吡格列酮聯合辛伐他汀對兔動脈粥樣硬化CD40-CD40配體系統的影響*

遼寧醫學院附屬第三醫院心內科(錦州 121000)

邱雅慧 薛 凌

吡格列酮聯合辛伐他汀對兔動脈粥樣硬化CD40-CD40配體系統的影響*

遼寧醫學院附屬第三醫院心內科(錦州 121000)

邱雅慧 薛 凌

目的: 探討吡格列酮辛伐他汀與CD40-CD40L系統相互作用機制以及其對兔動脈粥樣硬化的影響。方法: 40只實驗兔，隨機分為5組，每組8只：正常對照組(A組)、高脂模型組(B組)、吡格列酮組(C組)、辛伐他汀組(D組)、聯合用藥組(E組)，實驗共16周。16周末檢測如下指標：①血脂；②血清超敏C反應蛋白質(hsCRP)、人可溶性CD40配體(sCD40L)、基質金屬蛋白梅9(MMP-9)；③測定斑塊/內膜面積比；④斑塊部位CD40L的表達。結果: 各用藥組總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)升高，高密度脂蛋白(HDL-C)降低；各用藥組hsCRP、sCD40L、MMP-9升高，斑塊/內膜面積比出現下降，CD40的表達降低，聯合用藥組效果更佳。結論: 吡格列酮、辛伐他汀通過抑制CD40-CD40L信號通路抑制炎癥反應，調脂等不同途徑抑制動脈硬化的形成，聯合應用具有協同作用。

動脈粥樣硬化(AS)是一種多種因素共同作用的慢性炎癥性疾病[1]。目前研究發現CD40-CD40L系統在炎癥過程中發揮重要作用的信號通路[2]。CD40與CD40L廣泛存在于與動脈硬化相關的各種細胞和血小板中，可調節多種炎癥反應，被認為可能是AS炎癥進程的關鍵環節。本實驗通過觀察吡格列酮聯合辛伐他汀對兔AS形成的影響以及對CD40-CD40L信號系統的影響，探討其抑制AS的可能作用機制，為臨床提供理論依據。

材料與方法

1 實驗動物及分組 健康日本大耳白兔雄性40只，遼寧醫學院實驗中心提供，兔齡3個月左右，體重2.0 ±0.15kg。適應性喂養1周，隨機分為5組(n=8)。正常對照組(A組)；高脂模型組(B組)；吡格列酮組(C組)；辛伐他汀組(D組)；聯合用藥組(E組)；實驗共16周。

2 觀測指標 實驗結束時留取血清及動脈標本檢測。①全自動生化分析儀測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)； ②ELISA測定高敏C反應蛋白質(hsCRP)、人可溶性 CD40 配體(sCD40L)、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)；③油紅o染色，測定斑塊/內膜面積比，④免疫組織化學法測定斑塊部位CD40的表達。

結 果

1 血脂結果 與A組相比，B、C、D、E組TC、TG、LDL-C升高，HDL-C降低(P<0.01)；與B組相比較，C、D和E組TC、TG、LDL-C含量均顯著降低(P<0.01)，HDL-C含量顯著升高(P<0.01)；與C、D組相比，E組TC、TG、LDL-C含量均降低(P<0.05)，HDL-C含量升高(P<0.05)。

2 hsCRP、sCD40l、MMP-9檢測結果 與A組相比，B、C、D和E組hsCRP、sCD40L、MMP-9水平顯著升高(P<0.01)；與B組相比，C、D組和E組hsCRP、sCD40L、MMP-9水平顯著降低(P<0.01)；與C、D組相比，E組hsCRP、sCD40l、MMP-9水平顯著降低(P<0.05，附表)。

3 病理形態學觀察斑塊/內膜面積比 與B組比較，其余各組斑塊面積/內膜面積均出現降低；與C、D組比較，E組斑塊面積/內膜面積明顯下降, 差異有顯著性(P<0.05，附表)。

4 CD40表達結果 與A組相比，B、C、D及E組主動脈內膜斑塊可見CD40表達；與B組比較，C、D、E組主動脈內膜CD40表達顯著降低， E組與C、D組相比，CD40表達減少(P<0.05)。

附表 各組血清hsCRP、sCD40L、MMP-9的變化

注：與A組相比 *P<0.01；與B組相比#P<0.01；與C、D組相比◇P<0.05。

討 論

在AS發生過程中，CD40-CD40L在動脈粥樣硬化斑塊中的多種細胞廣泛存在，與AS斑塊的發生發展關系密切[3]。研究發現與AS密切相關的功能性分子(細胞因子、黏附分子和基質金屬蛋白酶等)的分布與CD40-CD40L的分布具有明顯的一致性，CD40L與AS斑塊形成、斑塊破裂相關[4]。本實驗結果顯示免疫組化顯示藥物組動脈粥樣硬化斑塊中CD40表達較模型組減少，推斷吡格列酮及辛伐他汀具有抗AS作用與阻斷CD40-CD40L信號通路有關。

近期研究顯示PPAR-γ激活后能夠抑制促炎因子、炎癥因子靶基因的活化與轉錄，減少促炎細胞因子干擾素γ、腫瘤壞死因子-α、白介素-2的表達。促炎細胞因子可以增加CD40-CD40L mRNA的表達，使巨噬細胞和活化T細胞表面CD40表達增加[5]。因此推斷PPAR-γ的活化間接減少了CD40-CD40L系統的表達，在AS過程中發揮了相應的保護作用。本實驗結果也顯示PPAR-γ激動劑吡格列酮抑制了動脈粥樣硬化發展過程中CD40-CD40L的表達，減輕炎癥反應，抑制AS斑塊的形成。辛伐他汀也可以使CD40-CD40L表達減少，調節血脂，抑制血管炎癥反應、抑制粥樣斑塊的發展。本實驗結果表明：與單一用藥相比，斑塊面積在聯合用藥時能夠明顯降低，其他指標如血脂、炎癥因子等也較單一用時改善。實驗表明吡格列酮和辛伐他汀藥物聯合可以干預AS的發生發展與阻斷CD40-CD40L系統相關，具有協同作用。下一步需要進行長期臨床實驗來明確兩類藥物的相互作用效果。

[1] Tuttolomondo A, Di Raimondo D, Pecoraro R,etal. Atherosclerosis as an inflammatory disease[J]. Curr Pharm Des, 2012, 18(28):4266-4288.

[2] Borcherding F, Nitschke M, Hundorfean G,etal.The CD40-CD40L pathway contributes to the proinflammatory function of intestinal epithelial cells in inlammatory bowel disease[J]. Am J Pathol, 2010, 176(4): 1816-1827.

[3] Tousoulis D, Androulakis E, Papageorgiou N,etal. From atherosclerosis to acute coronary syndromes: the role of soluble CD40 ligand[J].Trends Cardiovasc Med， 2010，20(5):153-64.

[4] Robles-Carrillo L,Meyer T,Hatfield M,etal.Anti-CD40L immune complexes potently activate platelets in vitro and cause thrombosis in FCGR2A transgenic mice[J].J Immunol,2010, 185(3): 1577-1583.

[5] Jung UJ, Torrejon C, Chang CL,etal. Fatty acids regulate endothelial lipase and inflammatory markers in macrophages and in mouse aorta: a role for PPARγ[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32(12):2929-2937.

(收稿：2015-08-10)

*遼寧省科學事業公益研究基金(GY2012-B-005)

動脈硬化 @CD40-CD40配體 動物，實驗 兔

R543.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.003

遼寧省錦州市科學技術計劃項目(12B1D26)