熱毒寧注射液超濾過程色澤控制研究

朱兆林 丁 崗,2

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京210029；2.江蘇康緣現(xiàn)代中藥研究院，江蘇南京211100）

0 引言

熱毒寧注射液是江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司研制的原國(guó)家二類新藥，處方中含有金銀花、青蒿、梔子3味藥材，用于治療上呼吸道感染（外感風(fēng)熱癥）所致的高熱等病癥[1]。

熱毒寧注射液超濾前后的藥液是含多種成分的混合物，既含有有效成分，又含有無(wú)效雜質(zhì)，如不盡量去除雜質(zhì)，會(huì)影響制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性。因此，在熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中應(yīng)用了兩級(jí)膜超濾及膜過濾的工藝對(duì)藥液進(jìn)行精制。

王永香[2]等在聚砜超濾膜對(duì)熱毒寧注射液脫炭液的純化工藝研究中得出，聚砜材質(zhì)截留相對(duì)分子質(zhì)量5 000的板式膜能夠100%去除藥液中的細(xì)菌內(nèi)毒素。江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司的相關(guān)人員對(duì)其安全性已經(jīng)進(jìn)行了較為深入的研究，經(jīng)過兩級(jí)超濾膜超濾后，聚砜材質(zhì)截留相對(duì)分子質(zhì)量10 000的中空纖維膜對(duì)熱毒寧注射液脫炭液中的草酸鹽及樹脂有明顯的去除效果。

李淼[3]等在熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中的關(guān)鍵工序?qū)?xì)菌內(nèi)毒素的去除效果研究中，采用動(dòng)態(tài)濁度法對(duì)活性炭吸附率以及10×103截留超濾對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的去除率進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)活性炭的吸附率為78.7%、細(xì)菌內(nèi)毒素的去除率為99.6%。超濾技術(shù)過程簡(jiǎn)單高效、無(wú)相變、節(jié)能、無(wú)二次污染，在中藥成分的分離、純化和精制中發(fā)揮了重要作用，尤其能顯著提高中藥注射劑的安全性、穩(wěn)定性及質(zhì)量可控性[4]。

江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司在超濾工藝方面進(jìn)行了較多的研究[5-7]。本文主要針對(duì)超濾過程對(duì)熱毒寧注射液的色澤控制進(jìn)行了研究。

色澤是指中藥注射劑由于其原料的影響，允許有一定的色澤范圍，但同一批號(hào)成品的色澤必須保持一致，在不同批號(hào)的成品間，也應(yīng)控制在一定的色差范圍內(nèi)。

與2010版《中國(guó)藥典》方法配制的比色對(duì)照液比較，色差應(yīng)不超過規(guī)定色號(hào)的±1個(gè)色號(hào)；靜脈注射劑的顏色不宜過深，以便于可見異物的檢查和控制。

熱毒寧注射液成品的色澤經(jīng)與黃色標(biāo)準(zhǔn)比色液（2010版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅪA）比較，應(yīng)控制在3～5號(hào)。因熱毒寧注射液在滅菌后色澤稍有加深，因此超濾后的藥液色澤最好控制在3～4號(hào)，不宜超過4號(hào)。

1 儀器和材料

10 000板式膜組件（超濾系統(tǒng)為：JMCDCUF800，16塊膜，2.5 m2/塊；截留相對(duì)分子質(zhì)量為10×103，聚醚砜材質(zhì)，Millpore）；電機(jī)為DV160L4/V，SEW電機(jī)（蘇州）有限公司。

10 000中空纖維超濾膜組件（5個(gè)模組，規(guī)格型號(hào)CLW（N）-05，90 mm×1.1 m，纖維內(nèi)徑0.2 mm，纖維外徑0.4 mm，截留相對(duì)分子質(zhì)量為10×103，聚砜材質(zhì)PS），北京旭邦膜設(shè)備有限公司；Y100L1-4型變頻調(diào)速交流三相異步電機(jī)，天津大明電機(jī)股份有限公司。

Y-1-10型標(biāo)準(zhǔn)比色液，上海市食品藥品檢驗(yàn)所。

2 方法與結(jié)果

2.1 相關(guān)測(cè)定

2.1.1 試驗(yàn)樣品的制備

小容量注射劑車間按照熱毒寧注射液生產(chǎn)工藝要求，制備熱毒寧注射液10 000超濾前液適量，備用。

2.1.2 色澤的測(cè)定

熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中溶液的顏色檢查：取待測(cè)樣品2 mL，加水稀釋定容至100 mL，與黃色標(biāo)準(zhǔn)比色液（2010版《中國(guó)藥典》一部附錄ⅪA）比較，應(yīng)符合熱毒寧注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，即藥液色澤為3～5號(hào)。

2.1.3 蛋白質(zhì)的測(cè)定

蛋白質(zhì)檢測(cè)方法[2，7]：取藥液1 mL，加新鮮配制的30%磺基水楊酸試液1 mL，混合放置5 min，不得出現(xiàn)混濁，則判為陰性。

2.1.4 樹脂的測(cè)定

樹脂檢測(cè)方法[2，7]：取藥液5 mL，加（濃）鹽酸1滴，放置30 min，應(yīng)無(wú)明顯的混濁或沉淀，則判為陰性。

2.1.5 草酸鹽的測(cè)定

草酸鹽檢測(cè)方法[2，7]：取藥液2 mL，加3%氯化鈣試液2～3滴，放置10 min，不得出現(xiàn)混濁或沉淀，則判為陰性。

2.1.6 梔子苷的測(cè)定[2，7]

（1）采用高效液相色譜法，色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)設(shè)計(jì)：色譜柱PhenomenexC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以0.05 mol/L磷酸氫二鈉（用磷酸調(diào)pH6.0）-乙腈（88:12）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)237 nm，理論板數(shù)按梔子苷峰計(jì)算不低于2 500。

（2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取梔子苷對(duì)照品適量，加甲醇-水（1:1）溶解，制備成約含梔子苷0.06 mg/mL的溶液，搖勻，即得。

（3）供試品溶液的制備：精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，備用。

（4）再精密量取（3）中備用液5 mL，置于10 mL容量瓶中，加50%甲醇水溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

（5）測(cè)定方法：分別精密量取對(duì)照品及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算即得。

超濾前后藥液中梔子苷的轉(zhuǎn)移率＝C2M2/C1M1

式中 C1——超濾前藥液中梔子苷的含量，mg/mL；

M1——超濾前藥液的重量，kg；

C2——超濾后藥液中梔子苷的含量，mg/mL；

M2——超濾后藥液的重量，kg。

2.1.7 綠原酸的測(cè)定[2，7]

（1）采用高效液相色譜法，色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)設(shè)計(jì)：色譜柱PhenomenexC18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以1%醋酸水溶液-甲醇（80:20）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm，理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于3 000。

（2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對(duì)照品6 mg，置于100 mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇（1:1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（3）供試品溶液的制備：精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加1%醋酸水溶液-甲醇（1:1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

（4）測(cè)定方法：分別精密量取對(duì)照品及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算即得。

超濾前后藥液中綠原酸轉(zhuǎn)移率＝C2M2/C1M1

式中 C1——超濾前藥液中綠原酸的含量，mg/mL；

M1——超濾前藥液的重量，kg；

C2——超濾后藥液中綠原酸的含量，mg/mL；

M2——超濾后藥液的重量，kg。

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

針對(duì)熱毒寧注射液10 000超濾過程中對(duì)色澤的影響，從超濾液的pH值（A）、超濾液的溫度（B）、板式膜及中空纖維膜的超濾比例（C）、超濾過程中膜的進(jìn)出口壓力差（D）這4個(gè)因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，采用L（934）正交設(shè)計(jì)因素水平表（表1），考察10 000超濾過程對(duì)色澤的影響。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果如表2所示。方差分析如表3所示。

表1 影響10 000超濾膜的因素水平

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表3 方差分析

通過極差R值大小及趨勢(shì)顯示，各因素對(duì)色澤影響大小的順序?yàn)椋喊迨侥ず椭锌绽w維膜的超濾比例＞超濾前藥液pH值＞超濾過程中膜的進(jìn)出口壓力差＞超濾液的溫度。通過正交試驗(yàn)表得出最終的優(yōu)選的超濾參數(shù)為：A2B2C2D3，即超濾前藥液pH＝4.6，藥液在30 ℃保溫條件下，10 000超濾過程中保持進(jìn)出口壓力差在0.05～0.07 MPa，采用板式膜和中空纖維膜的超濾比例為1:1。

同時(shí)，采用優(yōu)化后的超濾方法進(jìn)行熱毒寧注射液生產(chǎn)，檢測(cè)相應(yīng)的指標(biāo)性成分如表4所示。

表4 藥液超濾前后兩種檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

從表4可以得出：

（1）藥液在優(yōu)化前與優(yōu)化后，其可見異物、蛋白質(zhì)、草酸鹽、樹脂等檢測(cè)指標(biāo)無(wú)顯著差異；

（2）有效成分梔子苷、綠原酸轉(zhuǎn)移率稍有變化，但優(yōu)化前后兩者的轉(zhuǎn)移率仍都能達(dá)到95%以上；

（3）超濾對(duì)藥液的影響是多方面、多層次的，對(duì)藥液的其他影響還需要作進(jìn)一步的系統(tǒng)研究。

3 結(jié)語(yǔ)

目前在熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中，采用10 000分子量及50 00分子量的超濾膜對(duì)其進(jìn)行超濾，超濾過程對(duì)藥液的色澤控制有重要影響。通過10 000超濾過程對(duì)色澤的研究，使熱毒寧注射液在生產(chǎn)過程中的控制又增加了有力的依據(jù)。藥品溶液顏色檢查是控制藥品中有色雜質(zhì)限量的方法，主要控制由生產(chǎn)制備中可能引入的有色雜質(zhì)或貯存中由于藥品不穩(wěn)定而產(chǎn)生的有色產(chǎn)物。有色雜質(zhì)的量在一定程度上也可以用來(lái)判斷該藥品的純度，這種方法已經(jīng)成為藥品質(zhì)量安全檢驗(yàn)的一個(gè)有效的簡(jiǎn)易方法，通過對(duì)藥品外觀顏色以及有色雜質(zhì)呈現(xiàn)出的不同顏色的深淺去判斷有色雜質(zhì)的量，最終確定該藥品是否符合藥品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)。

近年來(lái)，現(xiàn)代膜分離技術(shù)因其高效、節(jié)能等優(yōu)勢(shì)日益在制藥工業(yè)中得到應(yīng)用。20世紀(jì)80年代初，日本漢方制劑專利中已采用微濾澄清水煎液再超濾除雜的工藝。國(guó)內(nèi)近幾十年來(lái)，在中藥制藥方面關(guān)于膜分離的研究有所發(fā)展，但依然處于起步階段，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足中藥生產(chǎn)發(fā)展的需要。

本文僅從熱毒寧注射液生產(chǎn)過程中采用兩種10 000分子量超濾膜進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，在實(shí)際生產(chǎn)過程中還要對(duì)原材料的質(zhì)量、脫碳工藝、有效成分的轉(zhuǎn)移率、灌封過程、滅菌過程、穩(wěn)定性考察數(shù)據(jù)等進(jìn)行深入控制檢查。同時(shí)還要考慮藥液本身的變化和超濾膜的清洗和應(yīng)用的效果。在后續(xù)的生產(chǎn)過程中，具體細(xì)節(jié)控制還有待于進(jìn)一步細(xì)致的探討和研究。

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