基于21種醫院外用制劑微生物限度檢查方法學驗證的研究修改

何佩貞

（廣西醫科大學第一附屬醫院藥學部 廣西 南寧 530021）

基于21種醫院外用制劑微生物限度檢查方法學驗證的研究修改

何佩貞

（廣西醫科大學第一附屬醫院藥學部 廣西 南寧 530021）

目的：分析基于21種醫院外用制劑微生物限度檢查方法學驗證。方法：按照2010年版本的《中國藥典》規定，選取本市21種醫院外用制劑完成細菌、霉菌及酵母菌計數方法以及控制菌檢查法完成相應的檢驗工作。結果：在21種醫院外用制劑中，有14種外用制劑回收率≤70.00%，控制菌檢查結果得到，其中有8種制劑品種試驗菌無法檢出，需要進行深入的培養基稀釋法、薄膜過濾法、離心法以及中和法等方法來完成試驗。結論：被檢樣品一定要完成微生物限度檢查方法學驗證，這樣才可以促使檢驗結果具有高度的有效性以及準確性。

醫院外用制劑；微生物限度；檢查方法；驗證

試驗條件的好壞會直接影響到微生物試驗結果的影響性，尤其在制劑中混有大部分較強的抑菌成分的時候，如果只是使用常規性質的微生物限度檢查方法，得到的結果就很難順利的將 污染的微生物情況有效的反映出來。根據2010年版本的《中國藥典》中藥品的微生物限度檢查法的相關規定得到，需要使用相應的檢驗方法完成驗證。所以，本次研究選取本市21種醫院外用制劑完成細菌、霉菌及酵母菌計數方法以及控制菌檢查法完成相應的檢驗工作。以下為詳細的報道內容：

1.基本資料以及檢驗方法

1.1 基本資料

1.1.1 樣品采集

選取本市21種醫院外用制劑，詳細為：止汗擦劑、爐甘石洗劑、酒渣鼻洗劑、補骨脂酊、含酚爐甘石洗劑、雷佛奴爾溶液、硫磺白色洗劑、苯酚滴耳液、氫化可的松軟膏、醋酸洗必泰溶液、新氫松乳膏、尿素霜、氧化鋅軟膏、酮康唑霜、復方苯甲酸軟膏、水楊酸軟膏、硫磺霜、復方鋅氧粉、足癬浸泡劑、磺胺嘧啶銀霜、復方氯霉素洗劑。每一份制劑取樣3個批號。上述樣品均由3家醫院提供。

1.1.2 試驗菌株以及試藥配置

選取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌。營養肉湯培養基、玫瑰紅鈉瓊脂培養、營養瓊脂培養基等，上述所有試劑都是分析純。

1.2 檢驗方法

嚴格按照2010年版本的《中國藥典》相關規定，每一份樣品分別開展超過三次的平行試驗，計算其回收率高低［1］。

1.2.1 制備菌液

1）選取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌以及枯草芽孢桿菌營養肉湯培養物，其培養溫度為37攝氏度，經過18～24小時的培育，取1ml的培養物以及9ml濃度的0.9%無菌氯化鈉溶液，完成10倍稀釋，直到10－6為止，統計其倍稀釋得到，含菌數為50～100cfu／ml，完成活菌計數，放置備用。

2）選取白色念珠菌改良馬丁液體培養物，其培養溫度為25攝氏度，經過18～24小時的培育，取1ml的培養物以及9ml濃度的無菌氯化鈉溶液，稀釋同上，統計其倍稀釋得到，含菌數同上，完成活菌計數，放置備用。

3）選取黑曲霉斜面培養物，其培養溫度為25攝氏度，經過7天的培育，在培養物加入4ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫。將菌液吸取出來，之后取1ml的混合液以及9ml的鹽水，完成10倍稀釋，直到10－4為止，孢子數大致上是50～100cfu／ml的孢子懸液，放置備用［2］。

1.2.2 制備供試液

在上述液體制劑和混懸劑中選取10ml或10g的供試品，將PH值為7.0的無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液加入樣品中，直到100ml，均勻混合在一起。最后完成1：10供試液的配制，放置一邊等測量。對上述難以溶于水的固體制劑以及半固體制劑，就需要選取5g的供試品，在其中加入5g的司盤80、10g的聚山梨酯80無菌混合物、3g的單硬脂酸甘油酯，將上述混合物放置燒杯中，使用無菌玻棒攪拌，待其成為團狀之后就在其中加入PH值為7.0的無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液（溫度為45度）加入樣品中，直到100ml，邊加邊攪拌，最大程度的乳化供試品，作為1：20的供試液。使用最低稀釋級供試液完成試驗。

1.2.3 驗證試驗

驗證酵母菌計數方法、細菌計數方法以及霉菌計數方法。根據相應的藥典進行驗證試驗，4組試驗得到：首先是實驗組，選取1ml制備的供試液，同時選取50～100cfu的試驗菌，將其分別注入平皿，將瓊脂培養基傾入，每一株試驗菌需要平行制備兩個平皿，在培養完成之后需要對其菌數進行詳細的點計。其次菌液組，多所加的試驗菌數進行有效的測定。接下來是供試品對照組：選取跟試驗組一致供試液測定供試品的本底菌數。最后是稀釋劑對照組，供試品由相應的稀釋劑替代，將試驗菌加入，保持最終菌濃度為1ml供試液含50～100cfu，對其菌落數進行有效的測定［3］。

2.結果

經過實驗之后，基于21種醫院外用制劑中，有14種（66.67%）外用制劑回收率≤70.00%，控制菌檢查結果得到，其中有8種（38.09%）制劑品種試驗菌無法檢出，則需要開展深入的培養基稀釋法、薄膜過濾法、離心法以及中和法等方法來完成試驗。

3.討論

根據結果得到，需要使用很多種聯合方法才可以有效的消除抑菌活性。在開展醫院制劑的方法驗證活動的過程中，需要根據實際情況使用常規實驗方法以及培養基稀釋法或者是聯合使用中和法，最后還需要使用薄膜過濾法，按照上述順序完成工作［4］。因為薄膜過濾法雖然是一個較為可靠的方法之一，但是大部分難溶于水的醫院制劑而言，薄膜過濾法難以有效的完成操作，在完成試驗之后需要完成濾器的清洗，清洗起來非常的麻煩。控制菌檢查的過程中因為存在增菌的培養，在細菌計數的時候村在抑菌品種，開展控制菌檢查的過程中都可以有效的完成試驗菌的檢出。綜上所述，被檢樣品一定要科學有效的完成微生物限度檢查方法學驗證，這樣才能夠促使檢驗結果具有高度的有效性以及準確性。

［1］ 左秀萍，賈立華.醫院制劑影響微生物限度檢查結果諸因素分析［J］.中國藥事，2012，04（08）：102－103

［2］ 孫嵐，何芳.5種醫院制劑微生物限度檢查法方法驗證［J］.中國醫院藥學雜志，2011，08（11）：552－556

［3］ 韋曦，邱雙成，王翠榮.29種醫院制劑微生物限度檢查方法驗證［J］.中國藥房，2012，08（01）：325－326

［4］ 雷柳冰，廖瑜.爐甘石薄荷腦洗劑微生物限度檢查方法的建立與驗證［J］.中國社區醫師（綜合版），2013，07（15）：1112－1113

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1009－6019（2015）07－0061－01