應用。

OHAA； 安全性評價； 保鮮

我國是農畜產品生產大國，農畜產品不僅種類繁多而產量很大，因此對農畜產品進行貯藏保鮮具有重要意義。目前所用的保鮮方法主要有輻照保藏法、低溫冷凍保藏法、氣調法及涂膜保鮮法等，前3種方法存在技術難度大成本高等缺點而使其大規模應用受到了限制；而涂膜保鮮法操作簡便、成本低廉，已經成為近年來農產品保鮮技術領域的研究熱點[1]。目前農產品中常用的涂膜保鮮材料有多糖類、蛋白質類、脂質類等物質[2]，而這些涂膜保鮮材料成本高難以大規模推廣使用。環氧乙烷高級脂肪醇(Oxyethyene higher aliphatic aleohol，簡稱OHAA)是一種無味無臭白色蠟樣有機涂膜保鮮材料，涂膜于蛋品可以顯著抑制蛋內水分散失及外界微生物的入侵從而延長蛋品的貨架期[3-4]，此外OHAA還可用于果蔬，如櫻桃、葡萄、小白杏、紅棗等的保鮮[5-7]。我國食品安全性毒理學評價程序應根據GB15193.1-2003《食品安全性毒理學評價程序》標準來進行評價，該標準適用于評價食品生產、加工、保藏等過程中所涉及的可能對健康造成危害的化學、生物和物理因素的安全性，其評價試驗包括4個階段，即：第1階段(急性毒性試驗)、第2階段(遺傳毒性試驗、傳統致畸試驗、30天喂養試驗)、第3階段(亞慢性毒性試驗)、第4階段(慢性毒性試驗包括致癌試驗)[8]。本研究所使用的試驗材料OHAA是我國首次采用自主知識產權研發的保鮮材料[9]，依據《食品安全性毒理學評價程序》標準要求需要對其進行安全性毒理學評價，因此本研究根據該標準所規定的分階段試驗原則對OHAA安全性進行評價，以期為OHAA在果蔬和禽蛋保鮮中的應用提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白色膏狀物OHAA由課題組成員合成[9]。

健康昆明種小白鼠(SPF級)購買于新疆實驗動物研究中心，飼養溫度為20±2 ℃，適應飼養5～7 d后進行灌胃，許可證號：SCXK(新)2003-0002。

甲醇(AR)、伊紅(AR)、Giemsa染液購買于天津光復精細化工研究所；小牛血清購買于浙江天杭生物科技有限公司；注射用環磷酰胺購買于山西普德藥業有限公司。

1.2 儀器與設備

BSA2202S電子天平 賽多利斯科學儀器有限公司；DMWBA 200VC型顯微鏡 上海儀圓光學儀器；101型電熱鼓風干燥箱 北京市永光明醫療儀器廠；電熱恒溫水浴鍋 上海博訊實業有限公司醫療設備廠；移液槍、解剖器械等。

1.3 方法

1.3.1 OHAA溶液的制備

準確稱取一定量OHAA并加入適量蒸餾水，在45 ℃水浴鍋中加熱溶解配成一定濃度的OHAA溶液，待其恢復室溫后迅速進行灌胃。

1.3.2 急性毒性試驗(霍恩氏法)[10]

選用體重為20±2 g健康昆明種小白鼠50只，隨機分成5組(10只/每組，雌雄各半)，即2. 15、4. 64、10. 00、21. 5 g/(kg·bw)劑量組和對照組。試驗組給予OHAA溶液，對照組給予蒸餾水，灌胃量0. 2 mL/10 g·bw，一次性經口灌胃給藥，給藥前禁食16 h，不限制飲水，連續觀察14 d，記錄中毒表現和死亡情況。

1.3.3 小鼠精子畸形試驗[11]

選用體重25. 0～35. 0 g健康性成熟雄性昆明種小白鼠25只，隨機分成5組，即2. 5、5. 0、10. 0 g/(kg·bw)劑量組和陰性對照組及陽性對照組。試驗組給予OHAA溶液，陰性對照組給予蒸餾水，陽性對照組給予40 mg/(kg·bw)環磷酰胺，以上各組每日灌胃1次，連續5天，灌胃量0. 2 mL/10 g·bw。末次灌胃后第30 d處死，取附睪進行常規制片、染色，每只動物計數1000個結構完整的精子，計算畸變精子發生率，并進行統計學處理(采用Wilcoxon秩和檢驗)。

1.3.4 骨髓細胞微核試驗[12]

選用體重20. 0～25. 0 g健康昆明種小白鼠50只，隨機分成5組(10 只/每組，雌雄各半)，即2. 5、5. 0、10. 0 g/(kg·bw)劑量組和陰性對照組及陽性對照組。試驗組給予OHAA溶液，陰性對照組給予蒸餾水，陽性對照組給予40 mg/(kg·bw)環磷酰胺，灌胃量0.2 mL/10 g·bw。24 h間隔灌胃，末次給藥6 h后處死，取股骨骨髓按常規制片染色，每只動物計數1 000個嗜多染紅細胞，計算嗜多染紅細胞數的微核率，并進行統計學處理(采用u檢驗)。

2 結果與分析

2.1 急性毒性試驗

在試驗觀察期內，各組動物均未見任何中毒癥狀，無死亡，故本試驗中小鼠急性經口LD50>21. 5 g/(kg·bw)。根據毒性分級，本受試物屬無毒級。

2.2 小鼠精子畸形試驗

小鼠精子畸形試驗結果見表1，由此可知陰性對照組的精子畸形率1. 80%，陽性對照組的精子畸形率為5. 27%，根據統計學分析，陽性對照組的精子畸形率與陰性對照組比較差異極顯著(p<0. 01)。低、中、高3 個劑量組的精子畸形率分別為1. 76%、2. 16%、2. 88%，由此可知各劑量組精子畸形率隨劑量的升高而略微上升，但均處于正常范圍(正?；兟蕿?. 8%～3. 4%)[11]，根據統計學分析，高劑量組的精子畸形率與陰性對照組比較差異極顯著(p<0. 01)，而中劑量組和低劑量組的精子畸形率與陰性對照組比較差異不顯著(p>0. 01)。由此可知，在5. 0g/kg劑量范圍內，OHAA不會造成昆明鼠精子畸形。

表1 小鼠精子畸形試驗結果

2.3 小鼠骨髓細胞微核試驗

小鼠骨髓細胞微核試驗結果見表2，由此可知各劑量組微核率與陰性對照組比較差異不顯著(p>0. 01)，陽性對照組與陰性對照組比較差異極顯著性(p<0. 01)。可見OHAA無致小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核形成的作用。

表2 小鼠骨髓微核試驗結果

3 結論

本研究依據《食品安全性毒理學評價程序》對保鮮材料OHAA進行了安全性評價。OHAA對2種性別的SPF級昆明種小白鼠急性毒性試驗，一次性經口灌胃給藥最大劑量為21. 5g/(kg·bw)，連續觀察14d，各組動物均未見任何中毒癥狀，無死亡，根據毒性分級，本受試物屬無毒級；小鼠精子畸形試驗中，各劑量組精子畸形率均處于正常范圍，在5. 0g/(kg·bw)劑量范圍內，OHAA不會造成小鼠精子畸形；小鼠骨髓細胞微核試驗中，OHAA無致小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核形成的作用。以上結果表明OHAA可以作為一種潛在新型保鮮材料在果蔬和禽蛋保鮮中應用。

[1] 葉云，何英姿．涂膜保鮮技術應用于果蔬保藏的研究[J]．食品科技，2009，34(6):243-246.

[2] 連麗娜，張平，紀淑娟，等．果蔬可食性涂膜保鮮研究現狀與展望[J]．保鮮加工，2003，3(4):14-16.

[3] 馬美湖．我國蛋與蛋制品加工重大關鍵技術篩選研究報告(二)[J]．中國家禽，2004，26(24):1-5(12).

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[6] 于軍，馬美湖，侯旭杰，等．OHAA涂膜保鮮劑在小白杏貯藏保鮮中的應用研究[J]．食品科技，2011，36(11)：48-54.

[7] 于軍，高翔，侯旭杰，等．OHAA在圓脆鮮棗涂膜保鮮中的應用研究[J]．食品工業科技，2011，32(7)：371-374.

[8] 熊偉．農產品保鮮新材料環氧乙烷高級脂肪醇合成研究[D]．武漢：華中農業大學，2010.

[9] 中華人民共和國衛生部.GB15193.1-2003 食品安全性毒理學評價程序[S]//中國標準出版社第五編輯室.微生物和生物醫學實驗室常用標準匯編(下).北京：中國標準出版社，2010:349-356.

[10] 中華人民共和國衛生部.GB15193.3-2003 急性毒性試驗[S]//中國標準出版社第五編輯室.微生物和生物醫學實驗室常用標準匯編(下).北京：中國標準出版社，2010:365-380.

[11] 中華人民共和國衛生部.GB15193.7-2003 小鼠精子畸形試驗[S]//中國標準出版社第五編輯室.微生物和生物醫學實驗室常用標準匯編(下).北京：中國標準出版社，2010:403-406.

[12] 中華人民共和國衛生部.GB15193.5-2003 骨髓細胞微核試驗[S]//中國標準出版社第五編輯室.微生物和生物醫學實驗室常用標準匯編(下).北京：中國標準出版社，2010:393-396.

Toxicological Assessment of OHAA

Lu Jiankang Li Shugang Tang Cui Ai Mingyan*

(Xinjiang Production & Construction Group Key Laboratory of Agricultural Products Processing in Xinjiang South, Tarim University, Alar, Xinjiang 843300)

Objective: To study the toxicological safety of a new fresh keeping material OHAA. Methods: Acute toxicity test, Mice sperm abnormality test and bone marrow cell micronucleus test were taken for toxicological evaluating on the safety of OHAA. Results: Acute toxicity test in mice demonstrated non-toxicity of OHAA due to its LD50more than 21. 5 g/(kg·bw); OHAA would not cause the mouse sperm malformation in the dose range of 5. 0 g/(kg·bw); The incidences of mouse bone marrow micronucleus in all OHAA dose groups did not exhibit a significant difference (p>0. 01)ascomparedwiththecontrolgroup.Conclusion:NophenomenaofmousedeathobservedinthisexperimentsuggestedthatOHAAhadnoacutetoxiceffects,bothMicespermabnormalitytestandbonemarrowcellmicronucleustestwerenegativeinacertaindoserange,theresultindicatedthatOHAAcouldbeappliedinthepreservationoffruits,vegetablesandeggsasapotentialnewpreservationmaterial.

OHAA； safety evaluation； keeping-fresh

2014-06-25

陸健康(1983-)，男，講師，碩士，主要從事食品質量與安全方向的教學與研究工作。 E-mail:417254863@qq.com

*為通訊作者 E-mail: 1019698554@qq.com

1009-0568(2015)01-0141-04

R

BDOI：10.3969/j.issn.1009-0568.2015.01.025