人組織激肽釋放酶6在腫瘤的表達(dá)及其預(yù)期診斷價(jià)值

李 偉，李 霞，陳英劍，胡成進(jìn)

人類緩激肽釋放酶基因家族（human kallikrein，KLKs）是絲氨酸蛋白酶的一個(gè)亞家族，由15個(gè)成員組成（KLK1－KLK15），編碼相應(yīng)的 KLK1－KLK15 蛋白，具有胰蛋白酶或糜蛋白酶活性。KLK6編碼KLK6蛋白，存在于血清、哺乳婦女的乳汁、妊娠羊水和男性精液等多種體液中，在卵巢癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中異常表達(dá)，是KLKs中重要的腫瘤標(biāo)志物之一。為了為診斷和預(yù)后提供參考，本文對(duì)其相關(guān)問題做一綜述。

1 KLKs基因特點(diǎn)

KLKs共同定位于染色體19q13．4，串聯(lián)排列，緊密連接，互不干擾，結(jié)構(gòu)高度相似。KLKs有以下共同特征：外顯子數(shù)量和長(zhǎng)度相似、內(nèi)含子區(qū)域高度保守、翻譯起點(diǎn)和終點(diǎn)保守，30%～80%的序列同源。KLK基因在類固醇激素的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)下產(chǎn)生一條細(xì)胞內(nèi)單鏈無活性多肽，包括一段氨基端信號(hào)肽、一段前肽和催化結(jié)構(gòu)域，信號(hào)肽和前肽的裂解后激活，產(chǎn)生分泌的成熟絲氨酸蛋白酶［1］。

2 KLK6基因特點(diǎn)、表達(dá)調(diào)節(jié)和生物學(xué)功能

KLK6原稱為絲氨酸蛋白水解酶9，全長(zhǎng)約11．0 kb，位于KLK5和KLK7之間，由7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子組成，前兩個(gè)外顯子不翻譯，其余五個(gè)外顯子組成催化三聯(lián)體位點(diǎn)，內(nèi)含子排列遵循Ⅰ－Ⅱ－Ⅰ－0模式。

KLK6表達(dá)的調(diào)節(jié)取決于DNA，mRNA和蛋白水平的調(diào)節(jié)，但也依賴于組織特異微環(huán)境的相互作用。這些因素和類固醇激素的調(diào)節(jié)、復(fù)制數(shù)量的改變、miRNAs、酶抑制劑等共同影響KLK6的表達(dá)，導(dǎo)致KLK6表達(dá)異常。在惡性腫瘤中，常見的基因組的不穩(wěn)定性也可能導(dǎo)致基因含量的變化，影響KLK6的表達(dá)。

KLK6參與體內(nèi)許多的生化過程，包括參與牙齒的發(fā)育，神經(jīng)可塑性的維持，皮膚角質(zhì)層的形成，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，參與級(jí)聯(lián)信號(hào)，激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，參與血管的生成和炎癥反應(yīng)。KLK6在不同的癌癥和疾病中，RNA或蛋白質(zhì)過度表達(dá)或者表達(dá)不足，是一種潛在的臨床生物標(biāo)志物［2］。

3 KLK6在腫瘤的表達(dá)和應(yīng)用價(jià)值

3．1 卵巢癌 Hoffman等用免疫熒光法研究發(fā)現(xiàn)30%的卵巢癌患者KLK6為陽(yáng)性，晚期、漿液性、行滿意減滅術(shù)（殘留灶＞1 cm）的卵巢癌患者，KLK6水平升高。單因素分析顯示KLK6陽(yáng)性的卵巢癌患者似乎更容易疾病惡化和死亡。多因素分析：KLK6是卵巢癌一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良的指標(biāo)［3］。Dimandis等用免疫分析法測(cè)定了146例原發(fā)性卵巢癌患者的KLK6濃度，當(dāng)診斷特異度為90%和95%時(shí)，血清KLK6診斷的敏感度分別為52%和47%［4］。Sherbini等用ELISA方法檢測(cè)27例卵巢癌患者血清，KLK6特異性和敏感性分別為 56．8%和 64%［5］。總之，越來越多的證據(jù)表明KLK6參與腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展，并作為篩選、診斷、預(yù)測(cè)和預(yù)測(cè)的一個(gè)有用的腫瘤標(biāo)志物。

3．2 胃癌 Hisashi等用實(shí)時(shí)RT－PCR檢測(cè)了胃癌患者KLK6的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)胃癌組織KLK6表達(dá)明顯升高，并與淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，且KLK6表達(dá)升高的胃癌患者的生存率較差。另外，他們建立了一個(gè)利用小干擾RNA介導(dǎo)的基因沉默的KLK6穩(wěn)定抑制胃癌細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)KLK6基因沉默的小干擾RNA與模擬轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比有效地抑制細(xì)胞增殖、S期的細(xì)胞比例和侵襲性。所以，KLK6在胃癌組織的明顯過度表達(dá)狀態(tài)可以作為一個(gè)有力的預(yù)后診斷標(biāo)志物，同時(shí)也表明KLK6可以作為胃癌治療的新靶點(diǎn)［6］。Jin等用 PT－PCR方法檢測(cè) KLK6 mRNA發(fā)現(xiàn)，胃惡性腫瘤組織KLK6的轉(zhuǎn)錄水平大約是周圍正常組織的8倍，KLK6 mRNA的表達(dá)增高，是正常組織的 3．6倍；用 Western blotting檢測(cè) KLK6，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤組織中表現(xiàn)高表達(dá)；用ELISA方法檢測(cè)胃癌患者血清KLK6，其表達(dá)是正常人的1．75倍。因此推斷KLK6有可能成為胃癌診斷的生物學(xué)指標(biāo)［7］。3．3 乳腺癌 最初，Pampalakis等用半定量 RTPCR方法發(fā)現(xiàn)KLK6在正常和乳腺癌細(xì)胞系中差異表達(dá)，用ELISA方法檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液中KLK6蛋白濃度，發(fā)現(xiàn)KLK6在乳腺癌細(xì)胞中表達(dá)升高［8］。國(guó)內(nèi)學(xué)者用免疫組化和RT－PCR的方法檢測(cè)88例原發(fā)性乳腺癌患者組織KLK6蛋白和mRNA的表達(dá)，表明KLK6在原發(fā)性乳腺癌中陽(yáng)性表達(dá)率為78．4%，并與腫瘤組織的臨床病理學(xué)特征相關(guān)；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及ER陽(yáng)性的乳腺癌組織中KLK6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率顯著低于未轉(zhuǎn)移組及ER陰性組。KLK6 mRNA在原發(fā)性乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織；但有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中，KLK6 mRNA的表達(dá)水平明顯低于未轉(zhuǎn)移組［9］。因此，KLK6蛋白及其mRNA的異常表達(dá)，可能與原發(fā)性乳腺癌的發(fā)生、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)，可能成為原發(fā)性乳腺癌臨床診斷的標(biāo)志物。

3．4 結(jié)直腸癌 Kim等用RT－PCR、免疫組化分析表明KLK6 mRNA在結(jié)腸癌組織中顯著上調(diào)；KLK6在結(jié)腸腺癌明顯表達(dá)而在正常腸黏膜或癌前病變不典型增生不表達(dá)；患者血清中KLK6與非癌細(xì)胞相比分泌增加。通過臨床病理與免疫組化分析143例結(jié)腸癌患者KLK6的表達(dá)，表明KLK6表達(dá)與Dukes分期相關(guān)，KLK6表達(dá)升高與短的生存期和無復(fù)發(fā)生存期明顯相關(guān)。因?yàn)椋琄LK6是結(jié)腸癌預(yù)后不良的指標(biāo)，可以作為結(jié)腸癌的潛在標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)［10］。有研究指出用實(shí)時(shí)定量RT－PCR檢測(cè)結(jié)直腸癌KLK6表達(dá)，顯示KLK6在結(jié)直腸癌中過度表達(dá)，且KLK6表達(dá)陽(yáng)性率為58．2%，KLK6表達(dá)與腫瘤分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤TNM分期呈正相關(guān)。單因素分析顯示KLK6表達(dá)與無疾病生存期（DFS）和整體生存期 （OS）顯著相關(guān)；多因素分析顯示KLK6表達(dá)陽(yáng)性的DFS和OS明顯縮短，并且KLK6是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良的預(yù)測(cè)因素；K－M生存曲線表明KLK6陽(yáng)性的結(jié)直腸癌患者DFS和OS顯著降低［11］。總之，KLK6是結(jié)直腸癌疾病的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后不良的標(biāo)志物。

3．5 肺癌 有研究指出用免疫過氧化物酶標(biāo)記法研究KLK6在肺腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌和類癌腫瘤的表達(dá)，未發(fā)現(xiàn)KLK6在腺癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，而在鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌和類癌中，大多數(shù)惡性腫瘤細(xì)胞被免疫標(biāo)記［12］。有研究指出用RT－PCR技術(shù)研究KLK6在肺癌的表達(dá)，表明KLK6存在于正常的肺組織和非小細(xì)胞肺癌的肺組織，不存在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中，且KLK6 mRNA在肺癌組織中過度表達(dá)，KLK6高濃度與較低的生存率相關(guān)，總之，高濃度的KLK6在非小細(xì)胞肺癌中是腫瘤增殖指標(biāo)和獨(dú)立預(yù)后因素［13］。

3．6 子宮漿液性乳頭狀癌 有研究指出分別用RT－PCR和ELISA檢測(cè)子宮漿液性乳頭狀癌KLK6的表達(dá)水平和KLK6的分泌情況，表明KLK6在子宮漿液性乳頭狀癌高度表達(dá)并在血清和血漿中被釋放，可能作為子宮漿液性乳頭狀癌的復(fù)發(fā)早期診斷和治療反應(yīng)的一種新型標(biāo)志物［14］。

3．7 腦膠質(zhì)瘤 Jasmine等用免疫過氧化物酶標(biāo)記法發(fā)現(xiàn)KLK6在神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記陽(yáng)性，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞核標(biāo)記強(qiáng)陽(yáng)性；脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞也顯示細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核標(biāo)記染色［12］。Kristen等研究發(fā)現(xiàn)在腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤KLK6高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒性劑的抵抗，并且是降低患者術(shù)后生存率的指標(biāo)［15］。

綜上所述可知，近年來KLKs在腫瘤中潛在的診斷、監(jiān)測(cè)和預(yù)后應(yīng)用價(jià)值備受關(guān)注。越來越多的研究表明，腫瘤患者KLK6不論是在mRNA還是在蛋白質(zhì)水平的異常表達(dá)都有潛在的臨床診斷和預(yù)后價(jià)值。在未來研究中應(yīng)進(jìn)一步研究在惡性腫瘤組織和血清中KLK6的表達(dá)情況，為腫瘤的早期診斷、治療療效和預(yù)后評(píng)價(jià)提供更好的臨床指標(biāo)。

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