氣相色譜法測定市售魚油產品中的EPA和DHA 含量

張郢峰，趙月然

(1.陜西國防工業職業技術學院 化學工程學院，陜西 西安 710302;2.大連市藥品檢驗所，遼寧 大連 116021)

魚油中富含有多種不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸，其主要功能性成分是被人們譽為“腦黃金”的ω-3 系多不飽和脂肪酸二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic Arid，簡稱EDA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid，簡稱DHA)［1］。

80 年代的實驗和臨床研究［2］表明，EPA 和DHA 能有效地降低血脂和血壓水平［3］，抑制血小板聚集［4-5］，增加血漿纖溶活性，改變血小板和內皮細胞的前列腺素代謝途徑，對防治心肌梗塞有一定的效果［6］，另外它們能降低人紅細胞丙二醛水平，增強超氧化物歧化酶活性，調節體內抗氧化能力，可能具有潛在的抗衰老作用［7］。

魚油保健品中的EPA 和DHA 一般都以乙酯形式存在，近年來，魚油制品已作為保健營養食品出現，因此建立一種便捷、可靠的方法來監控魚油保健品的質量十分必要。目前，EPA 和DHA 的檢測方法主要有高效液相色譜(HPLC)和氣相色譜法(GC)［8］。HPLC 檢測脂肪酸類化合物一般采用正相色譜，溶劑耗費大，且靈敏度不高。GC 檢測脂肪酸類化合物具有靈敏度高、選擇性強、速度快、溶劑耗費少等優點，是脂肪酸類化合物定量分析的首選方法。本實驗建立了GC 定量法快速測定魚油產品中EPA 和DHA 的檢測方法，并進行方法學考察。為目前魚油保健品的質量監控提供了一種快速可靠的方法。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

正己烷，色譜純;二十碳五烯酸甲酯標準品(含量＞99%，U-99M-J10-V)、二十二碳六烯酸甲酯標準品(含量＞99%，U-84M-A11-W)均來自美國NUChek Prep 公司;市售魚油11 種。

7890A 氣相色譜儀;BP211D 型、BP221S 型電子分析天平。

1.2 色譜條件

色譜柱DB-5MS(0.32 mm×30 m)，載氣為N2，氫氣流速為30 mL/min，空氣流速300 mL/min。

程序升溫初始210 ℃，1 ℃/min 升至240 ℃，10 ℃/min 升至300 ℃，分流比10 ∶1。

1.3 供試品溶液的制備

取供試品10 粒，取出內容物混勻，精密稱取0.20 ～0.30 g，置25 mL 量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，精密稱取2 mL，置于10 mL 具塞試管中，加入2 mol/L 氫氧化鈉-甲醇溶液1 mL，充分振蕩10 min，于60 ℃的水浴中加熱2 min，進行皂化反應，冷卻至室溫，加入2 mol/L 鹽酸-甲醇溶液2 mL，充分振蕩10 min，并于50 ℃的水浴中加熱2 min，進行甲酯化，后棄去下層溶液，再加2 mL 純化水洗凈，并棄去水層，移出正己烷層，至另一裝有無水硫酸鈉的漏斗中脫水后，即得。

1.4 標準儲備液的制備

精密稱取標準品二十碳五烯酸甲酯(以下簡稱EPA 甲酯)，置量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得EPA 甲酯儲備液。濃度為1.000 8 mg/mL。EPA 結果換算系數為0.955 7。

精密稱取標準品二十二碳六烯酸甲酯(以下簡稱DHA 甲酯)，置量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，搖勻，即得DHA 甲酯儲備液。濃度為1.001 2 mg/mL。DHA 結果換算系數為0.959 0。

1.5 標準曲線

分別吸取EPA 甲酯標準品溶液及DHA 甲酯儲備液各0.5，1.0，2.0，4.0，6.0 mL 于10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，作為標準曲線的標準品溶液。

2 結果與討論

2.1 色譜分析

色譜分析見圖1。

圖1 色譜分析圖Fig.1 Chromatogram analysis chart

由圖1 可知，圖1A 為對照品EPA 甲酯色譜圖，圖1B 為對照品DHA 甲酯色譜圖，樣品中EPA 甲酯和DHA 甲酯色譜峰與對照品一致，并與其他色譜峰與分離度＞3，說明該氣相色譜條件較為合適。

2.2 線性關系的考察

分別精密量取1.4 節下混合對照品溶液1 μL注入氣相色譜儀測定。以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到EPA 的回歸方程為y=924.79x +20.687，R2=0.999;同法得DHA 的回歸方程為y=1 025x+2.791 5，R2=0.999。線性范圍分別為0.05 ～1.00 mg/mL 和0.05 ～1.00 mg/mL。

2.3 精密度實驗

取魚油(樣品6)約0.20 g，精密稱定。按1.3節下供試品溶液制備的方法操作，在上述色譜條件下連續進樣6 次，測得EPA 甲酯、DHA 甲酯的RSD值分別為1.6%，0.9%。結果表明，儀器精密度較好。

2.4 重復性實驗

取魚油(樣品6)6 份，每份約0.20 g，精密稱定。按1.3 節下供試品溶液制備的方法操作，在上述色譜條件下進樣，測得EPA 甲酯RSD 值分別為1.1%，DHA 甲酯RSD 值1.5%，結果表明，儀器重復性較好。

2.5 穩定性實驗

取同一供試品溶液(樣品6)，在室溫下放置，分別在0，2，4，6，8，12，24 h 進樣分析，測定峰面積。EPA、DHA 甲 酯 峰 面 積 的RSD 分 別 為1.6%，1.9%。結果表明，2 種化合物在24 h 內穩定。

2.6 加樣回收率實驗

稱取已知含有量的魚油(樣品6)6 份，每份約0.20 g，精密稱定。分別準確加入EPA、DHA 甲酯對照品貯備液各5 mL。按1.3 節下供試品溶液制備的方法操作，在上述色譜條件下進行測定，計算回收率為98.9%，97.8%。

2.7 含量測定

本實驗采用氣相色譜法測定魚油膠囊中的EPA 及DHA 含量，共測定11 種市售魚油產品，結果見表1。

表1 市售魚油產品DHA 及EPA 含量Table 1 Content of EPA and DHA in commercially available fish oil

由表1 可知，測得魚油中的EPA 及DHA 市售11 種產品中的含量與標示量相比，均小于標示含量，尤其是樣品4 和樣品7，幾乎不含有EPA 及DHA。

3 結論

通常的甲酯化方法有酸法甲酯化、堿法甲酯化和三甲基硅重氮甲烷甲酯化等［9-10］。堿法甲酯化存在酯化不完全的缺點;三甲基硅重氮甲烷甲酯化法對于游離脂肪酸甲酯化程度較好;本方法參考GB/T 5009.168—2003 酸法甲酯化法，具有甲酯化程度高的優點。

本方法采用的GB/T 5009.168—2003 酸法甲酯化法進行測定［11-12］，但是由于市售商品均為乙酯化產品，因此還需要建立測定乙酯化魚油產品的方法使測定結果更為準確。需要建立合理的、科學的魚油含量的測定方法，保證市售魚油產品的質量可控，產品的質量的穩定，以及規范保健食品的標示含量以免誤導消費者。

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