核酸檢測技術在獻血者HBsAg篩查中的意義

莫錦政 謝敬文 馬偉文 藍文莉 黎淑貞

（廣東省廣州市番禺區中心血站 廣州511400）

●診療經驗●

核酸檢測技術在獻血者HBsAg篩查中的意義

莫錦政 謝敬文 馬偉文 藍文莉 黎淑貞

（廣東省廣州市番禺區中心血站 廣州511400）

目的：回顧性分析獻血者HBsAg項目的篩查結果，探討核酸檢測技術（NAT）在獻血者血液篩查中的應用價值。方法：采用兩個廠家的酶聯免疫吸附實驗（ELISA）檢測試劑盒對獻血者開展HBsAg篩查；ELISA檢測陰性的獻血者標本，采用羅氏診斷cobass201系統進行HBV-DNA檢測。結果：在14 642份經過兩遍ELISA檢測HBsAg陰性標本中，檢出13份HBV-DNA陽性，陽性檢出率約為0.089%。結論：在經過兩次ELISA檢測HBsAg陰性的獻血者中，仍然存在一定比例的HBV-DNA陽性，給臨床輸血安全帶來較大的風險；血站應用ELISA聯合NAT的血液篩查策略，能有效降低臨床輸血傳播HBV的風險。

HBV-DNA核酸檢測（NAT）；血液篩查；隱匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）；輸血風險

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一個世界性公眾的健康問題，我國是個HBV感染的高流行區域。HBV感染是臨床輸血安全重要預防焦點之一。雖然血站已經對HBsAg開展兩遍檢測以及近年來ELISA試劑盒檢測技術不斷改進，輸血傳染HBV的風險已經降到較低的水平，但是病毒窗口期、病毒變異、免疫沉默、隱匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）等因素造成的漏檢仍無法避免。核酸檢測技術（NAT）的應用可以彌補酶聯免疫吸附實驗（ELISA）的不足，更進一步地提高血液安全。近3年來，我國發達地區采供血機構血液篩查也相繼引入NAT技術。本站從2012年12月開始引進NAT血液篩查技術，現將應用情況報道如下：

1 材料與方法

1.1 標本來源及處理 本站2012年12月～2013 年6月無償獻血標本17 641份。獻血者樣本留取3份，1份用EDTA-2K抗凝真空管（廣州陽普公司生產）留取5 ml用于血液ELISA檢測，2份用無菌EDTA-2K抗凝帶分離膠真空管（VACUETTE生產）各留取5 ml，其中紫色蓋的用于NAT檢測，白色蓋的用于留樣備用和確證實驗。所有標本4 h內離心并分離血漿，用于ELISA和NAT檢測的標本置于2～8℃冰箱保存，48 h內進行檢測，用于留樣備用和確證實驗的樣本置于-20℃以下冰箱保存。

1.2 試劑及檢測 無償獻血標本先進行兩遍酶聯免疫吸附實驗HBsAg篩查。酶聯免疫吸附實驗試劑盒HBsAg采用廈門新創、DiaSorin（Murex version3. 0）。NAT檢測試劑：cobas TaqScreen MPX Test，cobas TaqScreen MPX Control Kit。挑出HBsAg陰性的標本共14 642份進行核酸聯合檢測HIV-RNA、HCV-RNA和HBV-DNA，6個標本混樣到一個POOL，其中每個樣本吸樣167 μl，對混樣陽性POOL進行單個樣本（每個樣本吸樣1 ml）拆分實驗，拆分陽性樣本送羅氏公司進行HIV-RNA、HCV-RNA和HBV-DNA分項確證實驗。

1.3 儀器設備 KH120R低溫離心機（KHB）、瑞士哈美頓STAR全自動加樣儀、深圳愛康AE150全自動一體機、德國西門子BEHRING全自動酶免后處理機、日本Olympus AU400全自動生化儀、美國Roche Cobas s 201核酸檢測系 統（Hamilton MICROLAB STAR全自動混樣儀、COBAS Amplipre核酸提取儀及COBAS Taqman核酸擴增檢測儀）。

2 結果

在17 641份無償獻血標本中選取14 642份經兩遍ELISA檢測HBsAg陰性的標本進行NAT實驗，檢出13份HBV-DNA陽性，陽性率約為0.089%。該13份HBV-DNA陽性樣本的乙肝兩對半結果分析見表1。

3 討論

目前，我國大部分采供血機構均采用兩種不同試劑進行ELISA平行檢測，雖然近年來ELISA試劑盒的靈敏度、特異性不斷改進，但是仍無法避免病毒感染窗口期、病毒變異、免疫沉默等因素造成的漏檢。有研究表明NAT混樣檢測，可將HBV、HCV和HIV感染的平均窗口期分別由56 d、70 d、22 d縮短為41 d、12 d和11 d[1～2]，而且不受病毒變異、個體免疫因素影響，使輸血感染相關病毒的風險降到最低，極大程度地保障血液安全。本站對14 642份兩遍酶聯免疫吸附實驗HBsAg陰性的標本中，應用NAT

檢測技術篩查出13份HBV-DNA陽性，陽性率0.089%。從該13份樣本的乙肝兩對半結果分析可見，該批樣本中大部分可能是隱匿性乙肝炎病毒感染。隱匿性乙型肝炎病毒感染（occult hepatitis B virus infection，OBI）是指除血清轉換前的窗口期外，機體存在乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV）DNA，但無法檢測到乙肝病毒表面抗原（HbsAg）的HBV感染，可伴有或不伴有乙肝病毒核心抗體（抗-HBc）或乙肝病毒表面抗體（抗-HBs）[3]。它是一種特殊形式的乙肝病毒感染，可通過輸血、器官移植等傳播乙肝病毒，并與慢性肝病、肝細胞肝癌及慢性丙肝發生、發展及治療有關，具有重要的公共衛生學意義。多數OBI感染者的血循環中HBV-DNA的拷貝數均較低，一般小于105 copies/ml，OBI可有多種臨床形式，可以是肝功能正常、HBsAg（－）的“健康人”[4]，可以是急性乙肝感染恢復后[5]，也可能在慢性HBV感染者自發或使用抗病毒藥物后出現[6]，所以酶聯免疫吸附試驗技術無法檢測到OBI感染者乙肝病毒表面抗原陽性，因此說明隱匿性乙型肝炎病毒感染的HBV是目前本地區血液安全的主要隱患之一，本地區有必要對獻血者常規實行酶免聯合核酸檢測的篩查策略，以降低臨床輸血傳播HBV的風險。

[1]Busch MP.HIV,HBV,and HCV:new developments related to transfusion safety[J].Vox Sang,2000,78(s2):253-256

[2]王迅,鄭嵐,張晰,等.核酸擴增技術（NAT）在上海血液篩檢中的初步應用[J].中國輸血雜志,2003,16(3):157-160

[3]Allian JP.Occult hepatitis B virus infection[J].Transfus Clin Biol, 2004,11(1):18-25

[4]Siva CM,Costi C,Michelon C,et al.Low rate of occult hepatitis B virus infection among antiHBc positive blood donors living in a low prevalence region in Brazil[J].J Infect,2005,51(1):24-29

[5]Yuki N,Nagaoka T,Yamashiro M,et al.Long term histologic and virologic outcomes of acute self limited hepatitis B[J].Hepatology, 2003,37(5):1172-1179

[6]Loriot MA,Marcellin P,Walker F,et al.Persistence of hepatitis B virus DNA in serum and liver from patients with chronic hepatitis B after loss of HbsAg[J].J Hepatol,1997,27(2):251-258（收稿日期：2014-12-15）

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10.13638/j.issn.1671-4040.2015.06.038