結腸癌組織中Cofilin-1蛋白的表達及臨床病理意義

劉 艷，林建姣，胡紅松，劉榮火，章任兵

(深圳市龍崗區人民醫院消化內科1、病理科2，廣東 深圳 518172)

結腸癌組織中Cofilin-1蛋白的表達及臨床病理意義

劉 艷1，林建姣1，胡紅松1，劉榮火1，章任兵2

(深圳市龍崗區人民醫院消化內科1、病理科2，廣東 深圳 518172)

目的探討結腸癌組織中Cofilin-1蛋白的表達及其與腫瘤侵襲和轉移的關系。方法應用免疫組織化學SP法檢測60例結腸癌組織、40例癌旁正常組織、26例轉移淋巴結組織標本中Cofilin-1蛋白的表達水平，并結合臨床病理參數進行分析。結果Cofilin-1蛋白在結腸癌組織、轉移淋巴結組織中表達率分別為76.7%、61.5%，均明顯高于癌旁正常組織中的32.5%表達率。Cofilin-1在結腸癌組織、轉移淋巴結組織中的表達率明顯高于癌旁正常組織，差異均有統計學意義(P＜0.05)；Cofilin-1蛋白的表達水平與結腸癌組織分化程度、Dukes分期、漿膜侵犯及淋巴結轉移有關(P＜0.05)，而與性別、年齡、腫瘤大小無明顯相關(P＞0.05)；Cofilin-1與結腸癌預后密切相關(P＜0.05)。結論檢測Cofilin-1蛋白的表達有助于判斷結腸癌的浸潤、轉移及預后。

絲切蛋白-1；結腸癌；轉移;預后

結腸癌是結腸黏膜上皮和腺體在環境或遺傳等多種致癌因素作用下發生的惡性病變，預后不良。近年來結腸癌的發病率與死亡率有逐年上升的趨勢，腫瘤轉移是結腸癌高死亡率的主要原因[1-2]。現有的治療方法包括手術切除、化療都沒有改變結腸癌的自然發生發展過程。因此，尋找治療結腸癌的新方法勢在必行，腫瘤的基因治療是目前的研究熱點。絲切蛋白(Cofilin)是一種肌動蛋白結合蛋白，能誘導片狀偽足形成，增強腫瘤細胞的運動和遷移。Cofilin-1是其1型[3]。目前Cofilin-1在腫瘤中表達與臨床病理的關系研究不多，與結腸癌的關系報道更是少見。本實驗利用免疫組織化學SP法檢測結腸癌組織、癌旁正常組織和和轉移淋巴結組織標本中Cofilin-1蛋白的表達情況，并探討其臨床病理意義，以期為腫瘤侵襲轉移機制和結腸癌的早期診斷及治療提供更多的依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2007年4月至2012年4月腸鏡或術后病理證實的60例臨床資料完整且保存完好的結腸癌患者術后石蠟標本作為研究對象，術前均未進行放化療。其中男性37例，女性23例；年齡28～75歲，平均48.5歲。病理確診高/中分化33例，低分化27例；腫瘤直徑≤5 cm者36例，＞5 cm者24例；伴淋巴結轉移26例，侵及漿膜28例。并取40例患者正常黏膜組織(遠離癌組織5 cm以上)及26例患者的轉移淋巴結組織同時納入研究。以電話及門診復查方式進行隨訪，隨訪日始至手術日，截至2014年6月。

1.2 試劑 兔抗人Cofilin-1多克隆抗體、SP檢測試劑盒及DAB染色試劑盒購于武漢博士德生物技術有限公司。

1.3 實驗方法 組織蠟塊切片，HE染色，觀察組織形態特點.按照試劑盒說明書步驟進行免疫組織化學SP法染色，5μm連續切片。設正常結腸組織為對照組，切片常規脫蠟至水，高溫高壓進行抗原修復，一抗1：200 4℃孵育過夜，DAB顯色，蘇木精對比染色，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定標準 免疫組化結果由兩名醫師記錄，并獨立閱片，每例切片選擇10個高倍視野(10× 40倍)。Cofilin-1蛋白在細胞質中呈棕黃色顆粒為陽性表達，按染色強度和陽性細胞百分比綜合評分。染色強度：0分：無染色；1分：弱陽性；2分：中度陽性；3分：強陽性。按陽性細胞百分比：1分：1%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：76%～100%。然后按照陽性細胞數×染色強弱計算總分，總分＜4分為陰性，≥4分為陽性。

1.5 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行數據分析，計數資料及率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 結腸癌組織、轉移淋巴結組織和癌旁正常組織Cofilin-1蛋白表達水平比較 Cofilin-1蛋白在60例結腸癌組織、26例轉移淋巴結組織中表達率分別為76.7%、61.5%，均明顯高于40例癌旁正常組織的32.5%。Cofilin-1在結腸癌組織、轉移淋巴結組織中的表達率明顯高于癌旁正常組織，差異均有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 Cofilin-1在結腸癌組織中的表達 圖像Cofilin-1蛋白表達定位于細胞質，呈棕黃色，見圖1、圖2。

圖1 癌旁正常組織Cofilin-1的表達（SP，×400）

圖2 結腸癌組織Cofilin-1的表達（SP，×400）

2.3 Cofilin-1蛋白表達與結腸癌臨床病理學特征的關系 Cofilin-1蛋白陽性表達在結腸癌組織分化程度、Dukes分期、漿膜侵犯及淋巴結轉移間差異有統計學意義(P＜0.05)，而與患者性別、年齡、腫瘤大小間差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 Cofilin-1蛋白表達與結腸癌臨床病理學特征的關系(例)

2.4 Cofilin-1蛋白在結腸癌組織中的表達與患者預后的關系 60例患者隨訪3年以上，有2例失訪。58例患者中有33例存活，3年生存率為56.9%。生存組結腸癌組織中Cofilin-1陽性表達率明顯低于死亡組，差異有統計學意義(χ2=6.73，P＜0.05)，見表2。

表2 Cofilin-1蛋白表達與結腸癌患者預后的關系[例（%）]

3 討 論

腫瘤的轉移過程相當復雜，由多種因素和多種步驟共同參與。近來研究發現，Cofilin-1蛋白在此過程中扮演了重要角色。Cofilin屬于肌動蛋白解聚因子家族，由5個α螺旋、5個β折疊及C末端的一個短β鏈構成，呈現一個折疊結構，富集于運動前沿如細胞褶皺處和偽足[4]。Cofilin蛋白有兩種亞型，即Cofilin-1和Cofilin-2。Cofilin-1定位于11q13染色體。Cofilin在去磷酸化的形式下激活，繼而與肌動蛋白絲(F肌動蛋白)結合，實現對F肌動蛋白的剪切；同時增加肌動蛋白單體(G肌動蛋白)從纖維末端的解離速度，使F與G肌動蛋白加速解聚，從而重構細胞前端的偽足和片層結構，調節細胞向前“邁步”[3，5]。通過上述一系列細胞功能轉換，Cofilin實現了對腫瘤細胞的發生、運動方向的確定、胞核分裂、轉移速度及侵襲性的重要調控作用[6]。

研究發現，Cofilin-1在食管癌、胃癌、肺癌、卵巢癌、原發性乳腺浸潤性導管癌細胞及神經膠質瘤中都有較高表達，且在腫瘤早期即能檢測到[7-8]。通過對胃腸內分泌細胞腫瘤標本進行研究發現，Cofilin-1與腫瘤侵襲深度明顯相關，其可能是預測胃腸內分泌細胞腫瘤預后的分子標記[9]。Wang等[10]發現，Cofilin-1與食管癌病理學分類、淋巴結轉移和臨床分期有關，其表達水平有助于評價食管癌患者的預后。易曉雷等[11]發現Cofilin-1在原發性肝癌轉移組及低分化組中的陽性表達率明顯高于無腫瘤轉移組及高+中分化組，提示Cofilin蛋白表達與肝癌進展及預后密切相關。國外研究發現在SW620細胞(結腸癌細胞系)中，活化的Cofilin-1的表達與CD44的表達呈顯著的正相關，而CD44分子與結腸癌細胞的侵襲性密切關聯[12]。另有研究發現，凝血因子Xa可通過LIMK1介導Cofilin-1失活抑制癌細胞遷移[13]。通過小干擾RNA技術，使得Cofilin表達下降，發現可以抑制腫瘤細胞的生長及侵襲[14]。這些研究均提示Cofilin-1蛋白的表達活性與腫瘤細胞的侵襲性密切相關。

Cofilin-1與結腸癌相關性的研究目前為止比較少見。本研究結果提示：Cofilin-1在結腸癌組織、轉移淋巴結組織中的表達率明顯高于癌旁正常組織；Cofilin-1蛋白的表達與結腸癌患者的年齡、性別、腫瘤大小無關，而與組織學分級、Dukes分期、漿膜侵犯及淋巴結轉移有關；Cofilin-1的表達與患者生存預后密切相關；上述結果均說明其在腫瘤增殖、轉移過程中發揮重要的作用。其作用機制及細胞內信號調節等方面還不是很清楚，可能是Cofilin通過一系列的調控因素，如酪氨酸激酶、上皮生長因子、磷酸肌醇、原肌球蛋白、細胞外鈣等介導了肌動蛋白的聚合，改變了細胞的正常功能，從而促進結腸腫瘤侵襲和轉移，確切機制還有待于進一步的研究。因此，檢測Cofilin-1蛋白可能成為預測早期結腸癌預后的重要指標，控制腫瘤細胞中Cofilin蛋白的異常表達可能成為臨床抗腫瘤轉移的治療及判斷預后的重要策略。

[1]賈瑩瑩,王 進,楊麗敏.USP22和Nanog在結腸癌組織中的表達及臨床意義[J].世界華人消化雜志,2013,21(8)：719-723.

[2]楊萬廣,王萬鵬,張謝夫.ALDH1A2、MMP2和E-cadherin在結腸癌組織中的表達及相關性[J].世界華人消化雜志,2013,21(4)：362-366.

[3]Bryce NS,Schevzov G,Ferguson V,et al.Specification of actin filament function and molecular composition by tropomyosin isoforms [J].Mol Biol Cell,2003,14(3)：1002-1016.

[4]Ghosh M,Song X,Mouneimne G,et al.Cofilin promotes actin polymerization and defines the direction of cell motility[J].Science, 2004,304(5671)：743-746.

[5]Delorme V,Machacek M,DerMardirossian C,et al.Cofilin activity downstream of Pak1 regulates cell protrusion efficiency by organizing lamellipodium and lamella actin networks[J].Dev Cell,2007, 13(5)：646-662.

[6]Kaji N,Muramoto A,Mizuno K.LIM kinase-mediated Cofilin phosphorylation during mitosis is required for precise spindle positioning [J].J Biol Chem,2008,283(8)：4983-4992.

[7]Peng XC,Gong FM,Zhao YW,et al.Comparative proteomic approach identifies Pkm2 and Cofilin-1 as potential diagnostic,prognostic and therapeutic targets for pulmonary adenocarcinoma[J]. PLoS One,2011,6(11)：e27309.

[8]Nishimura S,Tsuda H,Kataoka F,et al.Overexpression of Cofilin 1 can predict progression-free survival in patients with epithelial ovarian cancer receiving standard therapy[J].Hum Pathol,2011,42(4)：516-521.

[9]Yan B,Yap CT,Wang S,et al.Cofilin immunolabelling correlates with depth of invasion in gastrointestinal endocrine cell tumors[J]. Acta Histochem,2010,112(1)：101-106.

[10]Wang WS,Zhong HJ,Xiao DW,et al.The expression of CFL1 and N-WASP in esophageal squamous cell carcinoma and its correlation with clinicopathological features[J].Dis Esophagus,2010,23(6)：512-521.

[11]易曉雷,李旭輝,汪 杰,等.內皮細胞分化基因-1和絲切蛋白-1在原發性肝細胞癌中的表達及其與預后的關系[J].中華實驗外科雜志,2013,30(10)：2060-2063.

[12]Subramaniam V,Vincent IR,Jothy S.Upregulation and dephosphorylation of Cofilin：modulation by CD44 variant isoform in human colon cancer cells[J].Exp Mol Pathol,2005,79(3)：187-193.

[13]楊邦敏,姜 浩,蘇 琦.Cofilin與腫瘤[J].現代生物醫學進展, 2012,12(3)：597-600．

[14]詹建偉,姜支農,焦德敏,等.絲切蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義[J].腫瘤學雜志,2014,20(1)：47-50.

Expression and clinicopathological significance of Cofilin-1 protein in colonic cancer.

LIU Yan1,LIN Jian-jiao1, HU Hong-song1,LIU Rong-huo1,Zhang Ren-bing2.Department of Gastroenterology1,Department of Pathology2, Longgang District People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518172,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression of Cofilin-1 protein and its clinicopathological significance in colonic cancer.MethodsThe expression of Cofilin-1 protein in 60 colonic cancer specimens,40 adjacent normal tissues,26 lymph node metastasis tissues was detected by SP method.Meanwhile,the relationship between the expression of Cofilin-1 and the clinical pathologic factors was analyzed.ResultsThe positive rate of Cofilin-1 expression was 76.7%in colonic cancer specimens,61.5%in lymph node metastasis tissues,which were significantly higher than 32.5%in adjacent normal tissues(P＜0.05).Positive expression of Cofilin-1 protein was significantly associated with histology grading,Dukes stage,serosal invasion and lymph node metastasis(P＜0.05),but not with gender,age and the size of tutor(P＞0.05).Cofilin-1 was closely related to the prognosis of colonic cancer(P＜0.05).ConclusionThe detection of Cofilin-1 protein can help judge the invasion,metastasis and prognosis of colonic cancer.

Cofilin-1 protein;Colonic cancer;Metastasis;Prognosis

R735.3+5

A

1003—6350（2015）21—3130—03

2015-03-06)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.21.1139

林建姣。E-mail：yilianyiyu@163.com