肺纖維化患者血清及誘導痰肺表面活性蛋白水平測定及意義

吳友茹，陳明勇，朱 靜

(四川省綿陽市中心醫院呼吸內科 621000)

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·論 著·

肺纖維化患者血清及誘導痰肺表面活性蛋白水平測定及意義

吳友茹，陳明勇△，朱 靜

(四川省綿陽市中心醫院呼吸內科 621000)

目的 檢測特發性肺纖維化患者急性加重期血清及誘導痰肺表面活性蛋白D(SP-D)水平并探討其臨床治療意義。方法 選擇特發性肺纖維化患者急性加重期住院治療26例，分別收集納入患者入院時及治療后病情緩解血清及誘導痰液標本，采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清及誘導痰SP-D水平。選擇42例健康人群作為對照組。結果 特發性肺纖維化患者急性加重期及病情緩解期血清SP-D平均水平分別為(196±82)、(125±69)ng/mL，健康對照組為(96±47)ng/mL，誘導痰SP-D平均水平為(153±71)、(106±64)ng/mL，急性加重期與緩解期及健康對照組SP-D水平比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論 血清SP-D檢測可作為特發性肺纖維化患者急性加重診斷的生物學指標。

特發性肺纖維化； 急性加重期； 肺表面活性蛋白D； 血清； 誘導痰

特發性肺纖維化(IPF)是最常見的、致死性的間質性肺疾病，是一種病因不明，局限于肺部，慢性進行性纖維化間質性肺炎的一種特殊形式，組織病理學和/或高分辨計算機層面X線成像術顯示為普通間質性肺炎特征[1]。新近觀點認為，IPF的發生是由于尚未明確的刺激導致序貫性肺損傷，反復過度損傷修復最終導致肺纖維化。肺表面活性蛋白D(SP-D)為肺高度特異性蛋白，參與免疫、炎癥及過敏反應調節，近年來國內、外進行的多項研究證明SP-D與慢性氣道炎癥的形成有關[2-3]。本研究旨在通過檢測IPF急性加重期患者血清及誘導痰液標本中SP-D水平，探討血清及誘導痰液標本SP-D水平變化及能否作為IPF患者嚴重程度檢測的一項生物學指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年6月至2014年6月在綿陽市中心醫院呼吸內科因IPF急性加重(AEIPF)住院的患者共26例，其中男13例，女13例，年齡51～67歲，平均(62±6)歲。IPF診斷標準采用2011年3月美國胸科協會/歐洲呼吸協會提出的IPF診斷標準[1]：所有入選患者都行肺部HRCT掃描，HRCT表現為典型的UIP模式，雙側肺部病灶表現主要分布在胸膜下及基底部的網格狀陰影、蜂窩肺、牽拉性支氣管擴張、肺結構扭曲及少磨玻璃影。排除其他已知原因的間質性肺疾病，如家庭或職業環境暴露，結締組織疾病和藥物毒性等。AEIPF診斷標準：(1)過去或現在診斷IPF;(2)1個月內發生無法解釋的呼吸困難加重；(3)低氧血癥加重或氣體交換功能嚴重受損；(4)新出現的肺泡浸潤影，排除肺部感染、肺栓塞、氣胸及心力衰竭等。所有患者入院后都給予糖皮質激素抗炎聯合乙酰半胱氨酸、氧療、肺康復治療，對感染誘發加重的患者同時予抗感染等治療，病情緩解好轉出院時，收集緩解期血清標本。42例健康對照者來自醫院的工作人員及門診體檢者，均無呼吸道疾病史及服用藥物，所有對照者肺功能檢查均正常。

1.2 儀器與試劑 人SP-D酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒購于上海豐壽實業有限公司。

1.3 方法

1.3.1 外周血標本的采集與處理 所有AEIPF患者入院時及緩解出院時清晨采肘靜脈空腹血液標本5 mL各1份，靜脈血采集后室溫靜置30 min，3 500 r/min離心10 min，分離血清，于-70 ℃冰箱保存。測定前將樣本置于室溫復融，混勻，再次離心，取上清液測定。采用ELISA測定血清標本中SP-D水平。操作嚴格按說明書進行。

1.3.2 誘導痰的采集與處理 患者入院后清潔漱口后，霧化吸入3%高滲性鹽水5～8 mL，誘導咳痰，將咳出的痰液置于培養皿中。向痰液內加入4倍體積的0.1%的二硫蘇糖醇，渦旋振蕩10 min；再加入等量的磷酸鹽緩沖液振蕩5 min，2 000 r/min離心10 min，取上清液分裝，于-70 ℃冰箱保存。采用ELISA測定痰液標本中SP-D水平。操作嚴格按說明書進行。

2 結 果

2.1 IPF患者誘導痰SP-D水平比較 AEIPF患者誘導痰液中SP-D水平為(153±71)ng/mL，緩解期患者誘導痰液中SP-D水平為(106±64)ng/mL，急性加重期較緩解期高，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 3組血清SP-D水平比較 IPF患者急性加重期血清SP-D水平為(196±82)ng/mL，緩解期血清SP-D水平為(125±69)ng/mL，經治療后血清SP-D水平下降，治療前、后血清SP-D水平比較差異有統計學意義(P<0.05)。健康對照組血清SP-D水平為(96±47)ng/mL，AEIPF患者血清SP-D水平顯著高于健康對照組，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

既往臨床研究中發現，大部分慢性肺疾病患者血清SP-D水平相對于健康對照組有增高，這提示血清SP-D水平是慢性肺部疾病的血清學標志。本研究結果發現，健康對照組和IPF患者組血清SP-D水平具有明顯差異，IPF患者血清SP-D水平明顯高于健康對照組。Nakamura等[4]對10例AEIPF患者進行180 d隨訪研究，并對入院當天血清Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6)及SP-D水平進行檢測，研究發現入院當天血清SP-D水平越低的患者其平均生存時間越長，認為AEIPF患者血清SP-D水平可作為AEIPF患者預后評估有價值的生物學標志。Huang等[5]對日本IPF患者研究發現，聯合檢測血清KL-6、SP-A和SP-D對IPF患者的診斷及預后判斷意義更大。

本研究也發現，AEIPF患者血清SP-D水平在入院當天較恢復期出院時明顯升高，可能與在院治療使用糖皮質激素有關。同樣國外有研究證實，IPF患者在疾病惡化時血清SP-D水平會升高，當全身應用糖皮質激素后其水平會下降[6]。Janssen等[7]進一步研究發現，血清SP-D水平可以作為結節病及IPF患者疾病嚴重程度及預后的生物學標志，死亡患者較生存下來的IPF患者SP-D水平要高，且血清SP-D水平和激素治療的效果呈平行關系。SP-D在肺主動防御中起核心作用，能夠增強抗原清除，調和過敏反應，有利于炎癥消退。Kucejko等[8]對27例結節病、7例IPF及9例過敏性肺炎患者支氣管肺泡灌洗液用ELISA檢測SP-D、Clara細胞分泌的蛋白-16和白細胞介素-10水平，發現SP-D水平為76.49 ng/mL，并發現其水平與患者第1秒用力呼氣容積及肺活量檢測水平呈負相關。Bonella和Costabel[9]同樣對結締組織相關性間質性肺疾病血清源自肺泡上皮蛋白KL-6、SP-D及SP-A等血清學標志物研究發現其血清水平升高或支氣管肺泡灌洗液水平升高能反映肺纖維化的發展，以及肺功能損傷和預后判斷。

本研究對IPF患者急性加重期及緩解期血清SP-D水平檢測證實，AEIPF患者血清SP-D水平明顯高于健康對照人群及恢復期患者，監測血清SP-D水平為AEIPF病情及療效評價提供了一個新的生物學檢測指標。

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[4]Nakamura M,Ogura T,Miyazawa N,et al.Outcome of patients with acute exacerbation of idiopathic interstitial fibrosis (IPF) treated with sivelestat and the prognostic value of serum KL-6 and surfactant protein D[J].Related Citations,2007,45(6):455-459.

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[9]Bonella F,Costabel U.Biomarkers in connective tissue disease-associated interstitial lung disease.Semin[J].Respir Crit Care Med,2014,35(2):181-200.

The levels and clinical significance of serum and induced sputum sputum pulmonary surfactant protein inpatients with pulmonary fibrosis

WUYou-ru,CHENMing-yong△，ZHUJing

(DepartmentofRespiratoryMedicine，CenterHospitalofMianyang,Mianyang，Sichuan621000,China)

Objective To explore levels and the clinical significance of serum and induced sputum(SP)-D in patients with acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis(AEIPF).Methods The contents of serum and induced sputum SP-D for 26 patients with AEIPF and stable IPF were detected by ELISA,42 cases of healthy people were choosen as control group.Results Average serum SP-D levels in patients who experienced an acute exacerbation and remission were (196±82),(125±69)ng/mL,respectively,the control group was (96±47)ng/mL,induced sputum SP-D was(153±71),(106±64)ng/mL.The serum SP-D for patients with COPD in acute exacerbation stage was significantly higher than that for patients in stable stage and controls(P<0.05).Conclusion The serum SP-D may be a potential diagnostic biomarker for AEIPF.

idiopathic pulmonary fibrosis； acute exacerbation； SP-D； serum； induced sputum

吳友茹，女，本科，主任醫師，主要從事肺間質纖維化方面的研究。△

，E-mail:clzw082005@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.025

A

1672-9455(2015)03-0350-02

2014-06-21

2014-11-12)