沙蓬中皂苷類活性成分分析

張 宇 錢斯日古楞 王紅英 王 迪 李茂林 徐 同

（大連工業大學生物工程學院， 遼寧大連116034）

沙蓬Agriophyllum squarrosum（L.） Moq.，別名吉刺兒（蒙古語）、沙米或蒺藜梗，屬于藜科，沙蓬屬草本植物。其莖直立，堅硬，淺綠色，表面具不明顯的條稜。葉由基部分枝，無葉柄，披針形、披針狀條形或條形。其穗狀花序緊密，卵圓狀或橢圓狀，無梗，花被片膜質。果實卵圓形或橢圓形，種子近圓9 形，表面光滑，有時具淺褐色的斑點。沙蓬主要分布在俄羅斯、蒙古以及我國青海、西藏、陜西、山西、新疆、內蒙古、寧夏、甘肅等省區，多生長于沙丘和流動沙丘的背風坡上［1］。沙蓬味苦、澀，性平，具有祛疫、消渴、清熱、解毒、利尿等功效，我國少數民族將其入藥居多，民間也有用于治療糖尿病［2］。有報道稱，沙蓬含有豐富的生物堿、黃酮和皂苷等活性物質，且是其主要藥效成分［3?5］。內蒙古沙漠地區生長有大量的沙蓬，起到固沙、治沙作用。本研究采用比色法和薄層層析法，對沙蓬中皂苷、黃酮、生物堿等主要藥效成分進行定量分析，以期為其加以擴大應開發提供參考；同時對其蛋白質、糖類、脂肪等成分含有量進行標定，以期有利于設計沙蓬藥效成分的分離和純化工藝。

1 材料

WFJ7200 型可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司）；DR?200B 型酶標儀 （德朗生物科技有限公司）；K9860 型凱氏定氮儀（山東海能科學儀器有限公司）；XN?21 型蛋白質消化爐（河南信諾儀器設備有限公司）；薄層層析板GF254（青島基億達硅膠試劑有限公司）；AB?8 樹脂、D280 樹脂（天津市光復精細化工研究所）。Rg3標準品（色譜純，上海江萊生物科技有限公司）；蘆丁（色譜純，薩恩化學技術有限公司）；其他試劑均為分析純。沙蓬，地上全植物，內蒙古庫倫旗沙漠地區生長，由內蒙古民族大學烏力吉教授提供并鑒定為正品，使用前粉碎成50目的粉末。

2 方法與結果

2.1 沙蓬活性成分含有量測定

2.1.1 總黃酮 采用堿性條件下的NaNO2?Al （NO3）3?NaOH 顯色法［6?7］，以蘆丁為標準物（標準液質量濃度為0.23 mg／mL），得回歸方程為Y＝4.279X-0.002 3 （r＝0.992 1）。計算得沙蓬地上部分干物質的總黃酮含有量為10.74 mg／g。實驗采集地沙蓬地上部分中含有豐富的黃酮類，占其干重的1.07%。

2.1.2 總生物堿 采用酸堿滴定法［8］，利用氨水水解，并使用乙醚?氯仿（3 ∶1） 混合液提取，加H2SO4酸化NaOH滴定后，按植物生物堿平均分子量850 g／mol 計算，沙蓬干燥地上部分中的總生物堿含有量為0.055 g／g。因此實驗采集地沙蓬地上部分中含有較豐富的生物堿類，總生物堿占其干重的5.50%。

2.1.3 總皂苷 采用香草醛比色法［9］，以Rg3為標準物（標準液質量濃度為0.2 mg／mL），回歸方程為Y＝0.169 6X＋0.001 4 （r＝0.990 3）。計算得沙蓬地上部分干物質的總皂苷含有量為31.01 mg／g。實驗采集地沙蓬地上部分含有豐富的皂苷類，總皂苷含有量達3.10%。

實驗將沙蓬提取物用石油醚萃取脫脂、正丁醇萃取處理后上AB?8 柱脫糖、D280 柱脫色得到的沙蓬總皂苷為微黃色無定型粉末。利用薄層層析法分析結果見圖1，其在硅膠板上展開后顯示明顯的4 個紫紅色斑點，且其中2 個條帶較寬，顏色也深，表明皂苷的2 個單體含有量較高，有進一步研究和開發價值。

圖1 沙蓬總皂苷薄層層析圖

2.2 沙蓬其他成分含有量測定 沙蓬可溶性蛋白、可溶性糖、脂肪等成分對皂苷、生物堿、黃酮類的提取分離，有阻礙作用。其可溶性蛋白、可溶性糖、脂肪含有量的確定，有利于設計主要藥效成分分離工藝流程。

2.2.1 總蛋白 測定采用凱氏定氮法［10］，沙蓬的干燥粉末經消化與滴定后測得的平均含氮量為1.38%，平均蛋白含有量為8.62%。

2.2.2 可溶性蛋白 采用考馬斯亮藍比色法［11］，以牛血清蛋白為標準物（標準液質量濃度為1.00 mg／mL），得回歸方程為Y＝4.669 3X＋0.004 3 （r＝0.980 7）。計算得沙蓬地上部分干物質可溶性蛋白含有量為0.063 mg／g，占0.063‰。表明沙蓬植物地上部分中可溶性蛋白含有量很少，該特性將大大降低其皂苷等活性成分提取分離的難度。

2.2.3 可溶性糖 采用苯酚?濃硫酸法比色法［12］，以恒定質量的葡萄糖為標準物（標準液質量濃度為0.04 mg／mL），得回歸方程為Y＝37.087X＋0.122 8 （r＝0.992 6）。計算得樣品中可溶性糖含有量為0.032 mg／g，占0.032‰。結果表明，沙蓬地上部分可溶性糖含有量很低，也有利于皂苷等活性成分的提取分離。

2.2.4 脂肪 采用堿水解法［13］，沙蓬的干燥粉末經濃氨水水解，石油醚提取和干燥稱定質量后，計算得到沙蓬地上部分干物質的總脂肪含有量為0.006 7 g／g，平均脂肪含有量為6.73‰。結果表明，沙蓬地上部分中脂肪含有量較可溶性蛋白與可溶性糖稍高，對其活性成分提取分離時的重點是去除脂肪。

3 討論與結論

本研究采用比色法、薄層層析等快速、便捷方法，對內蒙古庫倫旗沙漠地區生長的沙蓬地上部分的皂苷、黃酮、生物堿等進行定量分析，得到皂苷、黃酮、生物堿含有量分別為3.10%、1.07%、5.50%。經薄層層析檢測，沙蓬總皂苷中含4 種以上皂苷單體。沙蓬活性成分皂苷類、黃酮類、生物堿含有量較高，有進一步開發和研究價值。實驗測得的可溶性蛋白、可溶性糖和脂肪的含有量均較低，對傳統運用乙醇提取皂苷、黃酮、生物堿的影響較低，有利于進一步提取和開發，可簡化其活性成分的分離純化工序。實驗中測得的沙蓬實際的可溶性蛋白、可溶性糖和脂肪含有量較低，對沙蓬有效成分的提取干擾較小；皂苷、黃酮、生物堿常作為某些常用藥品以及部分稀有藥品的有效成分［14?18］，3 種成分的含有量均較高。

沙蓬在我國分布廣，在華北、東北、西北以及河南省和西藏自治區等省（區） 均有生長，其中在內蒙古自治區除呼倫貝爾盟林區和農區外，全區幾乎均有分布。沙蓬是一種極為耐寒、耐旱的沙漠地區常見固沙植物，是亞洲大陸干旱?半干旱地區各種類型的流動、半流動及固定沙地上的一個廣布物種，來源十分廣泛。據在鄂爾多斯地區觀察，沙蓬在4 月下旬至5 月上旬種子開始萌發出土，直至10 月初為蠟熟期，此后植株開始枯黃死亡，生長期130 d 左右，根系生長快且發達，有利于在流沙上定居。沙蓬雖然在春、冬季枝葉枯萎，但仍能在地表留存，可適應干旱少雨的環境，遇雨后能出現大量的新生幼苗［19］。沙蓬本身對生長環境要求較低，從播種到收獲時間短，幾乎不需要人工管理，大大減少了生產成本，且其對沙漠化地形有一定的固定作用。因此沙蓬的廣泛種植可對區域性荒漠化有很好的治理作用，在寧夏部分地區也有種植沙蓬用來治理沙漠化［20］。

沙蓬含有皂苷、黃酮、生物堿等重要活性成分，有很好的藥用開發價值；同時其對生長環境要求極低，可降低人工管理成本，又有很好的固沙、治沙和改善環境的作用，因此有很好的推廣應用前景。