液質聯用技術（LC-MS）分析雪花梨中化學成分

陳四平，張盼盼（河北師范大學化學與材料科學學院，河北石家莊050024）

液質聯用技術（LC-MS）分析雪花梨中化學成分

陳四平，張盼盼
（河北師范大學化學與材料科學學院，河北石家莊050024）

摘要：利用液質譜聯用技術配合二極管陣列紫外數據分析雪花梨中化學成分。用Agilent 1200高效液相色譜-3200 QTRAP型質譜聯用儀，C18色譜柱，乙腈-水為流動相梯度洗脫，采用電噴霧負離子模式采集數據，結合二極管陣列紫外數據。經與文獻檢索相關質譜與紫外數據對比分析雪花梨中的化學成分。雪花梨提取物二氯甲烷部位和甲醇部位共監測出7個可推測成分。通過分析對比，推測出雪花梨提取物中7個黃酮類成分。

關鍵詞：雪花梨；液質聯用；黃酮類

雪花梨為薔薇科梨亞科植物，主要產地有河北、湖北、山東、遼寧、安徽、江蘇、甘肅、四川等省[1]，其中河北趙縣的雪花梨為優良品種，每年的產量居全國第一，雪花梨作為大家最喜歡的水果之一，具有清咽利喉、止咳化痰、解酒等很多功效。雪花梨還常作為食用和保健品的原料，如雪梨枇杷膏、止咳梨漿、秋梨潤肺膏等，這些產品均具有良好的清咽潤喉作用[2-3]。雖其療效顯著，但其有關化學成分方面研究較少，僅在其同屬品種刺梨及軟梨中發現黃酮類、生物堿、多糖等成分[4-5]，Durkee等發現梨中含有豐富的多酚類物質，主要為黃酮和酚酸物質，如兒茶素、熊果苷、綠原酸等，其具有抑菌，抗氧化和清除自由基等作用[6]。因此采用現代方法進行了雪花梨總黃酮的提取，并利用高效液相與質譜聯用技術（LC-MS）配合紫外數據對其化學成分進行簡單分析，為進一步開發雪花梨提供研究基礎。

1　材料與設備

1.1材料與試劑

雪花梨：采自河北趙縣；娃哈哈純凈水：山西娃哈哈昌盛飲料有限公司；AB-8大孔樹脂：滄州寶恩化工廠；乙腈（色譜純）：天津市康科德科技有限公司；甲醇、乙醇等（分析純）：天津百世化工有限公司。

1.2儀器與設備

Agilent 1200高效液相色譜-3200 QTRAP型串聯四極桿線性離子阱質譜聯用儀：美國Agilent公司；600-2998高效液相色譜儀-二極管檢測器：Waters公司。

2　方法與結果

2.1雪花梨黃酮的提取和粗分

挑選無腐爛的雪花梨，清洗，去皮去核，切塊，加入少量異VC-Na后，榨汁，加5倍量的60%的乙醇在75℃下水浴浸提2 h，期間不斷攪拌，過濾后對濾液進行減壓濃縮，至濾液為原來的1/10，用稀鹽酸調pH至2～4，在5℃冰箱中放置過夜，離心，得上清液。將上清液采用AB-8大孔樹脂進行吸附，先用大量的蒸餾水洗，后再用二氯甲烷和甲醇進行洗脫，分別收集二氯甲烷和甲醇洗脫液，減壓濃縮洗脫液，冷凍干燥，分別得到二氯甲烷組分和甲醇組分[7-19]。

2.2測定條件

2.2.1測定波長的確定

分別取二氯甲烷、甲醇組分適量，用乙腈溶解，超聲5 min后，以純乙腈為空白，在220 nm～400 nm范圍內進行掃描。得出二氯甲烷組分和甲醇組分在278 nm均有最大吸收波長，因此測定波長選為278 nm。

2.2.2色譜條件

色譜柱：Discovery C18柱；檢測波長：278 nm；進樣量：20 μL；流動相：A（0.05%甲酸水溶液），C（純乙腈）；流速：1.0 mL/min；梯度洗脫，數據分析系統：Empower軟件。梯度洗脫程序設置見表1。

按表1洗脫程序分別對前述樣品二氯甲烷組分和甲醇組分進行高效液相色譜分析，所得高效液相色譜圖見圖1、圖2。

由色譜圖中可以看出，甲醇組分中有4個主要的峰能很好地分離開，各峰出峰時間見表2。其中峰8同峰4的出峰時間一致，峰9同峰5的出峰時間一致，極可能為同一物質。

2.2.3液質聯用條件

液相色譜儀：Agilent 1200系統，并配有四元泵、自動進樣器、柱溫箱和在線脫氣機（美國Agilent公司）；色譜條件：色譜柱為DiscoveryC18（250×4.6mm，5μm）；流速1 mL/min；柱溫25℃；進樣量10 μL；梯度洗脫如表1所列。質譜條件：3200 QTRAP型串聯四極桿線性離子阱型質譜儀（美國AB公司）；配有TurboV離子源；質譜條件如下，離子源：電噴霧離子化源ESI；源噴射電壓（IS）：-4500V，負離子模式檢測；霧化溫度：650℃；霧化氣壓力（GS1，高純N2）：60 psi（1 psi=6.895 kPa）；輔助氣壓力（GS2，高純N2）：65 psi；氣簾氣壓力（高純N2）：30 psi；解簇電壓：-40 V；掃描方式：增強型全掃描（EMS）；EMS采集范圍：100 m/z～1 000 m/z；掃描速度：1 000Da/s；數據分析系統：Analyst1.6。

2.2.4液質聯用試驗

將二氯甲烷組分和甲醇組分分別用乙腈溶解后進入到高效液相-質譜聯用儀（HPLC—MS）中，按2.2.3所述條件進行試驗，所得結果見表2。

根據液質聯用所得高效液相各色譜峰質譜數據圖譜結合高效液相二極管陣列檢測器所得紫外數據圖譜，對雪花梨提取物二氯甲烷組分和甲醇組分中的幾個主要色譜峰進行逐個分析，經與文獻[20]的數據圖譜相對照，初步推測雪花梨提取物二氯甲烷組分和甲醇組分中的化合物成分。其中1號～7號峰確定了相應歸屬，8、9號峰的出峰時間、MS、UV分別同4、5號峰，應為同一化合物。

3　結論

運用高效液相色譜-二極管陣列聯用和高效液相色譜-質譜聯用技術得到二氯甲烷和甲醇兩部分的紫外圖譜和質譜，并將其與文獻標準圖譜進行了核對，分析出雪花梨中可能含有5-去氧牡荊苷、5，7，8-三羥黃酮-7-葡萄糖醛苷、表兒茶素沒食子酸酯、鳶尾甲黃素A、紫黃檀素、楊梅苷、噴杜苷等黃酮成分。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.24.038

收稿日期：2015-08-17

作者簡介：陳四平（1963—），男（漢），研究員，碩士，研究方向：天然產物活性成分研究及新藥開發。

Chemical Composition of Snow Pear by Liquid Chromatography-mass Spectrometry（LC-MS）Analysis

CHEN Si-ping，ZHANG Pan-pan
（College of Chemistry and Materials Science，Hebei Normal University，Shijiazhuang 050024，Hebei，China）

Abstract：Using liquid mass spectrometry technology with diode array ultraviolet data analyzed chemical composition in the snow pear.With Agilent 1200 high performance liquid chromatography（HPLC）-3200 type QTRAP mass spectrometry instrument，C18column，acetonitrile and water as mobile phase gradient elution，using electrospray ion mode to collect data，combined with diode array ultraviolet data.The literature retrieval related mass spectrometry and ultraviolet data contrast analysis of chemical composition of snow pear.Snow pear extract methylene chloride site and methanol were monitoring 7 can be speculated that component.through the analysis comparison，and infer the snow pear extract seven flavonoids ingredients.

Key words：snow pear；LC-MS；flavonoids