狹葉獐牙菜化學成分研究

陳麗元，李水仙，夏從龍*

（1.大理學院藥學與化學學院，云南大理 671000；2.大理學院基礎醫學院，云南大理 671000）

狹葉獐牙菜（Swertia angustifoliaBuch.）屬于龍膽科獐牙菜屬植物，分布于云南、廣西、貴州等地，常生長于海拔為1 500～3 300 m的田邊、草坡及荒地，民間常用全草代替青葉膽入藥，具有清熱解毒、健胃、除濕利膽的功效，用于治療黃疸型肝炎、膽囊炎等疾病〔1-2〕。由于目前對狹葉獐牙菜研究較少，為了解其藥用成分的結構特點，我們對狹葉獐牙菜的主要化學成分進行了初步的研究，從95%乙醇提取物的氯仿部位分離鑒定了4個化合物。分別鑒定為齊墩果酸（1）、烏蘇酸（2）、羽扇豆醇（3）、β-羥基-11α，12α-環氧齊敦果-28，13β-內酯（4）。見圖1。

圖1 化合物1～4的化學結構

1 儀器與材料

1.1 實驗材料 實驗材料于2008年10月采自云南省大理市鳳陽橋后山，由藥學與化學學院夏從龍教授鑒定為龍膽科狹葉獐牙菜（Swertia angustifoliaBuch.）的全草。

1.2 儀器與試劑 Bruker AM-400型核磁共振波譜儀，四甲基硅烷（TMS）為內標；瑞士Büchi R-210型旋轉蒸發儀；柱層析硅膠、薄層層析板硅膠G和GF254（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20（Pharmacia公司）；其他化學試劑均為化學純。顯色方法為10%硫酸乙醇溶液處理后烘烤顯色或碘蒸氣熏蒸顯色。

2 提取與分離

狹葉獐牙菜自然晾干（9.8 kg），粉碎后用95%乙醇回流提取，每次3 h，共提取3次，提取液合并濃縮得浸膏，加水分散后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯分配，氯仿部位濃縮（150 g），以少量粗硅膠拌樣后用200～300目硅膠柱層析，石油醚-丙酮混合溶劑（30∶1，20∶1，15∶1，10∶1，5∶1，1∶1）梯度洗脫，得到5個組分FrA～E。組分FrA反復經硅膠柱層析（石油醚/氯仿、氯仿/丙酮）洗脫、凝膠柱Sephadex LH-20層析，得到化合物1（11.584 8 g）、化合物2（20 mg）、組分FrB經反復硅膠柱層析（石油醚/丙酮、石油醚/氯仿）洗脫、凝膠柱Sephadex LH-20純化得到化合物3（15 mg）、化合物4（15 mg）。

3 實驗結果

化合物1：C30H48O3；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：183.33（C-28），143.60（C-13），122.64（C-12），79.04（C-3），55.22（C-5），47.64（C-9），46.53（C-19），45.88（C-17），41.59（C-14），40.98（C-18），39.28（C-8），38.76（C-4），38.40（C-1），37.09（C-10），33.80（C-21），33.07（C-29），32.61（C-22），32.44（C-7），30.68（C-23），28.10（C-20），27.69（C-2），27.18（C-15），25.94（C-27），23.58（C-16），23.40（C-30），22.92（C-11），18.30（C-9），17.15（C-26），15.54（C-24），15.32（C-25）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.28（1H，t，J=3.47 Hz，12-H），3.22（1H，dd，J=4.07，5.23 Hz，3-H），2.82（1H，dd，J=4.07，4.68 Hz，18-H），1.13，0.99，0.93，0.91，0.90，0.77，0.75（各3H，s，-CH3×7）。以上數據與文獻〔3〕報道對比，鑒定化合物1為齊墩果酸。

化合物2：C30H48O3；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：181.95（C-28），139.82（C-13），123.08（C-12），79.01（C-3），55.50（C-5），53.15（C-18），47.99（C-17），47.6（C-9），42.56（C-14），41.35（C-8），40.66（C-19），38.94（C-20），38.88（C-4），38.23（C-1），37.64（C-10），37.56（C-22），34.58（C-7），31.05（C-21），29.10（C-23），28.96（C-15），28.38（C-2），23.59（C-16），23.40（C-11），22.90（C-27），21.93（C-30），18.22（C-6），17.22（C-26），17.02（C-24），16.66（C-29），15.38（C-25）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.29（1H，s，H-12），3.24（1H，m，H-3），2.84（1H，d，J=15.05 Hz，H-18），1.28，1.15，0.88，0.79，0.77（3H，s，-CH3×5），1.00（3H，d，J=6.61 Hz，H-30），0.94（3H，d，J=7.41 Hz，H-29）。以上數據與文獻〔4〕報道對比，鑒定化合物2為烏蘇酸。

化合物3：C30H48O；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：150.89（C-20），109.38（C-29），80.56（C-3），55.40（C-5），50.35（C-9），48.30（C-18），48.01（C-19），43.00（C-17），42.84（C-14），40.86（C-8），40.01（C-22），39.82（C-1），38.27（C-4），38.07（C-13），37.10（C-10），35.59（C-16），34.23（C-7），29.72（C-21），27.98（C-23），27.45（C-2），26.95（C-15），25.19（C-12），20.96（C-11），19.30（C-30），18.28（C-6），18.01（C-28），16.18（C-26），15.99（C-25），15.55（C-24），14.53（C-27）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：4.67（1H，d，J=2.07 Hz，H-29），4.56（1H，d，J=2.08Hz，H-29），3.22（1H，dd，J=4.07，5.23Hz，3-H），2.36（1H，m，H-19），1.25，1.03，0.97，0.94，0.86，0.83，0.79（各3H，s，7×CH3）。以上數據與文獻〔5〕報道對比，鑒定化合物3為羽扇豆醇。

化合物4：C30H46O4；白色粉末（氯仿）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：179.35（C-28），87.53（C-13），78.77（C-3），57.10（C-12），54.60（C-5），52.73（C-11），50.71（C-9），49.61（C-18），43.86（C-17），41.30（C-8），40.53（C-14），38.86（C-4），38.15（C-1），37.76（C-19），36.47（C-10），34.29（C-21），33.19（C-29），31.45（C-20），31.10（C-7），27.78（C-23），27.00（C-22），26.79（C-2），26.70（C-15），23.59（C-30），21.27（C-16），20.04（C-26），18.84（C-27），17.58（C-6），17.18（C-25），15.09（C-24）。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.27（1H，m，3-H），3.05（2H，t，J=5.30 Hz，H-11，12），2.34（1H，dd，J=3.41，2.79 Hz，H-18），2.15（1H，m，H-16），1.92（1H，m，H-19），1.57（1H，s，H-19），1.12，1.08，1.04，1.01，0.94，0.82（各3H，s，-CH3×6）。以上數據與文獻〔6〕報道對比，鑒定化合物4為3β-羥基-11α，12α-環氧齊墩果-28，13β-內酯。

4 討論

青葉膽為龍膽科獐牙菜屬植物青葉膽的干燥全草，味苦、微寒、歸肝膽經，具有清肝利膽、清熱利濕的功效，用于黃疸尿赤、熱淋澀痛。具有保肝、解毒、降酶、抗菌消炎等多種藥理作用。近年來青葉膽被大量采挖，資源逐年減少，但該屬其他種資源豐富，民間用其同屬植物代替青葉膽，狹葉獐牙菜就是其中之一，關于狹葉獐牙菜的化學成分研究報道較少，本研究從狹葉獐牙菜中分離得到的4個化學成分中，化合物1齊墩果酸的含量最多，據文獻報道齊墩果酸能抑制環磷酰胺所致的肝細胞培養上清液谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶及乳酸脫氫酶活性增強，肝細胞MTT（噻唑藍）值減小，同時可降低谷氨酸誘導的海馬神經元〔Ca2+〕升高，對谷氨酸誘導的海馬神經元損傷有一定的保護作用〔7-10〕。這為狹葉獐牙菜能代替青葉膽作為治療肝炎類藥物使用提供了依據。

〔1〕中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志:62卷〔M〕.北京：中國科學出版社，1988:389.

〔2〕云南省怒江州衛生局.怒江中草藥〔M〕.昆明:云南科技出版，1991：224.

〔3〕周洪波，王峰，房志堅.金鈕扣中三萜類化學成分研究〔J〕.中國中藥雜志，2011，36（15）：2096-2098.

〔4〕劉普，段宏泉，潘勤，等.委陵菜三萜成分研究〔J〕.中國中藥雜志，2006，31（22）：1875-1879.

〔5〕嚴啟新，李萍，王迪.雞血藤脂溶性化學成分的研究〔J〕.中國藥科大學學報，2001，32（5）:336-338.

〔6〕肖懷，陸陽，何正春，等.觀賞獐牙菜中的三萜內酯成分研究〔J〕.中草藥，2007，38（11）：1619-1622.

〔7〕宮新江，丁虹，邱銀生，等.齊墩果酸抗環磷酰胺所致大鼠肝細胞損傷作用〔J〕.醫藥導報，2006，25（11）：1114-1116.

〔8〕張明發，沈雅琴.齊墩果酸和熊果酸保肝藥理作用的研究進展〔J〕.抗感染藥學，2012，9（1）：13-19.

〔9〕宋小丹，馬海明，韓思瑩，等.齊墩果酸對谷氨酸誘導神經細胞損傷的影響〔J〕.哈爾濱醫科大學學報，2007，41（1）：13-15.

〔10〕張琳琳，張素玲，張玉蓮，等.齊墩果酸對快速老化小鼠海馬神經元APP/PS1基因表達的影響〔J〕.中國老年學雜志，2014（21）：6089-6091.