植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)水飛薊中水飛薊賓含量及其他生理指標(biāo)的影響

摘 要 以菊科植物水飛薊為試驗(yàn)材料，采用濃度為200， 300， 400， 500， 600 mg/L的吲哚乙酸和激動(dòng)素溶液分別對(duì)水飛薊進(jìn)行處理，研究2種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)水飛薊賓含量和一些生理特征的影響。結(jié)果表明，在吲哚乙酸的處理下，隨其濃度的升高，水飛薊賓的含量、SOD和POD活性先下降后上升，而MDA和CAT基本不受影響。但在激動(dòng)素處理下水飛薊賓含量逐漸降低，MDA含量先增加后下降，SOD、POD和CAT活性呈上升趨勢(shì)。

關(guān)鍵詞 水飛薊；水飛薊賓；吲哚乙酸；激動(dòng)素

中圖分類號(hào)：Q945 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1673-890X（2015）22-066-03

知網(wǎng)出版網(wǎng)址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/50.1186.s.20150908.1416.014.html 網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015/9/8 14：16：57

水飛薊（Silybum marianum Gaertn.）為菊科水飛薊屬草本植物，又名奶薊、水飛雉，是民間治療肝炎的良藥。栽培以前茬禾谷類、豆類作物為好[1]。水飛薊素是從水飛薊種子中提取的黃酮木酯素類化合物的混合物，主要成分有水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭等黃酮類物質(zhì)，其中水飛薊賓含量最高。目前研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素具有保肝、降血脂、抗氧化、防止糖尿病、保護(hù)心肌和抗腫瘤等生理作用[2-4]。何維明等[5]研究表明，水飛薊油中含有粗脂肪油、8種脂肪酸、12種氨基酸及維生素、鐵等營養(yǎng)成分。因此，水飛薊不僅有較好的醫(yī)療作用，而且具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。

吲哚乙酸（IAA）是一類內(nèi)源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，是最早發(fā)現(xiàn)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，生理作用十分廣泛，包括對(duì)細(xì)胞分裂、伸長(zhǎng)和分化，營養(yǎng)器官和生殖器官的生長(zhǎng)、成熟和衰老的調(diào)控等方面。激動(dòng)素（KT-30）又叫動(dòng)力精，是一種非天然的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有促進(jìn)細(xì)胞分裂和延緩離體葉片和切花衰老，誘導(dǎo)芽分化和發(fā)育及增加氣孔開度的作用。

本試驗(yàn)主要研究不同濃度吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊中水飛薊賓含量和一些生理特征的影響，篩選適宜濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，以期為提高水飛薊相關(guān)品質(zhì)提供一定借鑒。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

水飛薊種子，取自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地。

1.2田間試驗(yàn)

田間試驗(yàn)采用大田栽培法，于5月中旬播種。7月中旬挑選生長(zhǎng)狀況良好并一致的水飛薊進(jìn)行吲哚乙酸和激動(dòng)素處理，設(shè)定濃度為200， 300， 400， 500， 600 mg/L，單株噴施量為30 mL，對(duì)照（CK）噴施等量自來水，每組處理3次重復(fù)。10 d噴1次，連續(xù)噴3次。噴第一次的當(dāng)天測(cè)量株高，以后每隔10 d測(cè)量1次，作好相應(yīng)記錄。

1.3室內(nèi)測(cè)定項(xiàng)目及方法

1.3.1水飛薊賓含量的測(cè)定

取HPLC測(cè)定用對(duì)照品溶液各1， 2， 3， 4， 5， 6 μL，按預(yù)定色譜條件進(jìn)樣分析，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，分別得到水飛薊賓A、B的標(biāo)準(zhǔn)曲線（如圖1、圖2）。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備：精密稱取水飛薊素標(biāo)準(zhǔn)品5.0 mg，于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解、定容，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液即為HPLC法測(cè)定用各標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

供試溶液制備：精密稱量水飛薊新鮮種子5 g，經(jīng)烘箱干燥至種子水分完全散發(fā)。再將烘干的種子粉碎，精密稱量1 g，用50 mL石油醚在70℃下回流3 h。待提取完成后，將溶液過濾，殘?jiān)脼V紙包裹并溫風(fēng)吹干。精密加入150 mL乙酸乙酯，78℃水浴回流3 h，過濾提取液并用20 mL乙酸乙酯分2次洗滌燒瓶以及濾紙。合并濾液和洗滌液濃縮至干，以1 mL色譜純甲醇定容，即為HPLC測(cè)定用水飛薊素供試溶液。

1.3.2丙二醛含量（MDA）的測(cè)定

根據(jù)張治安[6]丙二醛含量測(cè)定方法：MDA含量[μmol/g]=（CVTV1）/1000V2W，式中C：MDA濃度（μmol/L）；VT：樣品提取液的總體積（mL）；V1：樣品提取液和TBA溶液總反應(yīng)液體積（mL）；V2：于TBA反應(yīng)的樣品提取液體積（mL）；W：鮮樣品質(zhì)量（g）；1000是將mL換算成L的系數(shù)。

1.3.3超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定

根據(jù)張治安[6]SOD測(cè)定方法：取低溫保存的鮮樣，稱2 g左右的葉片放在50 mL的離心管，加入20 mL濃度為0.05 mol/L的磷酸緩沖溶液（pH=7.8），研磨，8000 r/min的冷凍離心機(jī)離心20 min，上清液為粗酶液。測(cè)試時(shí)，取3 mL反應(yīng)液+0.02 mL的粗酶液，于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6～10 min，OD650下測(cè)定吸光度。SOD單位為U/g。

1.3.4過氧化物酶（POD）的測(cè)定

根據(jù)張治安[6]POD測(cè)定方法：2 mL 0.3%H2O2溶液+0.95 mL 0.2%愈創(chuàng)木酚溶液+1 mL 0.05 mol/L pH為7.0的磷酸緩沖溶液（PBS）+0.02 mL酶液（對(duì)照用0.05 mol/L磷酸緩沖溶液代替酶液），記錄470 nm處OD降低速度。POD單位為U/g。

1.3.5過氧化氫酶（CAT）的測(cè)定

根據(jù)張治安[6]CAT測(cè)定方法：1 mL 0.3%H2O2溶液+1.9 mLH2O+0.1 mL 酶液，測(cè)定240 nm處OD降低速度。CAT單位為U/g。

1.3.6葉綠素含量的測(cè)定

用TYS-A葉綠素測(cè)定儀直接測(cè)定葉綠素含量。葉綠素單位為mg/g.FW。

1.3.7水飛薊產(chǎn)量的測(cè)定

成熟期，各個(gè)小區(qū)單獨(dú)收取水飛薊種子，分別測(cè)定每個(gè)小區(qū)的水飛薊產(chǎn)量。

1.3.8水飛薊株高的測(cè)定

水飛薊使用植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理后，每隔10 d測(cè)量每個(gè)小區(qū)水飛薊的株高，并取平均值。

2結(jié)果與分析

吲哚乙酸和激動(dòng)素噴施濃度對(duì)水飛薊中水飛薊賓、MDA、SOD、POD、CAT、葉綠素含量的影響測(cè)定結(jié)果列于表1。

2.1吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊中水飛薊賓含量的影響

本試驗(yàn)提取出了水飛薊賓，由表1可知，吲哚乙酸處理過的水飛薊與空白對(duì)照相比，吲哚乙酸濃度在0～300 mg/L時(shí)水飛薊賓的含量呈上升趨勢(shì)，在300～600 mg/L時(shí)水飛薊賓的含量呈下降趨勢(shì)；而水飛薊賓含量隨著激動(dòng)素處理濃度的增加而下降。

2.2吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊丙二醛含量的影響

吲哚乙酸處理后，MDA含量基本在0.005～0.0065 mol/g之間浮動(dòng)，但浮動(dòng)不明顯；而隨著激動(dòng)素處理濃度的增加，MDA含量先增加，后呈下降趨勢(shì)。

2.3吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊超氧化物歧化酶（SOD）活性的影響

噴施吲哚乙酸200 mg/L時(shí)SOD活性下降，而后呈上升趨勢(shì)；激動(dòng)素對(duì)SOD活性影響在試驗(yàn)濃度區(qū)間一直呈上升趨勢(shì)。

2.4吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊過氧化物酶（POD）活性的影響

噴施濃度在0～300 mg/L區(qū)間，隨著吲哚乙酸濃度的增加，POD活性降低，在300 mg/L時(shí)達(dá)到最小值；噴施濃度在400～600 mg/L區(qū)間，POD活性隨吲哚乙酸濃度的增加而增加。而隨著KT-30濃度的增加，POD活性持續(xù)下降。

2.5吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊過氧化氫酶（CAT）的活性影響

隨著吲哚乙酸濃度的升高，CAT的活性在35～40之間浮動(dòng)，且浮動(dòng)不明顯；而隨著激動(dòng)素濃度的增加，CAT活性一直增加。

2.6吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊葉綠素含量的影響

噴施濃度在0～600 mg/L范圍內(nèi)，隨著吲哚乙酸和KT-30濃度的增加，葉綠素含量均持續(xù)上升。水飛薊葉綠素含量KT-30處理高于吲哚乙酸處理。

2.7吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊產(chǎn)量的影響

由表2可以看出，水飛薊產(chǎn)量在吲哚乙酸300 mg/L處理達(dá)最大值，而后隨濃度的增加呈下降趨勢(shì)；激動(dòng)素處理的水飛薊產(chǎn)量一直呈上升趨勢(shì)，故激動(dòng)素的最佳處理濃度還有待探究。

2.8吲哚乙酸和激動(dòng)素對(duì)水飛薊株高的影響

由表3可以看出，吲哚乙酸會(huì)促進(jìn)植物生長(zhǎng)，使其株高明顯高于對(duì)照，而激動(dòng)素會(huì)使其生長(zhǎng)減緩，低于正常水平。

3討論

探究適宜種類及濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)藥用植物有效成分的影響意義重大。本試驗(yàn)水飛薊在不同濃度吲哚乙酸和激動(dòng)素處理下，雖然水飛薊賓含量提高不明顯，但水飛薊產(chǎn)量有一定提高。本探究旨在為藥用植物引種馴化、中藥鑒定以及合理利用土地資源提供理論依據(jù)。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)藥用植物初級(jí)代謝產(chǎn)物和次級(jí)代謝產(chǎn)物的影響作用機(jī)制以及作用程度尚須深入研究。

參考文獻(xiàn)：

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（責(zé)任編輯：丁志祥）