茯苓最佳炮制工藝的綜合評分法研究

王海燕 楊俊杰 梁利香

（信陽農林學院生物與制藥工程學院，河南信陽464000）

茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria Cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核，具有利水滲濕、健脾、寧心之功效，可用于水腫尿少、痰飲眩悸、脾虛食少、便溏泄瀉、心神不安、驚悸失眠[1]。茯苓為常用中藥，是多種方藥及中成藥的原料，有“十藥九茯苓”之說。茯苓中主要含有茯苓聚糖、三萜、樹膠、蛋白質以及脂肪酸等[2]。《中國藥典》[1]（2010 年版一部）茯苓項下收載的加工方法為：“挖出后除去泥沙，堆置‘發汗’后，攤開晾至表面干燥，再‘發汗’，反復數次至現皺紋，內部水分大部散失后，陰干”；炮制方法為：“取茯苓個，浸泡，洗凈，潤后稍蒸，及時削去外皮，切制成塊或切厚片，曬干”。此方法加工生產流程繁瑣，影響有效成分含量，“陰干”后再“浸泡”、“潤蒸”，造成能源浪費。故我們在調查了多個茯苓產地和加工企業的加工方法后，將其生產工藝簡化為：發汗→去皮→切制→干燥，并采用正交試驗設計法，首次以茯苓酸和茯苓多糖的綜合作用為指標，對茯苓的炮制方法進行研究，以期為茯苓飲片的生產提供技術指導。

1 材料、試劑和儀器

1.1 材料與試劑 茯苓藥材購于信陽市藥材站，經信陽農林學院周巍教授鑒定為Poria Cocos（Schw.）Wolf的干燥菌核；茯苓酸對照品為本實驗室自制，經面積歸一化法測定其純度大于98%；D-無水葡萄糖對照品由中國藥品生物制品檢驗所提供，供含量測定用，批號110833-200503；純化水自制；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

1.2 儀器 L600-DP6高效液相色譜儀 （北京普析

通用儀器有限責任公司）；TU-1810紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；梅特勒AB135-S電子分析天平（上海樹信儀器儀表有限公司）；SCQ-8201E超聲清洗儀（上海聲彥超聲波儀器設備有限公司）；水循環恒溫水浴箱（上海智城分析儀器制造有限公司）；微型提取罐（上海雅程實驗設備有限公司）；60-A多功能中藥切片機（濰坊市北方制藥設備制造有限公司）。

2 方法與結果

2.1 茯苓酸的含量測定 參考文獻[3]的方法。

2.1.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.2%甲酸水溶液（80∶20）為流動相；檢測波長為242nm。

2.1.2 對照品溶液的制備 取茯苓酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.25mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 稱取茯苓粉末（過60目篩）約0.5g，精密稱定，置50mL具塞錐形瓶中，精密加甲醇25mL，稱定，浸泡25min，超聲90min，放置，稱重，用甲醇補足減失的重量，濾過，棄初濾液，準確量取續濾液5mL，置于蒸發皿中，水浴蒸干，殘留物用甲醇定容至2mL容量瓶中，即得。

2.1.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液10μL與供試品溶液5～10μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.2 茯苓多糖的含量測定 參考文獻[4]的方法。

2.2.1 粗多糖的提取與精制 稱取茯苓藥材20g，加水煎煮提取2次，合并提取液，提取液以紗布濾過，放冷，離心 5min（2000r/min），分取上清液，濾液加乙醇使含醇量達80%，靜置過夜。過濾，殘渣先后用無水乙醇、丙酮、乙醚多次洗滌，于60℃減壓干燥，即得。

2.2.2 多糖的含量測定

2.2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖103mg，置100mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，即得。

2.2.2.2 標準曲線的制備 精密吸取對照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL， 分別置 25mL 刻度試管中，加入5%苯酚溶液1.00mL，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.00mL，加水至總體積10mL，搖勻，靜置 5min，置沸水浴中加熱15min，再置冷水浴中10min，補充失去的水分至刻度。以2mL蒸餾水同法操作作為空白對照，在490nm處，測吸光度，以葡萄糖濃度對吸收度進行線性回歸，得回歸方程：A=0.0693C+0.0009（r=0.9992）。 試驗結果表明，多糖含量以葡萄糖計在20.6～61.8μg/mL與吸收度線性關系良好。

2.2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取多糖10.0mg，置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作貯備液。

2.2.2.4 含量測定 精密吸取貯備液2mL，按“2.2.2.2”項下方法測定吸收度，從回歸方程中求出供試液中葡萄糖的濃度，再根據粗多糖的提取、精制和供試品溶液的制備方法，計算樣品中茯苓多糖以葡萄糖計的含量。

2.3 炮制工藝的正交試驗設計

2.3.1 因素-水平表 根據簡化的炮制方法，以茯苓酸、茯苓多糖含量為指標，以L9（34）正交表進行設計，對發汗次數、飲片規格和烘干溫度進行考察。因素-水平見表1。

表1 因素-水平表

2.3.2 正交試驗結果 見表2。對正交設計實驗結果進行直觀分析，可知各因素影響的主次順序為：發汗次數＞烘干溫度＞飲片規格。在考察范圍內，炮制工藝的最佳條件可選擇為：A3B2C2。表3為方差分析結果，由F值可知發汗次數有極顯著性影響，烘干溫度有顯著性影響。結合實際，確定炮制方法為：趁鮮，去皮，切制成厚片或丁，70℃烘干。

表2 正交設計試驗結果

表3 方差分析表

2.4 對照實驗 按照《中國藥典》（2010年版一部）茯苓加工方法和本實驗確定的加工方法對茯苓藥材進行處理，并分別測定茯苓酸和茯苓多糖的含量（n=3），結果見表4。從表4可見，按實驗方法中測得的茯苓酸、茯苓多糖分別是藥典方法的136.70%、146.92%。

表4 對照實驗考察結果

3 討論

到目前為止，關于茯苓炮制工藝的研究并不多。許臘英等[5]曾以茯苓多糖為指標對茯苓炮制工藝進行研究。本研究首次以茯苓酸和茯苓多糖的綜合作用對加工方法進行考察，填補這方面的空白。《中國藥典》[1]（2010年版一部）茯苓質量標準項下收載以稀乙醇為溶劑，測定茯苓醇溶性浸出物，考慮到臨床中藥茯苓入中成藥的應用因素，是否應增加醇溶性浸出物為指標，有待進一步考察。

“發汗”是中藥材傳統加工處理方法之一，是將藥材采收后堆置，使其中水分溢出的方法。發汗法操作耗時長，無量化指標，多憑經驗判斷。現今社會對中藥飲片炮制品的生產要求規模化、自動化，對生產的各過程均要嚴格控制。發汗法能否有合適的現代干燥方法替代，有待進一步研究。

在多指標的優化實驗中，綜合指標的計算需對各個指標進行綜合考慮和權衡，因茯苓酸和茯苓多糖的重要性一樣，故在綜合評分法中各占50%。如果茯苓飲片的干燥溫度過高，不僅會影響飲片中茯苓酸和茯苓多糖含量，而且會使飲片顏色加深，影響外觀性狀。

本研究確定的茯苓加工方法，操作簡單，茯苓飲片質量重現性好，可為國家有關部門制定茯苓飲片炮制品標準提供可靠依據。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典（一部）.北京：人民衛生出版社，2010：224

[2] 國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草（上冊）.上海：上海科學技術出版社，1999：554

[3] 昝俊峰，徐斌，於小波，等.全國20個主要產地茯苓質量分析比較研究.中國中醫藥信息雜志，2010，17（8）：34

[4] 李俊艷，魏學軍，石朝珊，等.茯苓皮與茯苓塊中多糖的含量測定.黔南民族醫專學報，2009，22（4）：243

[5] 許臘英，付文強，萬芳，等.茯苓炮制工藝的研究.湖南中醫學院學報，2007，9（1）：44