鴨病毒性肝炎的診斷及防制措施

王治秀

(黑龍江省穆棱市畜牧獸醫局,黑龍江穆棱 157500)

鴨病毒性肝炎的診斷及防制措施

王治秀

(黑龍江省穆棱市畜牧獸醫局,黑龍江穆棱 157500)

鴨病毒性肝炎是由鴨肝炎病毒所引起的雛鴨的一種急性、高度致死性的傳染病。其特征是發病急,傳播迅速,病程短和死亡率高。其臨診癥狀特點為角弓反張,病理變化特征為肝臟腫大和出血性斑點。

鴨病毒性肝炎;診斷;防制措施

1 流行病學

本病主要侵害5周齡以內，尤其是2周齡以內的雛鴨，常突然發病，傳播迅速，病程短而病死率高，一般為10～60%，在新疫區高達90%以上。本病一年四季都有發生，但多數在冬季和早春爆發。在自然情況下，雛鴨是本病毒天然易感動物，成年鴨是本病毒的帶毒者，雞和火雞在自然情況下一般不被感染。雛鴨病毒性肝炎的傳播，主要是通過與病鴨的直接接觸，糞便、食具、墊料和車輛等都可能傳播此病，甚至人也有可能成為病毒攜帶者，但不能通過鴨蛋垂直傳播。在飼養中由于管理不良、維生素和礦物質缺乏、鴨舍潮濕、鴨群擁擠等，均可促進本病的發生。

2 臨診癥狀

本病的潛伏期短（一般為2～4d），發病突然，病程進展迅速。起初病鴨呈現呆滯、厭食、縮頸、垂翅、離群、眼半閉呈昏迷狀態，有時出現腹瀉，發病半日至一日即出現特異性神經癥狀。病鴨全身抽搐，身體傾向一側，仰脖，頭彎向背部。死時大多頭向背仰，呈角弓反張姿態，故本病俗虧“背脖病”，這是本病死亡時的典型特征。

3 病理變化

主要病變在肝臟和膽囊。肝腫大、質脆，表面有大小不等的出血斑點，肝臟顏色變淡，表面斑駁；膽囊腫脹并充滿膽汁，膽汁呈褐色、淡茶色或淡綠色；脾腫大呈斑駁狀；多數病例可見腎臟腫大并充血，呈灰紅色，血管明顯呈暗紫色樹枝狀。有的病鴨出現脂肪腎綜合征和胰腺局部壞死的。

4 實驗室檢驗

鴨病毒性肝炎檢疫的檢驗方法有雞（鴨）胚中和試驗、微量血清中和試驗。微量血清中和試驗是應用固定病毒稀釋血清的方法，在單層鴨肝細胞上進行中和試驗，用于鴨病毒性肝炎中和抗體測定。

（1）器材準備：用具為24孔或96孔平底帶蓋塑料培養板。剪刀、鑷子、平皿、燒杯、注射器等經120℃高壓滅菌后烘干備用。抗原是鴨病毒性肝炎病毒（弱毒），標準陰、陽性血清由指定單位提供。選用14～16日齡鴨胚。平衡鹽溶液：按常規方法配制。胰酶消化液：用無鈣無鎂平衡鹽溶液配制成0.0625%胰酶溶液，濾菌后分裝，存放于－20℃備用。細胞培養液：199培養液加入20%犢牛血清和1%抗菌素溶液。細胞維持液：以199培養液加入1%抗菌素溶液配成。抗菌素溶液：選用慶大霉素，用滅菌的雙蒸水配制成1萬單位/ml，4℃保存。

（2）實驗方法：①鴨胚肝細胞的制備。用碘酒和酒精消毒蛋殼表面，打開氣室，取出鴨胚肝臟（除去膽囊），放在燒杯里，用平衡鹽溶液沖洗三次，剪碎，再用該液沖洗三次（除去血液）。加入5～10倍于組織碎塊量的胰酶消化液，37℃水浴消化20min，吸去胰酶消化液。加入細胞培養液清洗2次，輕輕吹打，直到肉眼看不見組織碎塊為止。移入刻度離心管，以500轉/min離心1min，取沉淀物，用細胞培養液按1：400～600的比例稀釋，加入培養板內，每孔0.8～1ml，加蓋后置含有5%二氧化碳培養箱37℃培養。48h后在倒置顯微鏡下觀察，培養板內長成細胞單層，可供試驗。②鴨病毒性肝炎病毒毒價的測定。用維持液將病毒進行10－3～10－7的10倍系列稀釋（每一個稀釋度換一支吸管）。吸去長有單層細胞的培養板內細胞培養液。培養板縱向每4孔為一列，每列分別加入1個稀釋度的病毒液0.1ml/孔，每孔補加細胞維持液0.9ml。設正常細胞對照。置含有5%二氧化碳培養箱37℃培養，48～72h記錄細胞病變（CPE）情況。根據Reed-Muench的方法計算病毒的組織細胞培養半數感染量，配制每0.1ml含100個組織組胞培養半數感染量的病毒液。③中和試驗。先在第一板（不含有細胞的培養板）上，加維持液0.1ml/孔。于每排第一孔分別加入被檢血清0.1ml/孔（每份血清做2排），混合后吸0.1ml加入第二孔，如此依次由左至右進行1：2～1：32倍連續稀釋至第六孔（每一個稀釋度換一支吸管）；棄去最后1孔混合液0.1ml。每個血清稀釋孔加入0.1ml病毒液（100個組織細胞培養半數感染量/ml），加蓋后置37℃培養箱中30～60min。再用第二板（長有單層細胞的培養板），吸去培養液后將前一板各孔的血清病毒中和液全部移入第二板相應各孔，然后每孔補加維持液0.8ml。同時設置病毒回歸試驗。加蓋后置5%二氧化碳培養箱中37℃培養，48～72h后在倒置顯微鏡下觀察，判定結果。④病毒回歸試驗。將配好的100個組織細胞培養半數感染量的病毒液作10倍梯度稀釋至10－1～10－3；于第二板上每一列（4孔）加入1個稀釋度的病毒液0.1ml/孔，每孔補加維持液0.9ml。

（3）結果判定：當細胞對照正常；陰性血清對照在1：2以上的各孔細胞都出現細胞病變；陽性血清對照誤差在原效價±1個對數值以內；病毒回歸的毒價應再現原有的毒價，或誤差在原效價±0.5的對數值以內，本試驗有效。陽性反應：被檢血清稀釋度在1：4及以上的兩個細胞孔都沒有出現細胞病變；可疑反應：被檢血清稀釋度在1：4有一個孔的細胞出現細胞病變；陰性反應：被檢血清稀釋度在1：2以上的各孔細胞都出現細胞病變。

5 防制措施

目前尚未證實本病可以經蛋傳播。本病的爆發多系從疫區購進帶毒雛鴨而致其他敏感雛鴨發病，也有的是由于孵化房污染所致，因此不從疫區購進雛鴨，孵化房堅持經常消毒是控制本病的前提條件。免疫預防目前主要采用雞胚化弱毒苗或鴨瘟-鴨病毒性肝炎二聯弱毒疫苗接種，雛鴨出殼后每羽0.3～0.5ml肌肉或皮下注射。一旦發病可采用高免血清（或卵黃）或康復血清作緊急預防，平時采取嚴格的綜合防制措施是必要的。

[1] 陳建紅，辛朝安，張洛培，等.鴨病毒性肝炎診斷與防制要點[J].中國家禽，2000，（11）：37-39.

王治秀（1977—），女，大學本科，副高級獸醫師，研究方向為動物常見病臨床診治。