氣相色譜法測定甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的含量

李才島，韋 華

(海南正瑞醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，海南 海口570311)

·藥物與臨床·

氣相色譜法測定甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的含量

李才島，韋 華

(海南正瑞醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，海南 海口570311)

目的建立測定甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯含量的氣相色譜法。方法采用氣相色譜法。色譜柱為DB-WAX毛細(xì)管柱(固定液：聚乙二醇；規(guī)格：30.0 m×0.25mm×0.25 μm)，柱溫為110℃，F(xiàn)ID檢測器溫度為250℃，進(jìn)樣口溫度為200℃，分流比為10:1，頂空瓶平衡溫度為85℃，頂空瓶平衡時(shí)間為30min。結(jié)果氯乙酸甲酯檢測濃度的線性范圍為0.00800～0.12833mg/ml(r=0.9995)；平均回收率為100.0%(RSD=1.79%)。結(jié)論本方法操作簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的質(zhì)量控制。

甘氨酰胺鹽酸鹽；氯乙酸甲酯；氣相色譜法

甘氨酰胺鹽酸鹽是制備新型中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物奧拉西坦的重要原料，奧拉西坦具有激活、保護(hù)和促進(jìn)受損神經(jīng)細(xì)胞功能恢復(fù)的特性，臨床用于治療輕中度血管性癡呆、老年性癡呆以及腦外傷等癥引起的記憶與智能障礙[1]。甘氨酰胺鹽酸鹽主要以氯乙酸甲酯為原料，與氨水進(jìn)行胺化反應(yīng)制得[2]。氯乙酸甲酯別名為氯醋酸甲酯，是一種外觀透明易燃的液體，相對分子質(zhì)量108.53，熔點(diǎn)-33℃，密度1.236 g/m3(20/20℃)。氯乙酸甲酯是一類具有中等毒性的化學(xué)物質(zhì)，有很強(qiáng)的眼刺激性和中等的皮膚刺激性。急性毒性和亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示氯乙酸甲酯對肝臟和腎臟均有毒性作用。2001年新澤西州健康服務(wù)部門指出氯乙酸甲酯的慢性毒性作用可能主要表現(xiàn)在致癌性和生殖毒性以及其他的長期慢性疾病如慢性支氣管炎等[3-4]。

目前文獻(xiàn)報(bào)道氯乙酸甲酯的測定方法均是以填充柱為色譜柱的氣相色譜法，而以毛細(xì)管柱為色譜柱的氣相色譜法未見文獻(xiàn)報(bào)道[5-6]。為了滿足實(shí)驗(yàn)室檢測的需要，我們通過對不同極性的毛細(xì)管柱及分離條件進(jìn)行優(yōu)選，建立了以聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱，采用頂空進(jìn)樣方式的氣相色譜法來測定甘氨酰胺鹽酸鹽中的氯乙酸甲酯，并對該方法進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津GC-2014C型氣相色譜儀；氫火焰離子化檢測器；DK-3001A型頂空進(jìn)樣器；LC-Solution色譜工作站；賽多利斯CPA225D型電子天平。

1.2 試藥 甘氨酰胺鹽酸鹽(濟(jì)南富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司提供；批號：20110301)；氯乙酸甲酯(上海晶純試劑有限公司提供；批號：5489；含量：100.0%)；水為雙重蒸餾水。

2 色譜條件

色譜柱：DB-WAX毛細(xì)管柱(固定液：聚乙二醇；規(guī)格：30.0 m×0.25mm×0.25 μm)；柱溫：110℃；檢測器溫度：250℃；進(jìn)樣口溫度：200℃；分流比：10:1；頂空瓶平衡溫度：85℃，頂空瓶平衡時(shí)間：30min。

3 試驗(yàn)溶液的制備

對照品溶液的制備：取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液；精密量取5ml，置頂空瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液。供試品溶液的制備：取甘氨酰胺鹽酸鹽1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入5ml水溶解，加蓋密封，作為供試品溶液。

4 方法學(xué)研究

4.1 色譜柱的選擇 通過對不同極性的毛細(xì)管進(jìn)行對比研究，從而選出最佳毛細(xì)管色譜柱。取對照品溶液，依照上述色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果，DB-WAX毛細(xì)管柱具有保留時(shí)間較短，峰形對稱性好，拖尾因子小于1.5，理論板數(shù)高，色譜峰的響應(yīng)值適中等特點(diǎn)，故最終選擇用DB-WAX毛細(xì)管柱來測定氯乙酸甲酯，見表1。

表1 色譜柱的選擇試驗(yàn)結(jié)果

4.2 空白溶劑干擾試驗(yàn) 取空白溶劑(水)，依照上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。結(jié)果，在空白溶劑色譜圖中未有色譜峰出現(xiàn)，說明空白溶劑對測定無干擾。

4.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液；精密量取5ml，置頂空瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液。依照上述色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)測定5份。結(jié)果，取對照品溶液連續(xù)測定5次，所測得峰面積的RSD為0.95%，保留時(shí)間的RSD為0.03%，拖尾因子小于1.5，理論板數(shù)大于5000，說明該色譜條件符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。

4.4 線性與范圍試驗(yàn) 取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品貯備液；精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得相對濃度為20%、40%、60%、80%、100%、120%的線性溶液，依照上述色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果以線性溶液的濃度C為橫坐標(biāo)(X)，峰面積A為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y=837619x-2649.4(r=0.9995)。結(jié)果，氯乙酸甲酯測定濃度在0.00800～0.12833mg/ml(定量限～120%)范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好，線性關(guān)系曲線圖見圖1。

4.5 定量限 取4.4項(xiàng)下20%線性溶液，采用稀釋法，逐級稀釋，依照上述色譜條件進(jìn)行測定，當(dāng)記錄的色譜圖中主峰與基線噪音峰信號的強(qiáng)度比約為10:1時(shí)注入儀器的量，即為氯乙酸甲酯的定量限。結(jié)果，氯乙酸甲酯的定量限為8 μg。

圖1 氯乙酸甲酯的線性關(guān)系曲線圖

4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取甘氨酰胺鹽酸鹽約1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入水5ml溶解，搖勻，加蓋密封，作為供試品溶液，平行操作6份；另取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量取5ml，置頂空瓶，加蓋密封，作為對照品溶液。依照上述色譜條件進(jìn)行測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中氯乙酸甲酯的含量。結(jié)果，重復(fù)測定本品6份，均未檢測到氯乙酸甲酯，說明該方法的測定重復(fù)性良好。

4.7 加樣回收率試驗(yàn) 取氯乙酸甲酯50mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；精密量取4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得相對濃度為80%、100%、120%的回收率對照品溶液。取甘氨酰胺鹽酸鹽約1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，共九份，將其分成三組；往第一組樣品中加入80%回收率對照品溶液5ml，往第二組樣品中加入100%回收率對照品溶液5ml，往第三組樣品中加入120%回收率對照品溶液5ml，振搖使溶解后，加蓋密封，即得相對濃度為80%、100%、120%的回收率溶液；另取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量取5ml，置頂空瓶，加蓋密封，作為對照品溶液，依照上述色譜條件進(jìn)行測定，求出回收率。結(jié)果，氯乙酸甲酯的平均回收率為100.0%，RSD為1.79%，說明該方法的測定準(zhǔn)確度較高，見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果

4.8 樣品測定 取本品約1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入水5ml溶解，加蓋密封，作為供試品溶液；另取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg溶液，精密量取5ml，置頂空瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄VE)測定。以DB-WAX為色譜柱，柱溫為110℃；檢測器溫度為250℃；進(jìn)樣口溫度為200℃；分流比為10:1；頂空瓶平衡溫度為85℃，平衡時(shí)間為30min。取供試品溶液和對照品溶液分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算即得。結(jié)果，在該批次甘氨酰胺鹽酸鹽樣品中均未檢測到氯乙酸甲酯。

5 討 論

5.1 溶劑的選擇 毛細(xì)管頂空進(jìn)樣法通常以水作為溶劑，根據(jù)甘氨酰胺鹽酸鹽的理化性質(zhì)可知本品在水中易溶，另外經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料可知氯乙酸甲酯在水中的溶解度為：28 g/L(20℃)，可采用水作為本品測定的溶劑；另由空白溶劑干擾試驗(yàn)結(jié)果可知水對本品的測定無干擾，因此采用水作為溶劑來配制試驗(yàn)溶液。

5.2 色譜柱的選擇 氯乙酸甲酯為極性溶劑，根據(jù)相似相容的原理適宜采用極性或中極性的毛細(xì)管色譜柱進(jìn)行測定，同時(shí)通過對不同極性的毛細(xì)管柱進(jìn)行篩選，最終確定以聚乙二醇(或極性相近)為固定液的毛細(xì)管柱作為本品測定的色譜柱。

5.3 頂空條件的選擇 頂空平衡溫度一般應(yīng)低于溶解供試品所用溶劑的沸點(diǎn)10℃以下，能滿足檢測靈敏度即可；本品測定所用的溶劑為水，當(dāng)頂空平衡溫度設(shè)定為85℃時(shí)，所測得氯乙酸甲酯的峰面積符合測定要求，該方法的檢測靈敏度較高；頂空平衡時(shí)間一般為30～45min，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時(shí)間達(dá)到平衡，同時(shí)頂空平衡時(shí)間通常不宜過長，如超過60min，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導(dǎo)致定量準(zhǔn)確性的降低，當(dāng)頂空平衡時(shí)間設(shè)定為30min時(shí)，系統(tǒng)適用性及定量準(zhǔn)確性均符合要求。

綜上所述，本方法操作簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、可用于甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的質(zhì)量控制。

[1]鄭 輝,劉 娟,施巧月,等.奧拉西坦中間體的合成研究[J].化工中間體,2012,1:31-33.

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Content determination of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride by gas chromatography.

LI Cai-dao,WEI Hua.Hainan Zhengrui Medical Technology Development Co.,Ltd.,Haikou570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo establish a gas chromatographic method for determining the content of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride.MethodsGas chromatography(GC)was adopted with DB-WAX capillary column(Stationary liquid:polyethylene glycol;Specification:30.0 m×0.25mm×0.25 μm),column chromatography of110℃,FID detector temperature of250℃,injection port temperature of200℃,split ratio of10:1,equilibrium temperature of empty bottles of85℃,and equilibrium time of empty bottles of30minutes.ResultsThe linear range of methyl chloroacetate detected was0.00800～0.12833mg/ml(r=0.9995).The average recovery rate was100.0% (RSD=1.79%).ConclusionThis method is fast,easy to operate,accurate and reliable,which can be used in the quality control of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride.

Glycinamide hydrochloride;Methyl chloroacetate;Gas chromatography(GC)

R971

C

1003—6350（2015）22—3394—03

2014-12-28)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1230

李才島。E-mail：licaidao2005@163.com