子宮內膜異位癥患者在位內膜的MMP-9和VEGF的表達

黃麗霞，馬利國，蔡如玉，楊 熠

(深圳市人民醫院暨南大學附屬第二臨床學院婦科，廣東 深圳 518020)

子宮內膜異位癥患者在位內膜的MMP-9和VEGF的表達

黃麗霞，馬利國，蔡如玉，楊 熠

(深圳市人民醫院暨南大學附屬第二臨床學院婦科，廣東 深圳 518020)

目的 探索在位內膜是否有異常改變，以證實現有治療方法的有效性。方法隨機選取2013年11月至2014年5月于我院婦科經腹腔鏡及病理確診為子宮內膜異位癥的患者40例為內異癥組，既往因子宮內膜異位癥在我院治療后未復發的患者38例為治愈組，另選取30例同期健康育齡婦女為對照組。檢測并比較三組受檢者的基質金屬蛋白酶9(MMP-9)和血管內皮生長因子(VEGF)蛋白的表達水平。結果內異癥組在位內膜MMP-9和VEGF的表達較治愈組和對照組均明顯升高，差異均有統計學意義(P＜0.05)；治愈組MMP-9和VEGF的表達與對照組比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；MMP-9和VEGF的表達存在正相關關系(r=0.805，P＜0.05)。結論內異癥患者在位內膜的MMP-9和VEGF的表達異常，促進異位病灶形成；手術徹底切除內異癥病灶聯合藥物治療后MMP-9和VEGF表達恢復正常，延遲復發。

子宮內膜異位癥；在位內膜；基質金屬蛋白酶-9；血管內皮生長因子

子宮內膜內異癥(Endometriosis，EMs)簡稱內異癥，是育齡婦女的常見病，其發病率可達10%～15%，且呈上升趨勢，嚴重影響婦女的身心健康及生育能力。近年來，隨著大量內異癥相關臨床和基礎研究工作的開展，人們對內異癥的認識不斷深入，臨床診治也逐漸規范，但其發生、發展過程仍是一個未解之謎。從過去經典的Sampson經血逆流學說，到現在的在位內膜在內異癥發病中的作用，越來越多的臨床和基礎研究結果證實，內異癥患者在位內膜有諸多方面的異常改變，從而有學者提出“在位內膜決定論”——即在位子宮內膜的異常改變在內異癥發病中起著決定性作用。現就這一理論，檢測治療前的內異癥患者和治愈后患者在位內膜的基質金屬蛋白酶9 (MMP-9)和血管內皮生長因子(VEGF)表達來證明在位內膜是否有異常變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取2013年11月至2014年5月于我院婦科經腹腔鏡及病理確診為子宮內膜異位癥的患者40例為內異癥組，既往因子宮內膜異位癥在我院行保守性手術+藥物治療6個月后，經足月分娩，現妊娠結束大于1年，有規律月經，無內異癥復發的患者38例為治愈組；另選取30例同期健康育齡婦女為對照組。納入標準：入組前3個月內未行激素治療；月經規律；年齡25～45歲。排除標準：近期有生育要求；半年內有內異癥相關治療；有宮內節育器；半年內有哺乳病史；生殖道急性炎癥；同時合并子宮腺肌病、子宮肌瘤、多囊卵巢綜合征等內分泌相關疾病和自身免疫性疾病。內異癥組年齡25～45歲，平均(31.18±0.89)歲；術中診斷為單側卵巢子宮內膜異位囊腫26例，雙側14例；合并盆腔腹膜內異癥28例，合并骶韌帶內異癥10例；rAFS評分Ⅲ期11例，Ⅳ期29例；增生期27例，分泌期13例。治愈組年齡27～40歲，平均(32.00±0.63)歲；術中診斷為單側卵巢子宮內膜異位囊腫29例，雙側9例；合并盆腔腹膜內異癥20例，合并骶韌帶內異癥7例；rAFS評分Ⅲ期18例，Ⅳ期20例；增生期26例，分泌期12例。對照組年齡25～42歲，平均(31.00±0.83)歲；增生期19例，分泌期11例。三組受試者的年齡、子宮內膜期別等資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審核批準且入選者均已簽署知情同意書。

1.2 子宮內膜的采集 內膜采集使用一次性宮腔組織吸引管吸取子宮內膜組織，固定保存，石蠟包埋。

1.3 檢測方法 內膜組織先行常規病理檢查，排除其他婦科疾病，再進行實驗。

1.4 MMP-9和VEGF的免疫組化檢測結果判定 應用雙目顯微鏡觀察所有染色切片，采用雙盲法。MMP-9及VEGF蛋白均定位于細胞漿中。光鏡分析綜合染色強度和陽性細胞占總細胞數的百分比進行評價：不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，深褐色為3分；陽性細胞數＜5%為1分，5%～25%為2分，26%～50%為3分，＞50%為4分。兩項之和≥4分為陽性表達，＜4分為陰性表達。

1.5 統計學方法 應用SPSS 13.0統計軟件包進行數據分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示，計數資料以百分率表示，均數的比較采用t檢驗，率的比較采用χ2檢驗，若四格表中有理論頻數1≤T≤5時，用校正公示計算χ2值。以P＜0.05為差異有統計學意義。相關性采用Spearman等級相關分析。

2 結果

2.1 在位內膜MMP-9及VEGF的表達 免疫組化檢測的結果顯示MMP-9陽性表達主要分布于子宮內膜腺上皮細胞胞漿(圖1)，VEGF陽性表達主要分布于子宮內膜間質細胞、血管平滑肌細胞的胞漿(圖2)。采用χ2檢驗，統計分析結果顯示：內異癥組在位內膜MMP-9和VEGF的表達較對照組和治愈組均明顯升高，差異均有統計學意義(P＜0.05)，而治愈組MMP-9和VEGF的表達與對照組比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

圖1 三組受試者MMP-9免疫組化染色結果

圖2 三組VEGF免疫組化染色結果

表1 三組受試者在位內膜MMP-9和VEGF表達情況

2.2 MMP-9與VEGF在內異癥患者治療前后及治愈后在位內膜表達的相關性 對在位內膜MMP-9和VEGF進行Spearman相關分析，結果顯示：(1)內異癥組MMP-9和VEGF存在正相關關系(r= 0.805，P＜0.05)；(2)治愈組在位內膜MMP-9和VEGF存在正相關關系(r=0.870，P＜0.05)。

3 討論

內異癥的發病率可高達10%～15%，且呈上升趨勢。其臨床表現多種多樣，盆腔痛和不孕是主要的癥狀[1-2]，嚴重影響育齡婦女的身心健康及生育能力。內異癥的病因和發病機制至今仍未明確。因越來越多的研究發現子宮在位內膜與正常子宮內膜不一樣的特質，有學者提出“在位內膜決定論”[3-4]。本研究從在位內膜入手，檢測治療前內異癥的患者和治愈后患者在位內膜的基質金屬蛋白酶9(MMP-9)和血管內皮生長因子(VEGF)的表達變化。

本研究結果：內異癥患者在位子宮內膜的MMP-9陽性表達率均明顯高于治愈組和對照組；治愈組與對照組比較差異無統計學意義。盆腔內異癥患者在位內膜MMP-9的活性增加，對局部組織結構及基底膜成分的破壞能力增加，利于逆流入腹腔的內膜組織對腹膜侵襲，促進內異癥的發生。治愈組的MMP-9表達較內異癥組顯著下降。盆腔內異癥患者手術中完全切除異位病灶，術后輔助藥物治療，治療促使炎癥細胞因子分泌減少[5]，炎癥消退，激素調節增強，降調MMP-9表達。

本研究結果：內異癥患者在位子宮內膜VEGF蛋白陽性表達率均高于治愈組和對照組；治愈組與對照組比較無統計學差異。此研究結果與多個報道一致，表明內異癥患者的在位內膜具有異位種植生長的內在條件[6]。內異癥組VEGF蛋白表達增多，引起毛細血管通透性增加，血漿外滲，使游離內膜能夠獲得更多的營養，細胞增殖加快，建立新的血管，形成新的異位病灶[7]。治愈組在位內膜的血管生成活性得到抑制。子宮內膜的血管生成能力直接影響病灶的形成[8]，是內異癥發生、發展的關鍵步驟，也是一個潛在的干預治療的新靶點。現已經有幾種抗血管藥物的實驗顯示抑制血管生成可使病灶萎縮。此發現有望成為內異癥治療方法的一種新選擇[9]。

進一步的Spearman相關性分析結果顯示：隨著內異癥在位子宮內膜MMP-9蛋白陽性表達率的降低，其VEGF蛋白陽性表達率亦降低。MMP-9和VEGF表達呈正相關。VEGF可促進MMP-9的合成，并提高MMP-9的活性和表達，調節MMP-9的轉錄水平。MMP-9亦通過和整合素的相互作用而加強細胞間的粘附，促進血管內皮細胞的出芽，參與新生血管的形成[5]，從而促進子宮內膜細胞的異位粘附、種植和生長[10]。MMP-9和VEGF在盆腔內異癥病灶形成中具有協同作用，促進其發生和發展，并可為內異癥的治療和預防復發提供指導。然而由于本研究的樣本量偏小，需更大樣本量的全面設計和深入研究。

綜上所述，內異癥患者的在位內膜的MMP-9和VEGF表達異常，較治愈組和對照組有明顯的差異，在手術和藥物治療后，MMP-9和VEGF表達恢復正常，手術徹底地切除內異癥病灶聯合藥物治療可以改善內異癥患者盆腔的微環境，延緩內異癥病灶的再次產生，延遲復發。展望未來，希望能從在位內膜MMP-9和VEGF的角度研究更多的新型試劑盒來檢測內異癥的發生，研究更多的藥物來延緩內異癥的復發。

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Expression of matrix metalloproteinase-9 and vascular endothelial growth factor in eutopic endometrium of patients with endometriosis.

HUANG Li-xia,MA Li-guo,CAI Ru-yu,YANG Yi.Department of Gynaecology,Shenzhen People's Hospital,Shenzhen 518020,Guangdong,CHINA

Objective To study the change of eutopic endometrium in patients with endometriosis,in order to confirm the clinical efficacy of treatment.MethodsForty patients diagnosed as endometriosis by laparoscopy and pathology from November 2013 to May 2014 in the Department of Gynaecology in our hospital were enrolled as endometriosis group.Thirty-eight patients of endometriosis cured in our hospital without recurrence after treatment were selected as cured group.Thirty healthy women were selected as control group.The expression levels of matrix metalloproteinase 9(MMP-9)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in the three groups were detected and compared.ResultsMMP-9 and VEGF expression in endometriosis group were significantly higher than cured group and control group(P＜0.05),with no statistically significant difference between cured group and control group(P＞0.05). The expressions of MMP-9 and VEGF were positively correlated(r=0.805,P＜0.05).ConclusionMMP-9 and VEGF of eutopic endometrium in patients with endometriosis are expressed abnormally,which promote endometriotic lesions. Complete surgical excision of endometriotic lesions combined with drug treatment can postpone recurrence.

Endometriosis;Eutopic endometrium;Matrix metalloproteinase 9(MMP-9);Vascular endothelial growth factor(VEGF)

R711.71

A

1003—6350（2015）23—3478—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.23.1260

2015-05-24)

廣東省深圳市科技創新委員會重大項目(編號：JCYJ20130402092657780)

馬利國。E-mail：sunglowhlx@126.com