傷風感冒顆粒質量標準研究

2015-03-24 07:08:23李立紀張風雷鄒雁寧李秀芳

云南中醫中藥雜志 2015年10期

李立紀，張風雷，鄒雁寧，李秀芳

(1.云南省昆明市醫學科學研究所，云南昆明 650011 2.云南中醫學院，云南昆明 650500)

傷風感冒顆粒質量標準研究

李立紀1，張風雷1，鄒雁寧1，李秀芳2

(1.云南省昆明市醫學科學研究所，云南昆明 650011 2.云南中醫學院，云南昆明 650500)

目的建立傷風感冒顆粒的質量控制標準。方法采用HPLC測定苦杏仁苷的含量，薄層色譜法TLC鑒別方中的白芷、浙貝母。結果定量方法簡單、準確。苦杏仁苷在0.072～5μg呈良好的線性關系，回歸方程：y=0.8824X+1.0526，R2=1；苦杏仁苷平均回收率101.7%，RSD 2.85%(n=6)。TLC鑒別專屬性強，無干擾。結論本質量標準確、可有效的控制傷風感冒顆粒的質量。

風寒感冒顆粒；HPLC，TLC；質量標準

傷風感冒顆粒由白芷、桔梗、浙貝母、苦杏仁、防風、陳皮、羌活、紫蘇葉、荊芥、薄荷油等10味中藥組成。主要功效散風寒，發微汗。用于傷風流涕，咳嗽，鼻塞，頭痛癥狀。本方證乃由外感風寒所致。治宜散風寒、發微汗。方中重用防風祛風解表，勝濕止痛；羌活解表散寒，祛風勝濕；還重用荊芥子祛風解表共為君藥。浙貝母清熱化痰，散結消痛；桔梗宣肺解毒療咽；紫蘇葉降氣化痰，止咳平喘；苦杏仁止咳平喘共為臣藥。陳皮理氣健脾，燥濕化痰；白芷祛風勝濕；薄荷油疏散風熱，舒肝行氣，清理頭目共為佐使藥。全藥合用，可共取散風寒，解表發微汗，利咽之功效。

原工藝劑型為沖劑，每塊含糖量高達9 g，不利于藥效的發揮，在原工藝的基礎上，探索低糖顆粒工藝，共生產9個批次。工藝穩定，顆粒成型好，在此基礎上，對其質量控制進行研究，傷風感冒顆粒為已有國家標準藥品(國藥準字Z22023527)的注冊[1]，原標準項下只有沖劑通則檢查項，為了保證藥品質量與療效，特制定此標準。本品為10味藥的復方制劑，其中5味藥材僅提取揮發油，含量測定較為困難，根據處方組成和用量、對照品的提供情況及相關研究資料，選擇苦杏仁有效成分苦杏仁苷進行了測定作為含量測定指標。歐前胡素、貝母甲素為定性檢測指標。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：Agilent1100系列，包括G1314A紫外檢測器、G1316A柱溫箱、G1313A自動進樣器、G1311A四元梯度泵、G1322A真空脫氣機、Agilent ChemStation工作站，色譜柱：Zorbax LiChrospher 100 RP-18(4.6×250mm，5μm)，島津2400紫外分光光度儀。

高純水采用蒸餾水過MILLIPORE Simplicity 185純水機制備；甲醇(HPLC)，乙醇(AR)。苦杏仁苷、歐前胡素、貝母甲素由中國藥品生物制品檢定所購得。批號：110820-200511、110826-200409。

傷風感冒顆粒、傷風感冒顆粒空白陰性試樣：自制。

2 化學成分的TLC鑒定

防風、陳皮、羌活、紫蘇葉、荊芥僅提取揮發油，桔梗沒有對照藥材，苦杏仁苷做定量檢測，暫不做定性鑒別。白芷、桔梗、浙貝母、苦杏仁回流提取，本標準規定了白芷、浙貝母薄層鑒別。

2.1 供試品及對照品溶液的鑒定

2.1.1 供試品溶液的制備處方中10味藥，防風、陳皮、羌活、紫蘇葉、荊芥分別提取揮發油，混合，備用；白芷與桔梗用75%乙醇加熱回流提取2次，合并提取液，濾過；浙貝母與苦杏仁，依次用95%乙醇、50%乙醇加熱回流各1次，合并提取液，濾過；以上濾液，分別回收乙醇，并減壓濃縮至干，然后混合粉碎成細粉，加薄荷油與備用的混合揮發油，再加蔗糖適量，拌勻，制粒，干燥即得。

2.1.2 供試藥的陰性按2.1.1項下分別除去白芷、浙貝母、苦杏仁制得3個陰性對照。

2.1.3 對照品溶液的制備分別取歐前胡素、貝母甲素對照品各1mg，分別加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品。

2.2 傷風顆粒的TLC鑒定

2.2.1 白芷的薄層鑒別取3批次樣品、陰性對照各15 g，加50 mL甲醇，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加1 mL水溶解。將3批次樣品、陰性對照、對照品歐前胡素點于同于薄層板上，展開劑用石油醚：乙酸乙酯(5∶1)分別試驗。展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視，供試品與對照品相同位置上，顯相同顏色的熒光斑點(見圖1A)。斑點分離清晰，層析效果好，陰性對照無干擾，達到了薄層鑒別目的。

2.2.2 浙貝母的薄層取白芷薄層鑒別項下的供試品溶液、陰性對照、及貝母甲素點于同一薄層板，展開劑氯仿∶甲醇∶氨水(10∶1∶飽和蒸氣)，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色斑點。經陰性對照試驗及三批樣品試驗觀察，斑點分離清晰，層析效果好，陰性對照無干擾，達到了薄層鑒別目的。(見圖1B)。

圖1 A.傷風顆粒中歐前胡素的TLC；B.傷風顆粒中貝母甲素的TLC

3 HPLC定量測定傷風顆粒中的苦杏仁苷

3.1 含量測定方法學考察

3.1.1 色譜條件色譜柱 Zorbax LiChrospher 100 RP-18(4.6×250 mm，5μm)，流動相甲醇∶水(20∶80)[2-3]；檢測波長210 nm；流速1.0 mL/min，結果表明，在此條件下傷風顆粒中苦杏仁苷其他組分均能達到基線分離(見圖2C)，根據樣品的HPLC圖譜，測量苦杏仁苷峰的保留時間、半峰寬等，計算色譜柱的理論板數均大于3000，苦杏仁苷峰計，理論板數應大于3000。

3.1.2 分別精密稱取苦杏仁對照品1.80 mg，用1 mL甲醇溶解，置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.1.2 線性關系考察分別精密吸取對照品溶液1、2.5、5、10、15、20、25、30 μL按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值(Atm*s)為縱坐標，進樣量(ng)為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程，苦杏仁：y=0.8824X+1.0526，R2=1；結果表明苦杏仁進樣量在0.072～5 μg范圍內有良好的線性關系。

3.1.3 精密度考察精密吸取上述2種對照品溶液，重復進樣5次，苦杏仁苷5次測定值的相對標準偏差分別0.58%.

3.2 樣品的測定

3.2.1 供試品溶液的制備準確取1 g顆粒采用甲醇超聲提取20 min，過濾，定容至25 mL，備用。過濾至清亮，最后用微孔濾膜(0.5 μm)濾過。用于高效液相分析，供試品中苦杏仁與雜質峰達到基線分離。

圖2 對照品苦杏仁苷(A)，供試液(B)，陰性對照(C)

3.2.2 樣品測定精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul，分別注入液相色譜儀進行測定，取2次測定的平均值作為結果。

3.2.3 重復性實驗精密稱取顆粒1 g，共5份，按上述方法制成供試品溶液并進行測定，結果表明，苦杏仁5次測定值的RSD為0.9%。

3.2.4 加樣回收率分別精密稱取已測知含量的樣品1 g，6份，研細，精密稱取，置具塞錐形瓶中，分別精密加入苦杏仁對照品6.6 mg(用甲醇水配制成0.66 mg/mL)，分別加入1.4、2.6、3.6 mL，再加入20 mL甲醇，以下按供試品溶液制備方法從，“超聲處理……”起，同方法操作。計算回收率。