中獸藥新藥毒理學研究及一般毒理學研究中應當注意的問題

薄永恒高迎春楊志昆馮 濤張傳津章安源

(1.山東省獸藥質量檢驗所,山東濟南 250022;

2.山東省畜產品質量安全監測與風險評估重點實驗室,山東濟南 250022)

中獸藥新藥毒理學研究及一般毒理學研究中應當注意的問題

薄永恒1，2*高迎春1，2楊志昆1，2馮 濤1，2張傳津1，2章安源1，2

(1.山東省獸藥質量檢驗所,山東濟南 250022;

2.山東省畜產品質量安全監測與風險評估重點實驗室,山東濟南 250022)

本文在對中獸藥新藥的毒理學研究的重要性和注意事項的綜述基礎上,詳細介紹了一般毒理學研究當中需要注意的問題,以期為中獸藥新藥毒理學的研究提供參考。

中獸藥;毒理學;注意事項

藥品作為一種特殊商品，它的安全性是不言而喻的，也是其他商品不可相比的。我們對新獸藥進行臨床前毒理學研究與評價的目的，就是為研究新藥對機體的損害及損害程度提供科學的依據，從而保障臨床用藥的安全性。一種新獸藥的毒理學研究工作做得細致、深入，配合藥效學的有效劑量，臨床應用時方法得當，可以起到拯救生命，避免經濟損失的作用；否則，影響動物疾病發展，結果可能是動物的死亡，病情的蔓延，帶來不可估量的損失[1]。

1 中獸藥毒理學研究的重要性及分類

我國中藥的發展歷史悠久，文獻中記載的中藥已達8000多種，中藥在祖國醫學中占有重要地位。近年來，隨著養殖業的不斷發展，中獸藥因其有細菌不易產生耐藥性、廣譜抗病毒、扶正祛邪等方面的作用，許多獸用純中藥制劑在獸醫臨床上得到廣泛的應用，但隨之而來的是中獸藥的毒性和藥物殘留問題。有些人認為中獸藥比西藥安全，無毒副作用，無殘留，但是在實際應用中，有的中獸藥也具有一定的毒副作用，可長期以來被視為無毒的中獸藥，用法不當也可產生毒性。而且中獸藥成分復雜，有些成分的潛在毒性尚無充分了解，可出現意想不到的不良反應。例如，夏枯草、土鱉蟲、牛蒡子等可引起過敏[2]；款冬花、花椒的揮發油有致癌作用；石菖蒲和水菖蒲揮發油可以致畸；廣防已、關木通含有馬兜鈴酸，能引起染色體損害并對嚙齒動物有較強的致癌作用[3]。新中獸藥能否獲得相關部門的批準而上市銷售和臨床使用，首先要對其有效性和安全性綜合評價。因此，作為中獸藥安全性評價中的中藥毒理學也越來越重要，毒理學逐漸從藥理學中分離出來而初步形成了一個獨立的學科。

中獸藥毒理學研究與西藥毒理學研究相比，在廣度上和深度上都有較大的差距。有關中獸藥毒副作用的研究尚未形成真正意義上的中獸藥毒理學。廣義的中獸藥毒理學應當包括基礎理論性和應用性兩部分。中獸藥理論中所涉及的“18反”和“19畏”藥性理論、重金屬的毒性、古代文獻中中獸藥毒性（大毒、有毒、小毒）的分類依據以及中藥毒代動力學的方法學等內容屬于基礎理論性的中獸藥毒理學；而以臨床應用和新藥注冊為目的的藥物安全性評價則是應用性的中獸藥毒理學。事實上二者也難以截然分開。

2 一般毒性實驗需要注意的問題

一般毒性實驗是中獸藥毒理學實驗的首要實驗，也是初步確定毒性大小的實驗，因此，一般毒性實驗做的成功與否關系到后續毒理實驗的結果。中獸藥新藥審批中注冊資料要求中毒理學方面對一般毒性即：急性和長期毒性試驗要求比較多，下面就是一般毒理學試驗研究中需要注意問題的詳述。

2.1 注意相關法規的研究

首先要認真研究《新獸藥審批》避免對新獸藥審批辦法及相關法規認識上的誤區，理解錯位等。在新藥研制中，對法規研究不夠深透，輕易定方、開發新藥而造成資金和時間浪費的例子不少。比如某中藥的傳統復方制劑在其毒理學研究中做了急性毒性，亞急性毒性試驗，結果不錯，沒有毒性；但在《中獸藥、天然藥物注冊分類及注冊資料要求》中，有關三類1中的新中獸藥——傳統中獸藥復方制劑的規定：“傳統中獸藥復方制劑，處方中藥材必須具有獸藥國家標準，并且該制劑的主治病證在國家中成藥標準中沒有收載，可免做藥效、毒理研究。但是，如果有下列情況之一者需要做毒理試驗：①含有獸藥國家標準中標示有毒性（劇毒或有毒）及現代毒理學證明有毒性的藥材；②含有十八反、十九畏的配伍禁忌”。而此中獸藥復方中沒有國家規定的毒性單方，也沒有十八反、十九畏的配伍禁忌。因此，此復方的藥效、毒理試驗可以免去，避免資金和時間浪費。所以對相關法規的研究是十分必要的。

2.2 對中藥新藥的全面了解

在進行一般毒理學試驗之前要對中藥進行充分的了解：①中藥復方或單方成分組成；②他們各自一般毒性大小；③理化性質：熔沸點，水溶性或脂溶性，在常見溶劑中的溶解度、乳化性或混懸性、儲存穩定性等；④了解中藥的使用情況，包括使用方式，使用范圍，給藥途徑，給藥劑量。這些資料都是為毒性試驗的設計和對試驗結果進行綜合評價等提供了參考。

2.3 嚴格全面地進行動物試驗設計

試驗設計關系到試驗的各個方面，因此要仔細周全地設計。主要從以下幾個方面入手：

2.3.1 試驗動物的選擇

（1）物種與品系的選擇 對于中獸藥來說，一般選擇昆明鼠，其他品系的小白鼠也有選擇，大白鼠也可選擇，也可以直接選擇靶動物。具體還要看實際情況和藥物的特性而定，比如豚鼠對組織胺極敏感，所以很適合作平喘藥和抗組織胺藥的毒性研究。

（2）個體的選擇 一定要嚴格選擇健康、生理狀況、營養狀況良好的試驗動物，年齡、體重、性別要按標準嚴格控制，同一批試驗動物體重變異范圍不得超過所用動物平均體重的10%，否則會影響試驗結果。試驗動物的體重是在進行試驗時稱重，如果購買小白鼠時體重是18-20g，但是為了適應實驗室環境，飼養了3天，反而動物的體重增加的過多，不再適合做試驗了。生理狀態一定要求是沒交配，沒受孕的動物。

（3）動物的數量及標記 動物數量一般急性要求每組十只，雌雄各半，而且要注意雌雄分籠喂養。動物要進行標記，也有很多方法，不再贅述。

2.3.2 飼養環境及條件 動物的飼養一定要在標準環境下飼養。例如，大白鼠對環境因素特別敏感，強烈的陽光，噪音都可以引起大白鼠的生化指標的變化，影響了試驗數據。

2.3.3 給藥途徑 經口的灌胃，飼喂，吞膠囊；經皮膚染毒的；其他的如靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和腹腔注射等。一般中藥用于灌胃的比較多，其中要注意灌胃體積，小白鼠每只最多一次灌胃0.8ml，可多次灌胃，但是容易灌嗆，從而引起肺部的炎癥，所以要注意灌胃針的制作和灌胃的手法，盡量避免灌嗆。大白鼠一般不會出現灌嗆現象，主要因為大白鼠胃的特殊解剖構造沒有逆嘔現象。中藥一般毒性較小，灌胃條件下多測不到LD50，所以要測最大耐受量實驗，此時要注意中藥最大濃度，以及最大灌胃量的關系，避免試驗的失敗，一般中藥水提物的最大濃度可達到3～5g/ml，但需要注意中藥水溶性不一致。

2.3.4 劑量的選擇 首先做急性毒性試驗前了解中藥的成分，從而大體了解中藥的毒性，必要時，可先做預試驗，根據預試驗來確定LD50的大體劑量，或根據預試驗確定中藥無毒來做最大耐受量試驗。在做慢性毒性實驗時，一般確定高、中、低三個劑量和一個空白對照組。三個劑量的確定都都有相關的規定。

2.3.5 給藥的時間 急性毒性試驗時間為7d，慢性毒性試驗根據實際臨床用藥時間的不同而不同，臨床用藥期為1～3d，慢性毒性試驗時間為14d；臨床用藥期為7d，臨床用藥期為28d；臨床用藥期為30d，慢性毒性試驗時間為90d；臨床用藥期為30d以上的慢性毒性試驗時間為6個月。

2.3.6 試驗結果的觀察和試驗指標的測定 這里要觀察的現象和指標的測定在相關資料上都有具體介紹，注意各種病理現象的觀察，及大體解剖的觀察，慢性試驗后的各種指標都要認真測定，不可遺漏。

3 毒理學實驗中的幾點思考

筆者在大量毒理學實驗基礎上，獲得了一些啟發和思考。從毒理學研究的實驗角度來分析，新藥臨床前毒理學研究與評價，其作用又是有一定局限性，并不是做了一些毒理學研究工作，尚未發現明顯毒性，就確定該藥上臨床就一定安全。進一步分析，發現以下幾點問題，值得注意。

（1）實驗動物與靶動物對藥物的反應有種屬差異性。有的反應只對靶動物出現，有的只對實驗動物出現，而對實驗動物和靶動物共同出現的反應僅占較小的比率。因此，以動物實驗結果直接推論到靶動物的一致性，也只能是一個較小的比率。

（2）毒性實驗所用的動物多是在嚴格管理的條件下繁育出來的，是健康的。而臨床用藥的是靶動物，其病情輕重不同，病的種類不同，個體體質不同，對藥物的敏感性不同。因此，實驗動物與病畜對同一藥物的反應也不可能完全相同。

（3）在動物毒性試驗中所用藥物劑量較大，它與臨床的用藥量相差懸殊，故兩者的反應難得一致。

（4）實驗室設備條件、實驗人員的技術水平等，都直接影響實驗結果，這也是一個極為重要的環節。

由此可見，干擾一般毒理學研究的因素很多。因此，一般毒理學研究結果能反應出藥物的毒性，但其反映新藥臨床上的安全性有一定局限；另外提高實驗人員的實驗素質也是影響毒理學實驗結果的非常重要的一點。

（5）目前獸藥的毒理學技術要求就本身來講可以參考的資料也比較多，比如沈建忠主編的《動物毒理學》，農業部1991年頒布的《新獸藥一般毒性試驗技術要求》和《新獸藥特殊毒性試驗技術要求》，但是很多還是參考人藥的各個法規和技術規范。在《新藥審批辦法》以及衛生部先后制定了一系列的“補充規定”、“技術參考資料”，如《新藥（西藥）臨床前研究指導原則匯編》（藥學、藥理學、毒理學），《中藥新藥研究指南》（藥學、藥理學、毒理學）。1984 年國家科委頒布并實施《藥品非臨床研究質量管理規定（試行）》即我國的 GLP 法規，繼續指導并推動中藥新藥的開發研究向科學化、規范化、標準化方向發展。

最后值得注意的是，一般毒理學試驗結果真實可靠受到前面介紹的各種環境因素，人為因素的影響，所以研究工作應規范化、科學化，做到有法可依，實驗結果用數據說話。中獸藥的毒理試驗不僅要規范操作，試驗結果的報告一定要實事求是，弄虛作假所造成的不良影響是嚴重的。要杜絕這類行為，不僅要提高科研人員的素質，還要有相應的法規進行懲處。

[1] 趙雅靈.中藥新藥毒理學研究與評價[J].中國中醫藥信息雜志，2001，8（2）：48-49.

[2] 張曉玲.淺談中藥毒副作用[J].河南中藥，2002，22（2）：10-71.

[3] 袁何永.由馬兜鈴酸致腎病談中藥對腎的毒副作用[J].廣東藥學，2003，13（3）：59-61.

[4] 沈建忠.動物毒理學[M].北京：中國農業出版社，2002，83-113.

[5] 張均田.藥理實驗方法學[M].北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998：1810-1826.

項目來源：山東省畜產品質量安全監控技術推廣。

薄永恒（1980-），男，獸醫師，博士，專業：獸藥藥理與毒理學，研究方向：獸藥質量檢驗與獸藥殘留技術研究。