百白破和麻疹疫苗同時或單獨免疫小鼠的體液免疫效果及不良反應評價

武永紅，黃君華

(西安醫學院臨床免疫與病原檢驗教研室，陜西西安710021)

·論著·

百白破和麻疹疫苗同時或單獨免疫小鼠的體液免疫效果及不良反應評價

武永紅，黃君華

(西安醫學院臨床免疫與病原檢驗教研室，陜西西安710021)

目的觀察百白破疫苗和麻疹減毒活疫苗同時免疫小鼠后的抗體應答和不良反應。方法用百白破疫苗和麻疹減毒活疫苗皮下注射免疫小鼠，于末次免疫后10 d取血清，用ELISA間接法檢測特異性IgG抗體水平，比較上述兩種疫苗同時免疫與單獨免疫小鼠后特異性IgG的產生水平，并觀察其發生不良反應的差異。結果同時免疫兩種疫苗的實驗組白喉抗體效價顯著低于單獨免疫的實驗組，而前者不良反應發生率顯著高于后者，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論兩種疫苗同時接種與單獨接種比較，抗體應答水平較低，安全性較差，最好不要同時接種。

麻疹疫苗；體液免疫；小鼠；ELISA

國產吸附無細胞百白破疫苗已在我國大規模使用，其與麻疹減毒活疫苗是否可以同一時間不同部位對嬰兒群體進行免疫接種，在預防保健部門一直存在較大爭議。為了解上述兩類疫苗同時接種后機體的體液免疫應答[1]和不良反應情況，本文通過動物實驗對小鼠的接種情況進行了觀察，現報道如下：

1 材料與方法

1.1 材料麻疹減毒活疫苗、吸附無細胞百白破疫苗，由北京天壇生物制品股份有限公司生產；辣根過氧化酶標記的羊抗鼠IgG、酶標空板、四甲基聯苯胺、白喉類毒素抗體及麻疹病毒抗體檢測試劑盒，由西安納博旺生物科技有限公司提供；其余試劑按常規配制；6～8周齡Balb/c雌性小鼠，體重18～20 g，由第四軍醫大學實驗動物中心提供。

1.2 動物分組、免疫接種及分離血清將40只實驗小鼠隨機分成A、B、C及D四組，每組10只。采用皮下免疫注射[2]一周一次共三次，每次每只50 μl。A組(對照組)：注入生理鹽水；B組(實驗組)：注入百白破疫苗；C組(實驗組)：注入麻疹減毒活疫苗；D組(實驗組)：于不同部位分別注入百白破三聯疫苗和麻疹減毒活疫苗。每組末次免疫10 d后摘眼球采血，37℃放置2 h后，4℃過夜，2 500 r/min離心20 min分離血清。

1.3 ELISA間接法將白喉類毒素用0.05 mol/L pH 9.6的CBS稀釋至1∶4 000后4℃過夜包被酶標板，洗滌后，用1%的BSA封閉。將每只小鼠血清按1∶100稀釋，羊抗鼠IgG-HRP濃度為1∶20 000，按常規方法操作，反應時間分別為30 min、30 min、10 min，酶標儀450 nm檢測各樣本OD值[3]。麻疹病毒抗體檢測依照試劑盒說明書進行。

1.4 不良反應觀察每次免疫接種后測量每只小鼠的肛溫并記錄：37.5℃及以下為無反應(-)；37.6℃～38℃為弱反應(+)；38.1℃～38.5℃為中反應(++)；38.6℃及其以上為強反應(+++)。觀察小鼠免疫接種后的躁動、呆滯、厭食等癥狀和體征。將體溫計探頭插入小鼠肛門內，深度以溫度計探頭完全進入肛門為準，維持至少2 min，測量肛溫。記錄各組數據，比較給藥組及對照組中肛溫的差異。

1.5 統計學方法全部數據采用SPSS13.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，檢驗水準為α=0.05，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 特異性抗體效價用ELISA間接法所測得的各疫苗免疫注射組小鼠血清中的特異性IgG水平較正常對照組差異有統計學意義(P＜0.05)；組間抗體水平比較發現，同時注射百白破疫苗和麻疹疫苗的D組特異性IgG抗體水平較單獨注射百白破疫苗的B組差異有統計學意義(P＜0.05)，而較單獨注射麻疹疫苗的C組差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 實驗疫苗免疫小鼠血清IgG抗體490 nm吸光值(±s)

表1 實驗疫苗免疫小鼠血清IgG抗體490 nm吸光值(±s)

注：a與D組吸光值比較，P＜0.05；b與D組吸光值比較，P＞0.05。

組別百白破疫苗特異性I g G 麻疹疫苗特異性I g G A組B組C組D組0 . 0 7 0 ± 0 . 0 2 4 0 . 5 2 3 ± 0 . 1 0 2a-0 . 3 6 5 ± 0 . 0 9 6 0 . 0 9 0 ± 0 . 0 2 7 -0 . 4 3 7 ± 0 . 0 8 1b0 . 4 4 2 ± 0 . 0 9 4

2.2 不良反應發生率小鼠免疫后肛溫異常升高的發生率，只注入百白破疫苗的B組為50.0%；只注入麻疹減毒活疫苗的C組為70%；注入百白破疫苗和麻疹疫苗的D組為100%，且D組反應強度顯著高于B組和C組，見表2。小鼠免疫后癥狀和體征不良反應發生率，只注入百白破疫苗的B組為30.0%；只注入麻風減毒活疫苗的C組為50%；注入百白破疫苗和麻疹疫苗的D組為90%，且D組中有兩只小鼠呆滯與厭食癥狀都出現，見表3。

表2 四組小鼠接種后肛溫異常升高發生率(只)

表3 癥狀和體征不良反應發生率(只)

3 討論

隨著我國衛生保健水平的提高，兒童計劃免疫中疫苗覆蓋率有了很大的提高，且疫苗種類也逐漸增多。然而，注射疫苗，特別是注射聯合免疫疫苗時不良反應的發生率也在不斷增加，疫苗接種后不良反應給預防接種工作帶來一些不利影響和困難，損害公眾及醫生對疫苗的信任。預防保健工作者一般認為，一種滅活疫苗與一種減毒活疫苗可以在同一天不同部位接種，按此說法，百白破疫苗和麻風減毒活疫苗是可以給兒童在同一時間聯合免疫的。由于兒童受到感冒、腹瀉、過敏等常見病的影響，各疫苗的免疫時間經常推遲或調整，并不固定。我們走訪了幾家醫院的預防保健科，也確實有上述兩疫苗聯合免疫的情況。

本實驗表明，兩種疫苗同時接種后，實驗小鼠不良反應明顯增加，而聯合免疫較單獨免疫兩疫苗，白喉抗體應答水平顯著下降，提示兩種疫苗不適合聯合免疫接種，原因可能是炎性介質和過敏介質產生的疊加，以及抗體產生過程中的競爭性抑制，包括抗體合成原料的利用競爭等。

從兒童計劃免疫中單獨注射這兩種疫苗的不良反應強度和發生率來看，也不提倡聯合免疫。吸附無細胞百白破聯合疫苗是無細胞百日咳疫苗原液與破傷風類毒素混合，用氫氧化鋁吸附制成無細胞百日咳、白喉、破傷風混合疫苗。百白破疫苗的不良反應是計劃免疫長期存在的問題[4]。在兒童計劃免疫接種的疫苗中，吸附百白破疫苗的接種反應率最高[5]。常見的有局部出現紅腫、疼痛、發癢，全身性燥熱、哭鬧；罕見的有煩躁、厭食、嘔吐、精神不振、重度發熱、局部硬結等。麻疹減毒活疫苗是用麻疹病毒減毒株接種原代雞胚細胞，經培養收獲病毒液加入適宜穩定劑凍干制成，亦屬于眾多兒童疫苗中不良反應發生率較高的一種，常見的有局部出現疼痛和觸痛、全身性皮疹、輕中度發熱，罕見重度發熱反應。

此外，疫苗免疫接種還應考慮兒童對疫苗敏感程度的個體差異。如有的個體對麻風減毒活疫苗非常敏感，容易發生嚴重的不良反應，此種情況更應杜絕和其他疫苗聯合免疫。

聯合疫苗應用當中的一些不確定性問題尚有待證實[6]，如多種疫苗抗原在機體內同時產生一定強度的免疫應答效應，對同時參與這些免疫應答的分子需求異常增加，是否會對機體造成不利影響，如免疫應答的特異性降低、免疫系統紊亂、對其他病原微生物的防御能力降低、自身免疫應答水平升高等。

綜上所述，建議在計劃免疫工作中不要給兒童同時接種百白破疫苗和麻風減毒活疫苗。

[1]Fazilli A,Mir AA,Shah RJ,et al.Effect of second dose of measles vaccine on measles antibody status∶a randomized controlled trial [J].Indian Pediatrics,2013,50(5)∶473-476.

[2]Knuf M,Zepp F,Meyer CU,et al.Safety,immunogenicity and immediate pain of intramuscular versus subcutaneous administration of a measles-mumps-rubella-varicella vaccine to children aged 11～21 months[J].Eur J Pediatr,2010,169(8)∶925-933.

[3]陳玉秋,張夢霏,何建東,等.以白喉毒素無毒變異體蛋白CRM197和破傷風類毒素為載體的Y群腦膜炎球菌多糖結合物對小鼠的免疫原性[J].中國生物制品學雜志,2014,27(4)∶442-443.

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[6]Knuf M,Zepp F,Helm K,et al.Antibody persistence for 3 years following two doses of tetravalent measles-mumps-rubella-varicella vaccine in healthy children[J].Eur J Pediatr,2012,171∶463-470.

Evaluation of humoral immunity caused by DPT and measles vaccine separately or simultaneously and observation of adverse reactions.

WU Yong-hong,HUANG Jun-hua.Department of Clinical Immunology and Etiology Inspection,Xi'an Medical College,Xi'an 710021,Shaanxi,CHINA

ObjectiveTo investigate the antibody response and adverse reactions of mice after they were immunized by DPT and measles vaccine.MethodsThe mice were immunized subcutaneously by DPT and measles vaccine at the same time in different parts.Serum samples were taken at 10 days after the last immunization.Specific IgG antibody levels were detected by indirect ELISA.The levels of applying the two vaccines separately and simultaneously were compared,and the differences of adverse reactions were observed.ResultsAntibody titers of applying the two vaccines simultaneously were significantly lower than those applying the two vaccines separately,and the former had significantly higher incidence of adverse reactions(P＜0.05).ConclusionIt is recommended to vaccinate vaccines separately,because simultaneous vaccination may cause lower level of antibody response and poor security.

Measles vaccine;Humoral immunity;Mice;ELISA

R-332

A

1003—6350（2015）12—1717—03

2014-12-18)

西安醫學院科研資助項目(編號：12FZ31)

武永紅。E-mail：380248641@qq.com

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2015.12.0616