BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測試劑盒診斷細菌性陰道病的價值

郝家明，刁志宏，黎永新，楊志勇，李明友

（1.中國人民解放軍第187中心醫院檢驗科，海南 ?？?71157；2.廣東省第二人民醫院檢驗科，廣東 廣州510317)

BV致病菌群分布狀況及BV快速檢測試劑盒診斷細菌性陰道病的價值

郝家明1，刁志宏2，黎永新2，楊志勇2，李明友2

（1.中國人民解放軍第187中心醫院檢驗科，海南 海口571157；2.廣東省第二人民醫院檢驗科，廣東 廣州510317)

目的評價快速檢測試劑診斷細菌性陰道病(BV)的價值，并分析BV致病菌群的分布狀況。方法使用BV快速檢測試劑檢測108例疑似BV患者的陰道分泌物，以Amsel為金標準對其檢測結果進行評價；同時進行病原菌培養，分析其致病菌群情況。結果BV快速檢測試劑的敏感性、特異性、陽性預期值和陰性預期值分別為97.3%、95.8%、92.3%和98.6%，與金標準符合率高達96.3%(Kappa系數=0.879，P=0.001)；細菌培養檢出病原菌77例，23例(21.3%)發生合并感染，以假絲酵母菌合并其他病原菌體感染為多見。結論BV快速檢測試劑診斷BV具有較高的特異性和敏感性，但BV致病菌群呈現出多樣性，不能忽視需氧性菌所致BV的存在。

細菌性陰道病；陰道加德納菌；陰道菌群

細菌性陰道病(Bacterial vaginosis，BV)是目前臨床上婦科最常見的感染性疾病之一[1]，其典型病理特征為陰道微生態失調，正常菌群比例改變[2-4]，表現為產H2O2乳酸桿菌數量減少，而類桿菌、支原體等厭氧菌、加德納菌等數量過度增加。如不及時治療，易于發生泌尿系感染、不良妊娠及盆腔炎等婦科疾病，故而其早期明確診斷至關重要。唾液酸酶由陰道菌群中的厭氧菌產生，最新研究證實其活性升高可反映陰道內厭氧菌過度生長，與BV的發生和發展密切相關。BV快速檢測試劑對活性唾液酸酶具有高度特異性，本研究以Amsel法為金標準，對其診斷效能進行評估，同時進行陰道菌群病原菌培養，分析BV的致病菌群特征。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年1～6月期間在廣東省第二人民醫院婦科門診接受診治疑似為BV的女性患者108例，患者年齡20～55歲，平均(33.6±4.2)歲。所有受檢者均未使用過灌注療法或陰道乳劑；排除72 h內有性生活史者，妊娠期和行經期女性。

1.2 檢測試劑和儀器 BV細菌性陰道病快速檢測試劑由廣東珠海迪爾生物工程有限公司生產(產品標準編號：YZB/粵0395-2008)。血液瓊脂培養基、巧克力瓊脂培養基、麥康凱瓊脂、雙糖鐵瓊脂等常規試劑購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司。儀器采用美國BD公司的Phoenix100細菌鑒定系統。

1.3 方法

1.3.1 樣本收集 外陰消毒后，用兩支棉拭子(無菌生理鹽水浸濕)于陰道深部或后穹隆取材并立即送檢。一支行BV細菌性陰道病快速檢測、Amsel法檢測及陰道分泌物常規檢查；另一支行細菌培養和菌種分析。樣本陰道分泌物常規檢查按衛生部《臨床檢驗操作規程》第三版進行。BV細菌性陰道病快速檢測按試劑使用說明書操作，以陰陽性判定結果。

1.3.2 細菌培養方法 分別將檢材接種于血瓊脂、巧克力及麥康凱平板，35℃孵育24～48 h后，可疑菌落涂片，行革蘭染色、選擇性氧化酶試驗、觸酶試驗后選擇合適的ATB鑒定板條或使用美國BD公司的Phoenix100細菌鑒定系統行細菌鑒定。

1.3.3 Amsel法 以Amsel法作為確診BV的金標準：(1)陰道分泌物稀薄奶樣；(2)陰道pH＞4.5；(3)胺試驗陽性；(4)線索細胞陽性；以上4項有3項陽性即為BV陽性。

1.3.4 陰道加德納菌的鑒定 按文獻[5]將標本劃種于含有50ml/L人血瓊脂平板上，在37℃、50ml/L CO2環境中生長良好，形成針尖大小、圓形、光滑、半透明、形似露滴狀的菌落，有狹窄的β溶血環，48 h后菌落直徑增大。挑取典型菌落作氧化酶、觸酶試驗陰性，進一步作葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等發酵試驗產酸不產氣，不發酵肌醇和棉子糖，能水解馬尿酸和淀粉，硝酸鹽還原試驗陰性。

1.4 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，實驗結果中的計數資料以頻數和百分率表示，兩種方法之間的比較采用Kappa一致性檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩種方法的BV檢測結果比較108例樣本中，Amsel法檢測陽性39例，陽性率為36.1%，BV細菌快速檢測試劑檢測陽性37例，陽性率為34.3%。以Amsel法為金標準，BV細菌快速檢測試劑特異性為95.8%(68/71)，敏感性為97.3%(36/37)，陽性預測值為92.3%(36/39)，陰性預測值為98.6%(68/69)，兩種方法符合率為96.3%[(36+68)/108]，Kappa=0.879，P=0.001，P=0.001，見表1。

表1108例患者的兩種方法BV檢測結果比較（例）

2.2 病原菌培養結果108例標本中，檢出病原菌77例(71.3%)，其中，假絲酵母菌31例(28.7%)，大腸埃希氏菌20例(18.5%)，陰道加德納菌16例(14.8%)，金黃色葡萄球菌8例(7.4%)，變形桿菌7例(6.5%)，枸緣酸桿菌和糞腸球菌各4例(3.7%)，克雷伯氏菌和淋病奈瑟氏菌各3例(2.8%)，不動桿菌1例(0.9%)。此外，經檢查發現23例(21.3%)發生合并感染，并以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見，其中合并陰道毛滴蟲(6例)，大腸埃希桿菌(3例)，加德納菌(3例)、克雷伯氏菌(1例)；其次加德納菌合并陰道毛滴蟲(4例)、大腸埃希氏菌(1例)；少數合并金黃色葡萄球菌、糞腸球菌或淋病奈氏菌感染。

3 討論

Amsel法是目前診斷BV唯一公認的“金標準”[6-7]，但此法操作繁瑣、取材較多、難度大、費用高，最大的缺陷是結果以主觀判斷為主[8]。正常情況下婦女陰道內存在二十多種微生物，其相互制約、相互協調，共同維持陰道微生態相對平衡。當某種或某幾種微生物異常增多時，產H2O2的乳酸桿菌減少甚至消失，大量致病性厭氧菌取代了正常乳酸桿菌，粘附在上皮細胞表面使細胞溶解，是發生BV的主要原因。BV快速診斷試劑盒的檢測原理是試劑與病原菌產生的唾液酸酶發生化學反應生成唾液酸，再加入顯色劑即可診斷BV。本研究對所有樣本同時采用Amsel法和BV快速檢驗法進行診斷，經Kappa一致性檢驗，發現兩種方法的診斷結果具有良好的一致性。BV快速檢驗法取得了較高敏感性和特異性，且具有操作簡便、耗時短、易于掌握、結果直觀、試劑可室溫保存等優點。

本研究在樣本收集過程中，未能進行沙眼衣原體、解脲支原體感染的檢驗，而其他細菌、真菌、陰道毛滴蟲感染狀況與文獻報道基本相符。但本研究還發現，BV患者存在相當一部分混合感染，本組病例的混合感染率為21.3%，以假絲酵母菌合并其他病原菌感染為多見，除合并其他細菌外，也可能合并陰道毛滴蟲、真菌等其他病原體。提示細菌性陰道病大多為非單一性感染，病原體可能顯示多態性。原因可能是BV病原菌可產生高水平磷脂酶A、唾液酸酶、黏蛋白酶等[9-10]，上述酶對陰道保護性黏液層具有較強的溶解作用，破壞了陰道的自我保護機制，增加了致病性病原體的附著力；而琥珀酸的產生又可抑制趨化效應，阻止中性粒細胞向病原體聚集，使其他致病性病原體能夠逃避免疫攻擊，大量繁殖。二者共同作用，進一步加重BV的感染和炎癥癥狀。本研究發現，部分金標準檢測陽性病例采用BV快速試劑盒為陰性，可能是因為BV感染過程中尚未形成產生唾液酸酶的優勢菌，唾液酸酶產量未達到檢測限；也有部分BV快速診斷試劑盒檢測為陽性的病例金標準診斷為陰性，可能是因為其他少數產唾液酸酶的細菌導致了假陽性反應。

值得注意的是，BV并非完全由厭氧菌引發，不能忽視需氧菌導致BV的可能，本組病例細菌培養也發現了金黃色葡萄球菌、糞腸球菌等需氧菌或兼性厭氧菌。Shamim等[11]研究需氧菌致病陰道炎(Aerobe vaginosis，AV)的致病細菌和抗生素的敏感性發現，該病的主要致病菌為金黃色葡萄球菌(40%)、E.coli(13%)，糞腸球菌(20%)和B族鏈球菌(6%)。這些細菌對青霉素類和磺胺類抗生素的敏感性均在90%以上，為AV的診斷和治療提供了詳實的微生物學方面的實驗數據。因此Gilbert提出的AV的診斷，主要采用經Tempera等[12]修改的綜合診斷方法，其中，AV評分為必備指標，需綜合陰道分泌物中乳酸桿菌分級、白細胞數量以及中毒白細胞所占比例、背景菌落數等指標。需氧性細菌所致陰道炎也不容忽視。

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R711.73

B

1003—6350（2015）22—3412—02

2014-11-28)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1236

郝家明。E-mail：haojm@sina.com