Periostin在腎細胞癌中的表達及其臨床意義

江偉東，朱 黎，廖國龍，曾志宇，劉志龍

(珠海市第二人民醫院泌尿外科，廣東 珠海 519020)

Periostin在腎細胞癌中的表達及其臨床意義

江偉東，朱 黎，廖國龍，曾志宇，劉志龍

(珠海市第二人民醫院泌尿外科，廣東 珠海 519020)

目的 研究骨細胞特異性因子2(Periostin)在腎細胞癌組織中的表達，探討其與腎細胞癌臨床病理因素和預后的關系及意義。方法應用Western blot和Real-time PCR檢測90例腎細胞癌組織及相對應的癌旁腎臟組織中Periostin表達情況，并與臨床病理資料及預后進行相關性分析。結果76.67%(69/90)的腎癌組織的Periostin表達高于相對應的癌旁組織，65.56%(59/90)腎癌組織的Periostin mRNA表達高于相對應的癌旁組織，腎細胞癌組織Periostin高表達與腫瘤大小、腎盂侵犯、癌栓、淋巴轉移相關(P＜0.05)，腎細胞癌組織Periostin高表達的患者術后生存時間顯著短于Periostin低表達者(P＜0.01)。結論Periostin表達升高與腎細胞癌的增殖、轉移、浸潤與生存時間密切相關，Periostin可作為預測腎細胞癌轉移和判斷預后的指標。

腎細胞癌；Periostin；轉移；預后

腎細胞癌是泌尿系統中惡性度較高的腫瘤，起源于腎實質泌尿小管上皮系統的惡性腫瘤，占腎惡性腫瘤的80%～90%[1-2]。判斷腎細胞癌預后的主要依據是臨床分期和病理分級，尋求敏感、早期預測腎細胞癌發生發展及預后的分子學標記物尤為重要。骨細胞特異性因子2(Periostin)在多種腫瘤組織中存在過表達，與多種腫瘤發生、發展密切相關[3]。本研究通過Western blot和Real-time PCR的方法檢測腎細胞癌組織和相對應的癌旁腎臟組織中Periostin的蛋白以及mRNA表達，以探討其與腎細胞癌臨床病理因素和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源 選用2004年12月至2010年1月手術切除臨床病理資料完整的腎細胞癌及相對應的癌旁組織石蠟標本90例。所有病例術前均未行放、化療。所有病例均重新切片，確認其病理類型、組織學分級、包膜和腎盂浸潤、有無腎靜脈癌栓及腎門淋巴結轉移等。術后均隨訪5年以上，隨訪截止日期為2014年12月。

1.2 Western blot檢測Periostin 吸去培養基，以細胞裂解液RIPA 100 μl于冰上裂解細胞30 min，高速離心10 min，測定蛋白濃度。加上樣緩沖液，煮沸變性，經過聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、轉膜，10%BSA封閉1 h，加入兔抗人GAPDH和Periostin一抗(1：500)，在4℃過夜孵育；辣根過氧化酶標記的山羊抗兔二抗(1：5 000)，在室溫下孵育1 h；ECL孵育3 min，顯色，以抗GAPDH作為內參。

1.3 Real-time PCR檢測Periostin的mRNA表達 (1)RNA提取：腎癌組織及腎癌旁組織均加入Trizol裂解液，經研磨后，提取細胞總RNA。(2)逆轉錄：采用逆轉錄試劑盒(Takara)，所有操作按照試劑盒說明書進行操作。(3)Real-time PCR：反應體系采用20 μl體系，cDNA 1 μl，上下游引物共1 μl，2×SYBR Green染料10 μl，ROX 0.4 μl，水7.6 μl。反應條件為95℃30 s，95℃5 s，60℃30 s，40個循環。用β-actin mRNA為內參。引物序列如下：β-Actin引物：上游5'-CAGGATCGTTAAGGAGATTA-3'，下游5'-CAGTC TCGCCAGGATAG-3'；Periostin引物：上游5'-TGTCCC AAACTGGGACGATA-3'，下游5'-GGATCTTTACGGA TGTCAGCA-3'。

1.4 統計學方法 應用SPSS19.0軟件進行統計學處理，計數資料組間比較采用χ2檢驗，相關性檢驗采用Pearson秩相關分析，生存分析采用Kaplan-Meier法，行Log-rank檢驗。以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Periostin蛋白在腎癌組織及相對應腎癌旁組織中的表達 76.7%(69/90)的腎癌組織的Periostin表達高于相對應癌旁組織(χ2=19.521，P＜0.0001)，見圖1。

圖1 Periostin蛋白在腎癌及癌旁組織中的表達

2.2 PeriostinmRNA在腎癌組織及相對應腎癌旁組織中的表達 65.56%(59/90)的腎癌組織的Periostin mRNA表達高于相對應癌旁組織(χ2=17.780，P＜0.0001)，見圖2。

2.3 Periostin蛋白水平和mRNA水平的相關性 腎癌組織Periostin mRNA表達水平和Periostin蛋白表達的灰度值有顯著的相關性(r2=0.783，P＜0.0001)，見圖3。

2.4 Periostin在腎癌中表達與臨床病理參數的關系 腎細胞癌組織Periostin高表達陽性率與患者性別、年齡、血尿比較差異均無統計學意義(P>0.05)，而與腫瘤大小、腎盂侵犯、癌栓、淋巴轉移比較差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

2.5 Periostin在腎癌中表達與預后的關系 Periostin的表達水平與預后顯著相關(P＜0.000 1)，腎細胞癌組織Periostin高表達的患者預后差，見圖4。

圖2 Periostin mRNA在腎癌組織及相對應腎癌旁組織中的表達

圖3 Periostin蛋白水平和mRNA水平的相關性

圖4 Periostin在腎癌中表達與預后的生存曲線

表1 Periostin的表達與腎細胞癌臨床病理因素的關系(例)

3 討 論

Periostin在多種惡性腫瘤組織中高表達，包括乳腺癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌和肝癌等[4-7]。Periostin能促進表皮生長因子受體(EGFR)表達和激活Akt-FAK介導的信號傳導途徑，促進血管形成，抵抗低氧環境下誘導的細胞死亡，促進腫瘤細胞的侵襲性、轉移能力[8-10]；Periostin能夠誘導上皮間質轉化，促進腫瘤細胞的轉移和定植[11]；此外，Periostin的C末端區域能與細胞外基質相互作用，作用于細胞外基質纖維生成，影響腫瘤的生長[12]。Periostin本身屬于一種細胞外基質分泌蛋白，可能通過改變細胞外基質，參與腫瘤微環境的變化，影響腫瘤的浸潤性、侵襲性[13-14]。本研究顯示Periostin在腎癌組織中高表達，提示腎癌細胞中Periostin的過表達可能促進腫瘤細胞生長以及轉移。

本研究顯示Periostin mRNA和蛋白水平呈顯著相關性，說明Periostin的過表達主要是由Periostin mRNA的過表達所致，提示Periostin的過表達主要受轉錄水平的調控，而不是蛋白翻譯后的調控，開發特異性的針對結合Periostin基因啟動子活性的特異性小分子藥物，可能是治療腎癌的一個新的方向。

本組資料顯示Periostin高表達陽性率與患者性別、年齡、血尿的差異均無統計學意義，與腫瘤大小、腎盂侵犯、癌栓、淋巴轉移的差異均有統計學意義，且與患者的預后生存相關。提示了Periostin的表達與腎細胞癌的生長和轉移能力呈正相關，Periostin的升高可能會導致腫瘤細胞侵襲力的增強，從而促進腫瘤的轉移浸潤。Periostin作為一種分泌形式的蛋白，從血清檢測Periostin的水平，可能可以作為預測腎細胞癌轉移和預后的一個潛在指標。

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Expression and clinical significance of Periostin in renal cell carcinoma.

JIANG Wei-dong,ZHU Li,LIAO Guo-long,ZENG Zhi-yu,LIU Zhi-long.Department of Urology,the Second People's Hospital of Zhuhai,Zhuhai 519020,Guangdong,CHINA

Objective To evaluate the mRNA and preotein levels of Periostin in renal cell carcinoma(RCC), and to analyze the relationships between its protein level and the clinical pathological features,prognosis of RCC.MethodsWestern blot and real-time PCR were applied to detect the expression levels of Periostin in 90 cases of RCC and the adjacent tissues.The correlations between expression of Periostin and pathological features,prognosis were analyzed.Results76.67%(69/90)and 65.56%(59/90)patients showed significant higher protein and mRNA levels in RCC than adjacent tissues,respectively.The abnormal expression of Periostin correlated with tumor size,renal pelvis invasion,tumor thrombus and lymph metastasis(P＜0.05).Patients with elevated expression of Periostin in RCC had significantly shorter postoperative survival time than those with low expression of Periostin(P＜0.01).ConclusionThe high expression of Periostin correlates with proliferation,invasion,metastasis and patient prognosis.Our results suggest that Periostin may be a potential marker for determining the degree of malignancy and prognosis.

Renal cell carcinoma;Periostin;Metastasis;Prognosis

R737.11

A

1003—6350（2015）11—1578—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.11.0565

2015-01-02)

廣東省中醫藥局課題立項（編號：20131049）

江偉東。E-mail：jweidong1965@126.com