鴨病毒性肝炎的診斷及防制措施

王治秀

(黑龍江省穆棱市畜牧獸醫(yī)局,黑龍江穆棱 157500)

鴨病毒性肝炎的診斷及防制措施

王治秀

(黑龍江省穆棱市畜牧獸醫(yī)局,黑龍江穆棱 157500)

鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒所引起的雛鴨的一種急性、高度致死性的傳染病。其特征是發(fā)病急,傳播迅速,病程短和死亡率高。其臨診癥狀特點(diǎn)為角弓反張,病理變化特征為肝臟腫大和出血性斑點(diǎn)。

鴨病毒性肝炎;診斷;防制措施

1 流行病學(xué)

本病主要侵害5周齡以內(nèi)，尤其是2周齡以內(nèi)的雛鴨，常突然發(fā)病，傳播迅速，病程短而病死率高，一般為10～60%，在新疫區(qū)高達(dá)90%以上。本病一年四季都有發(fā)生，但多數(shù)在冬季和早春爆發(fā)。在自然情況下，雛鴨是本病毒天然易感動(dòng)物，成年鴨是本病毒的帶毒者，雞和火雞在自然情況下一般不被感染。雛鴨病毒性肝炎的傳播，主要是通過(guò)與病鴨的直接接觸，糞便、食具、墊料和車(chē)輛等都可能傳播此病，甚至人也有可能成為病毒攜帶者，但不能通過(guò)鴨蛋垂直傳播。在飼養(yǎng)中由于管理不良、維生素和礦物質(zhì)缺乏、鴨舍潮濕、鴨群擁擠等，均可促進(jìn)本病的發(fā)生。

2 臨診癥狀

本病的潛伏期短（一般為2～4d），發(fā)病突然，病程進(jìn)展迅速。起初病鴨呈現(xiàn)呆滯、厭食、縮頸、垂翅、離群、眼半閉呈昏迷狀態(tài)，有時(shí)出現(xiàn)腹瀉，發(fā)病半日至一日即出現(xiàn)特異性神經(jīng)癥狀。病鴨全身抽搐，身體傾向一側(cè)，仰脖，頭彎向背部。死時(shí)大多頭向背仰，呈角弓反張姿態(tài)，故本病俗虧“背脖病”，這是本病死亡時(shí)的典型特征。

3 病理變化

主要病變?cè)诟闻K和膽囊。肝腫大、質(zhì)脆，表面有大小不等的出血斑點(diǎn)，肝臟顏色變淡，表面斑駁；膽囊腫脹并充滿膽汁，膽汁呈褐色、淡茶色或淡綠色；脾腫大呈斑駁狀；多數(shù)病例可見(jiàn)腎臟腫大并充血，呈灰紅色，血管明顯呈暗紫色樹(shù)枝狀。有的病鴨出現(xiàn)脂肪腎綜合征和胰腺局部壞死的。

4 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

鴨病毒性肝炎檢疫的檢驗(yàn)方法有雞（鴨）胚中和試驗(yàn)、微量血清中和試驗(yàn)。微量血清中和試驗(yàn)是應(yīng)用固定病毒稀釋血清的方法，在單層鴨肝細(xì)胞上進(jìn)行中和試驗(yàn)，用于鴨病毒性肝炎中和抗體測(cè)定。

（1）器材準(zhǔn)備：用具為24孔或96孔平底帶蓋塑料培養(yǎng)板。剪刀、鑷子、平皿、燒杯、注射器等經(jīng)120℃高壓滅菌后烘干備用。抗原是鴨病毒性肝炎病毒（弱毒），標(biāo)準(zhǔn)陰、陽(yáng)性血清由指定單位提供。選用14～16日齡鴨胚。平衡鹽溶液：按常規(guī)方法配制。胰酶消化液：用無(wú)鈣無(wú)鎂平衡鹽溶液配制成0.0625%胰酶溶液，濾菌后分裝，存放于－20℃?zhèn)溆谩＜?xì)胞培養(yǎng)液：199培養(yǎng)液加入20%犢牛血清和1%抗菌素溶液。細(xì)胞維持液：以199培養(yǎng)液加入1%抗菌素溶液配成。抗菌素溶液：選用慶大霉素，用滅菌的雙蒸水配制成1萬(wàn)單位/ml，4℃保存。

（2）實(shí)驗(yàn)方法：①鴨胚肝細(xì)胞的制備。用碘酒和酒精消毒蛋殼表面，打開(kāi)氣室，取出鴨胚肝臟（除去膽囊），放在燒杯里，用平衡鹽溶液沖洗三次，剪碎，再用該液沖洗三次（除去血液）。加入5～10倍于組織碎塊量的胰酶消化液，37℃水浴消化20min，吸去胰酶消化液。加入細(xì)胞培養(yǎng)液清洗2次，輕輕吹打，直到肉眼看不見(jiàn)組織碎塊為止。移入刻度離心管，以500轉(zhuǎn)/min離心1min，取沉淀物，用細(xì)胞培養(yǎng)液按1：400～600的比例稀釋?zhuān)尤肱囵B(yǎng)板內(nèi)，每孔0.8～1ml，加蓋后置含有5%二氧化碳培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。48h后在倒置顯微鏡下觀察，培養(yǎng)板內(nèi)長(zhǎng)成細(xì)胞單層，可供試驗(yàn)。②鴨病毒性肝炎病毒毒價(jià)的測(cè)定。用維持液將病毒進(jìn)行10－3～10－7的10倍系列稀釋?zhuān)恳粋€(gè)稀釋度換一支吸管）。吸去長(zhǎng)有單層細(xì)胞的培養(yǎng)板內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)液。培養(yǎng)板縱向每4孔為一列，每列分別加入1個(gè)稀釋度的病毒液0.1ml/孔，每孔補(bǔ)加細(xì)胞維持液0.9ml。設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。置含有5%二氧化碳培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，48～72h記錄細(xì)胞病變（CPE）情況。根據(jù)Reed-Muench的方法計(jì)算病毒的組織細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量，配制每0.1ml含100個(gè)組織組胞培養(yǎng)半數(shù)感染量的病毒液。③中和試驗(yàn)。先在第一板（不含有細(xì)胞的培養(yǎng)板）上，加維持液0.1ml/孔。于每排第一孔分別加入被檢血清0.1ml/孔（每份血清做2排），混合后吸0.1ml加入第二孔，如此依次由左至右進(jìn)行1：2～1：32倍連續(xù)稀釋至第六孔（每一個(gè)稀釋度換一支吸管）；棄去最后1孔混合液0.1ml。每個(gè)血清稀釋孔加入0.1ml病毒液（100個(gè)組織細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量/ml），加蓋后置37℃培養(yǎng)箱中30～60min。再用第二板（長(zhǎng)有單層細(xì)胞的培養(yǎng)板），吸去培養(yǎng)液后將前一板各孔的血清病毒中和液全部移入第二板相應(yīng)各孔，然后每孔補(bǔ)加維持液0.8ml。同時(shí)設(shè)置病毒回歸試驗(yàn)。加蓋后置5%二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，48～72h后在倒置顯微鏡下觀察，判定結(jié)果。④病毒回歸試驗(yàn)。將配好的100個(gè)組織細(xì)胞培養(yǎng)半數(shù)感染量的病毒液作10倍梯度稀釋至10－1～10－3；于第二板上每一列（4孔）加入1個(gè)稀釋度的病毒液0.1ml/孔，每孔補(bǔ)加維持液0.9ml。

（3）結(jié)果判定：當(dāng)細(xì)胞對(duì)照正常；陰性血清對(duì)照在1：2以上的各孔細(xì)胞都出現(xiàn)細(xì)胞病變；陽(yáng)性血清對(duì)照誤差在原效價(jià)±1個(gè)對(duì)數(shù)值以內(nèi)；病毒回歸的毒價(jià)應(yīng)再現(xiàn)原有的毒價(jià)，或誤差在原效價(jià)±0.5的對(duì)數(shù)值以內(nèi)，本試驗(yàn)有效。陽(yáng)性反應(yīng)：被檢血清稀釋度在1：4及以上的兩個(gè)細(xì)胞孔都沒(méi)有出現(xiàn)細(xì)胞病變；可疑反應(yīng)：被檢血清稀釋度在1：4有一個(gè)孔的細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞病變；陰性反應(yīng)：被檢血清稀釋度在1：2以上的各孔細(xì)胞都出現(xiàn)細(xì)胞病變。

5 防制措施

目前尚未證實(shí)本病可以經(jīng)蛋傳播。本病的爆發(fā)多系從疫區(qū)購(gòu)進(jìn)帶毒雛鴨而致其他敏感雛鴨發(fā)病，也有的是由于孵化房污染所致，因此不從疫區(qū)購(gòu)進(jìn)雛鴨，孵化房堅(jiān)持經(jīng)常消毒是控制本病的前提條件。免疫預(yù)防目前主要采用雞胚化弱毒苗或鴨瘟-鴨病毒性肝炎二聯(lián)弱毒疫苗接種，雛鴨出殼后每羽0.3～0.5ml肌肉或皮下注射。一旦發(fā)病可采用高免血清（或卵黃）或康復(fù)血清作緊急預(yù)防，平時(shí)采取嚴(yán)格的綜合防制措施是必要的。

[1] 陳建紅，辛朝安，張洛培，等.鴨病毒性肝炎診斷與防制要點(diǎn)[J].中國(guó)家禽，2000，（11）：37-39.

王治秀（1977—），女，大學(xué)本科，副高級(jí)獸醫(yī)師，研究方向?yàn)閯?dòng)物常見(jiàn)病臨床診治。