食品中金黃色葡萄球菌的檢測分析

逯 巖

撫順市疾病預防控制中心，遼寧撫順 113006

金黃色葡萄球菌是人類生活中最常見的致病菌，其廣泛存在于自然界中，尤其是食品。金黃色葡萄球菌引發毒素型食物中毒的三大主因之一[1]。食品中超出一定數量的金黃色葡萄球菌就會導致食用者出現嘔吐、腹瀉、發燒，甚至死亡的中毒事件[2]。隨著食品安全的逐步升級，對食品中金黃色葡萄球菌的檢測成為食品檢測中的重要內容。近些年科學技術的不斷發展，人們對金黃色葡萄球菌的檢測方法不斷更新，市面上涌現出多種方法進行金黃色葡萄球菌的檢測[3]。2013年6月—2014年6月采用對比方式對紙片檢測法進行分析。

1 材料與方法

1.1 實驗材料和設備

實驗材料選取該地市場和超市的肉制品、速凍食品及涼菜三大類食品，各20。平板計數瓊脂、B-P培養基、增菌劑（卵黃亞碲酸鉀）、金黃色葡萄球菌快速檢驗測試片、磷酸緩沖稀釋液、鮮兔血漿、抗凝劑（EDTA）及革蘭氏染液等。主要設備有：恒溫培養箱及水浴箱、振蕩器、顯微鏡、移液槍、天平、無菌工作臺、無菌均質杯等。

1.2 實驗方法

1.2.1 制備樣品 樣品的制備依GB4789.10-2010標準中關于B-P平板計數法操作：無菌狀態下取25 g樣品放入裝有225 mL磷酸緩沖稀釋液的無菌均質杯中，設定轉速為8000 r/min均質120 s，制成固樣質量比為1:10的樣品勻液，用平板計數進行測定，每稀釋度操作2次重復測定。

1.2.2 金黃色葡萄球菌的紙片法 用移液槍將樣品勻液1 mL垂滴于掀開上層膜的測試片正中，緩慢蓋下上層膜，令接觸面里無氣泡，并專用壓板輕壓壓板液，使樣液均勻覆蓋于圓形培養面，靜置試片至少60 s，待膠體凝固于34～36℃或36～38℃條件下培養22～26 h。如均為暗紫紅色菌落或無菌落，則測試完成；若有黑或藍綠色可疑菌落，則在室溫為34～36℃或36～38℃條件下，繼續加入確認反應片培養1～3 h并觀察記錄結果。金黃色葡萄球菌計為全部暗紫紅色菌落；施用確認片后，計數全部有或沒有菌落的粉紅色暈圈，無粉紅暈圈的菌落經判定為革蘭氏桿菌或其他，不計數。

1.2.3 金黃色葡萄球菌的B-P平板檢測法 可參見中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準SNT0172-2010有關進出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法的相關流程[4]。

1.3 統計方法

采用SPSS 13.0統計軟件對實驗結果進行相關及差異性分析，比較這兩種方法的異同。

2 實驗結果及分析

2.1 金黃色葡萄球菌檢出率

肉制品類檢出率分別為70%、40%；速凍食品中40%、10%；涼菜類均為20%。不同類別產品中金黃色葡萄球菌的檢出率與加工流程、流通渠道、包裝和產品特性等有不同程度的關系。肉類金黃色葡萄球菌檢出率高可能與其加工流程不進行滅菌處理等操作不衛生有關。此外，肉類銷售暴露在外界環境中時間較長，易受金黃色葡萄球菌的污染。速凍食品其相對濕潤的環境適宜金黃色葡萄球菌的繁殖，運輸及銷售環節也容易造成再污染。

兩種方法的符合率：肉制品類為100%、速凍食品中為80%、70%、涼菜類70%、50%，其原因可能是食品基質差異性造成。

2.2 統計分析

使用SPSS 13.0統計軟件對紙片法與B-P平板計數法的實驗結果進行樣品t檢驗F檢驗對比，結果見表1。

表1 紙片法及B-P平板計數法的相關性及顯著性

全部樣品顯著概率P＞0.05，檢測無差異。肉類相關系數近0.89，速凍食品及涼菜類相關系數均在0.95以上，總相關系數達0.905，說明兩種檢測法線性密切相關。由回歸方程的假設檢驗可知，F分布的顯著概率均為零，說明兩變量間的具有極為顯著的線性相關。

2.3 兩種檢測的其他指標

兩種方法的其他指標評價，詳見表2。

表2 紙片法和B-P平板計數法其他指標比較

從易操度及勞動強度看，紙片法前期預制的培養基系統可省去大量繁瑣準備工作，培養后僅對疑似菌落進行確認反應處理即可進行最終判定，與B-P平板計數法相比易操作且勞動強度小。B-P平板計數法需涂布瓊脂平板培養48 h的實驗流程，再對球菌菌落施行兔血漿凝固酶實驗，手續繁瑣且工作量大。

從計數準確度看，紙片法在接入菌液后，采用專用壓板按壓樣液，可控制其均勻分布在計數格內，極少出現蔓延菌落生長現象。計數時僅需單位方格內的菌落與總方格數乘積即可實現。操作環節少了人為干預，流程作業標準，誤差小。從檢測時長看，紙片法接種后培養22～26 h，對實施確認反應片的菌落培養1～3 h，耗時不超過29 h；B-P平板計數檢測法從接種培養到血漿凝固酶驗證環節，所耗時長為72～96 h。前者極大縮短了檢測時長[5]。

從培養基選擇性看，紙片檢測的60個樣品中，可疑菌落較多，紫紅色菌落相對較少。加確認片反應后，極少可疑菌落呈粉紅色暈圈，故可判定這些黑色菌落基本為雜菌，這表明紙片法培養的了過多雜質，選擇性差。

3 討論

3.1 檢測結果分析

根據統計分析表明，二者線性相關關系極為顯著，并無明顯差異且符合良好。二者在檢測結果上并無實質差異，表現的一致性較好。兩種方法的其他指標對比顯示，紙片法的易操性、勞動強度、計數準確度及計數時長均優于B-P平板計數檢測法。

3.2 兩種檢測法的劣勢

二者的缺點均體現在對金黃色葡萄球菌的選擇效果較弱，易受雜菌干擾所造成的判讀難方面。紙片法判讀過程中發現有些較深的紫紅菌落與較淺的黑色菌落色系極為接近，很難分辨清楚，容易在視覺上產生顏色識別判定錯誤的問題。這一現象在肉類及速凍食品表現極為突出。這一點在早前的一些相關文獻中可以得到證實。因此，需要進一步研發更具選擇性的培養基是提升檢測的準確性的緊要課題。

3.3 比較結果

盡管紙片法成本花費高，但隨著科技的發展，國內也將能提供與國外紙片相媲美的低成本紙片，且由于紙片法的綜合性與B-P平板計數檢測法相比更易操作、省時省力，因此值得被廣泛應用于未來實際檢測行業及部門中。

[1]劉海卿，佘之蘊，陳丹玲，等.金黃色葡萄球菌三種定量檢驗方法的比較[J].食品研究與開發，2014（13）：113-115.

[2]柳敦江.王鵬.一種快速鑒定豬舍空氣樣品中金黃色葡萄球菌的方法[J].豬業科學，2013（5）：96-97.

[3]萬婧，周向陽，張曉峰，等.雙重PCR-DHPLC技術快速檢測水產品中金黃色葡萄球菌[J].食品科學，2013（6）：119-203.

[4]胡守奎，胡萬富，撒楠.應用測試片法快速檢測食品中的金黃色葡萄球菌[J].安徽預防醫學雜志，2011（5）：45-46.

[5]李環，劉威，鄒大陽.基于顏色判定的DNA環介導恒溫擴增法快速檢測金黃色葡萄球菌[J].軍事醫學，2013（12）：104-105.