DKK-1在漿液性卵巢癌患者血清的表達及其臨床意義

陜西省腫瘤醫院婦瘤科(西安710061)

袁 淵 常曉斌△ 姚安梅 韓志紅 楊雪梅

DKK-1在漿液性卵巢癌患者血清的表達及其臨床意義

陜西省腫瘤醫院婦瘤科(西安710061)

袁 淵 常曉斌△姚安梅 韓志紅 楊雪梅

目的：探討血清DKK-1在漿液性卵巢癌患者中的表達情況及其臨床意義。方法：通過ELISA檢測57例漿液性卵巢癌患者及健康婦女的血清標本中DKK-1的表達水平，繪制ROC曲線分析其診斷價值，并以CA125作為對照；采用χ2檢驗分析DKK-1的表達水平與卵巢癌患者臨床病理特征的關系；Kaplan-Meier法分析DKK-1的表達與病人的生存之間的關系。結果：卵巢癌患者血清中DKK-1表達高于健康對照組(P<0.001)；ROC曲線下面積0.846 (95%CI:0.771-0.926)，靈敏度85.9%，特異度87.7%； CA125曲線下面積為0.849 (95%CI:0.764-0.927)，靈敏度92.9%，特異度84.2%；血清DKK-1與卵巢癌臨床分期密切相關(P<0.05)，且在卵巢癌細胞核中/低分化組的表達顯著高于細胞核高分化組，差異有統計學意義，而與年齡、淋巴結轉移等臨床病理特征無顯著相關性(P>0.05)；血清DKK-1高表達的漿液性卵巢癌患者術后5年生存率顯著低于血清DKK-1低表達的漿液性卵巢癌患者。結論:卵巢癌患者血清中DKK-1表達水平增高，為漿液性卵巢癌的臨床診斷及預后判斷提供了重要參考，具有重要的臨床應用價值。

卵巢癌病理類型復雜，上皮癌占全部卵巢腫瘤40%，有漿液性和粘液性兩種，均有向兩側卵巢發展和種植的傾向，惡性率高，其中漿液性最多，且惡變最常見， 具有早期癥狀隱匿、 易于轉移和廣泛播散的生物學行為，大部分患者就診時已屬晚期，5年生存率只有30%[1,2]。因此，尋找早期診斷漿液性卵巢癌的分子指標具有重要的臨床實用意義。DKK-1是Dickkopf-1的簡稱，是Wnt-1信號轉導通路的拮抗物。該分子在成人組織中很少表達，但可表達于胎盤和胚胎組織[3]。有研究發現DKK-1在肺癌、肝癌多種腫瘤患者血清中高表達，血清中DKK-1可以作為多種腫瘤的診斷標志物[4～6]。本研究探討了血清中DKK-1在漿液性卵巢癌中的表達及其臨床意義，為漿液性卵巢癌的診斷提供了新的理論基礎。

資料和方法

1 一般資料 收集我院2007年6月至2010年6月期間收治的漿液性卵巢癌患者57例(實驗組)，以及同期健康體檢者57例(對照組)?；颊叩呐R床資料完整，納入標準：①患者均經影像學和病理組織學確診為卵巢癌，均為初診初治患者；②均未接受放、化療及激素等藥物治療；③肝腎功能未見異常；④無其他腫瘤及內科疾病。術后每3個月進行一次隨訪，隨訪截止之間為2015年6月。實驗組57例年齡28～70歲，平均年齡57.34±6.71歲，其中I-II期23例，III-IV期34例，高分化27例，中/低分化30例。對照組57例年齡27～75歲，平均年齡58.26±7.97歲。兩組受試者在年齡、生理等一般資料方面比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

2 試劑與主要儀器 DKK-1酶聯免疫吸附試驗(ELISA)由瑞典康乃格有限公司提供；CODA酶標儀由美國伯樂公司生產；-80℃冰箱由Thermo公司生產；臺式低溫高速離心機美國Beckman公司生產；全自動化學發光分析系統的AXSYM生化分析儀及配套CA125檢測試劑由美國雅培公司生產。

3 實驗方法 兩組空腹采血5 ml，真空干燥管中保存，2000r/min 10 min 后，-80℃冰箱保存備用。

3.1 血清DKK-1含量檢測：采用ELISA檢測血清中DKK-1的含量，步驟根據試劑盒說明書進行。將96孔的包被有DKK-1抗體的酶標板置于室溫過夜。酶標板洗滌3次，并加300μl稀釋液封閉，室溫靜置3h，洗滌2次。每孔加入100μl 血清標本，室溫孵育3h，洗滌酶標板2次。加入100μl 檢測抗體，室溫孵育3h，洗滌酶標板3次。每孔加入100μl鏈霉卵白素-過氧化物酶后，室溫反應30 min，洗滌酶標板3次。每孔加入100μl四甲基聯苯胺底物液，室溫反應30min，最后再在每孔中加入50μl硫酸。迅速用酶標儀檢測每孔的光吸收值。

3.2 血清CA125含量檢測：使用全自動化學發光分析系統的AXSYM生化分析儀及配套CA125檢測試劑對血清 CA125 進行檢測，參考值為0～35 U/ml。

結 果

1 DKK-1在漿液性卵巢癌血清和健康對照血清中的表達水平差異 通過ELISA檢測漿液性卵巢癌患者血清及健康對照血清中DKK-1 的表達差異，結果顯示漿液性卵巢癌患者血清中DKK-1的表達水平高于健康對照組，兩者比較差異有統計學意義(P<0.001)。

2 血清DKK-1表達水平與漿液性卵巢癌患者臨床病理特征的關系 將57例漿液性卵巢癌患者按照病例特征因素(臨床分期、細胞核分化程度、年齡、淋巴結轉移)進行分類，進一步分析血清DKK-1相對表達量與漿液性卵巢癌患者臨床特征的關系。χ2分析結果顯示，血清DKK-1的表達水平與漿液性卵巢癌患者的臨床分期密切相關，隨著臨床分期的進展，血清DKK-1的表達亦逐漸升高(P<0.05)。此外，血清DKK-1在卵巢癌細胞核中/低分化組的表達顯著高于細胞核高分化組，差異有統計學意義(P<0.05)。血清DKK-1的表達與漿液性卵巢癌其他臨床病理特征，包括年齡、淋巴結分期均無顯著相關性，見附表。

附表 血清DKK-1表達水平與漿液性卵巢癌患者臨床病理特征的關系

注：組間比較差異有統計學意義， *P<0.05

3 血清DKK-1表達水平對漿液性卵巢癌的診斷效率 根據上述血清DKK-1的表達水平，建立DKK-1和CA125的ROC曲線，利用ROC曲線評價兩者在卵巢癌中的診斷價值。結果顯示，ROC曲線下面積0.846 (95%CI:0.771-0.926)，靈敏度85.9%，特異度87.7%； CA125曲線下面積為0.849 (95%CI:0.764-0.927)，靈敏度92.9%，特異度84.2%。血清DKK-1和CA125均具有較好的診斷價值。

4 血清DKK-1表達與漿液性卵巢癌患者生存之間的關系 生存分析結果顯示，血清DKK-1表達與漿液性卵巢癌患者術后5年生存率密切相關，血清DKK-1高表達的漿液性卵巢癌患者術后5年生存率顯著低于血清DKK-1低表達的漿液性卵巢癌患者(Log-rank test:P=0.0412)，如附圖。

附圖 血清DKK-1表達與漿液性卵巢癌患者生存之間的關系

討 論

近年來隨著人們飲食結構,生育觀念以及環境等因素的改變，卵巢癌發病率呈現出逐年上升的趨勢，且高卵巢癌是女性生殖系統腫瘤中致死率最高的惡性腫瘤，如果能夠早期(Ⅰ～Ⅱ)發現，約有90%的患者經過標準治療可達完全緩解[7]。血清標志物具有易檢測、 可重復、 非侵入性、 標本用量以及人為干擾少等優點， 且無需復雜的標本前處理，其在卵巢癌的診斷和預后預測中均占有重要的地位。因此, 尋找卵巢癌的早期診斷的血清學指標已成為近年來研究的熱點問題。

DKK-1是人DKK(Dickkopf)蛋白家族成員之一，最早在非洲爪蟾中發現，其主要作用是誘導爪蟾頭部形成。大量研究顯示DKK-1表達異常與腫瘤的發生、 發展相關，并且DKK-1是一種分泌型糖蛋白，在多種腫瘤患者血清中呈高表達，為腫瘤的早期診斷、治療監測及其預后判斷提供新的途徑。HCC組織DKK-1高表達患者遠期預后較差，DKK-1單獨或聯合β-catenin可作為HCC預后預測標志物[8]。Lee等研究發現153例胃癌患者血清中DKK-1的濃度水平明顯高于173例健康對照者，血清DKK-1診斷胃癌的敏感度為87.6%，特異度為87.9%，由此可見，檢測血清DKK-1水平有可能幫助診斷胃癌并且預測患者預后[9]。DKK-1在骨轉移乳腺癌患者血清中的表達水平顯著高于未發生骨轉移的乳腺癌患者和健康婦女，并可能對乳腺腫瘤細胞的骨轉移能力發揮正向調節作用，提示檢測血清DKK-1水平有助于乳腺癌骨轉移患者的臨床研究[10]。此外，血清DKK-1在多發性骨髓瘤患者的表達水平高于MGUS患者和健康對照[11]。 肺癌患者腫瘤組織中表達升高，血清中含量增加，且血清DKK-1在肺癌患者的陽性率為69.8%，而在肺部良性疾病患者和健康對照者分別為12.5%和5%[12]。由此可見，DKK-1不僅在不同腫瘤組織中表達，更重要的是在腫瘤患者血清中也存在高表達，血清DKK-1作為一種血液生物標志，極有可能在腫瘤早期診斷、療效監測、預后預警等方面發揮重要的臨床作用。

本研究主要探討了血清DKK-1在漿液性卵巢癌中的表達及臨床意義。研究發現血清DKK-1在漿液性卵巢癌患者血清中高表達；ROC曲線下面積0.846 (95%CI:0.771-0.926)，靈敏度85.9%，特異度87.7%； CA125曲線下面積為0.849 (95%CI:0.764-0.927)，靈敏度92.9%，特異度84.2%；血清DKK-1與卵巢癌臨床分期密切相關，且在卵巢癌細胞核中/低分化組的表達顯著高于細胞核高分化組，差異有統計學意義，而與年齡等無顯著相關性；血清DKK-1高表達的漿液性卵巢癌患者術后5年生存率顯著低于血清DKK-1低表達的漿液性卵巢癌患者。這些結果說明DKK-1是一種良好的診斷卵巢癌及判斷卵巢癌預后的血清腫瘤標志物，血清DKK-1有望成為漿液性卵巢癌早期診斷和預后判斷的新指標。

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(收稿：2015-07-18)

Expression and clinical significance of serum DKK-1 in Serous ovarian cancer patients Department of Gynecological Oncology, Shaanxi Provincial Tumor Hospital

(Xi’an 710061)

Yuan Yuan Chang XiaoBin Yao AnMei et al

Objective: To investigate the expression of serum DKK-1 in serous ovarian cancer patients and its diagnosis and prognosis value．Methods: ELISA was used to detect the expression of serum DKK-1 in 57 serous ovarian cancer patients and 57 controls, and its diagnostic value was analyzed by the receiver operating characteristic (ROC) curve，and CA125 was aslo detected as control. Meanwhile，relationships between the expression levels of DKK-1 and ovarian cancer clinicopathological features were analyzed by χ2; the association of serum DKK-1 level with survival of serous ovarian cancer patients was further evaluated by Kaplan-Meier．Results: The expression of serum DKK-1 of serous ovarian cancer patients showed statistically higher than controls (P<0.001). The area under the ROC curve ( AUC) of DKK-1 was 0.846 (95%CI:0.771-0.926), DKK-1 screening serous ovarian cancer sensitivity rate was 85.9%，specificity rate was 87.7%, The area under the ROC curve ( AUC) of CA125 was 0.849 (95%CI: 0.764-0.927), sensitivity rate was 92.9%, specificity rate was 84.2%. The expression of serum DKK1 was significantly increased in serous ovarian cancer patients with advanced TNM stage (P<0.05), and the expression of serum DDK-1 in ovarian cancer cell medium / poorly differentiated-nuclear group was significantly higher than that in the well differentiated-nuclear group , but the expression of serum DKK-1 had no significant correlations with age and lymph node status (P> 0.05). The 5 years overall survival rate in the patients with high serum DKK1 expression was significantly lower than in the patients with low serum DKK1 expression. Conclusion: The relative expression level of DKK1 is significantly increased in serous ovarian cancer patients, which provides important references for the diagnosis and prognosis of serous ovarian cancer.

Ovarian neoplasms @Dkk-1 Diagnosis Prognosis

卵巢腫瘤 @DKK-1 診斷 預后

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.008

△陜西省腫瘤醫院放療科