穿心蓮內酯油水分布系數和溶解度的測定*

龍凱花 王春柳 臧巧真 唐 濤 焦文文 李 曄●

陜西中醫學院(咸陽712046)

·方藥縱橫·

穿心蓮內酯油水分布系數和溶解度的測定*

龍凱花 王春柳△臧巧真 唐 濤 焦文文▲李 曄△●

陜西中醫學院(咸陽712046)

目的：測定穿心蓮內酯的油水分布系數(P)和溶解度，為體內吸收及新劑型研究提供參考。方法：采用高壓液相色譜法測定穿心蓮內酯的濃度，以飽和法測定穿心蓮內酯的溶解度，采用搖瓶法測定穿心蓮內酯的油水分布數。結果：穿心蓮內酯溶解度較大的乳化劑為Labrasol、吐溫80、RH40，助乳化劑為Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇，油相為Maisine 35-1；穿心蓮內酯油水分布系數為(35.6399±0.2953)，lgP為(1.5520±0.0036)。結論：穿心蓮內酯為親脂性化合物，該實驗結果可為穿心蓮內酯進一步的研究提供依據。

穿心蓮內酯為爵床科植物穿心蓮的主要有效成分，為二萜類內酯化合物，具有祛熱解毒，消炎止痛之功效，對細菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效[1]，被譽為天然抗生素藥物。

平衡溶解度與表觀油水分配系數是新劑型研發中2個重要的理化性質參數，影響藥物胃腸道吸收性能，是藥效發揮的物質基礎[2]。因此，對溶解度與油水分配系數的研究，有助于預測藥物在體內的溶解、吸收、分布與轉運特點，了解藥物經胃腸道與黏膜的吸收情況[3]。本試驗測定穿心蓮內酯的油水分配系數及在不同新型制劑輔料中的溶解度，可為穿心蓮內酯的新劑型開發、工藝設計、體內吸收代謝及生物利用度評價等研究提供參考。

1 儀器與試藥 Agilent 1260(四元泵G1311B；自動進樣器G1329B；柱溫箱G1316A；二極管陣列檢測器G4212B；LAB open 色譜數據工作站)；Sartorius BP211D 型十萬分之一電子分析天平(德國賽多利斯天平有限公司)；超純水系統(Millipore，法國)；KQ-250DE型超聲波清洗器(昆山超聲波儀器有限公司)；SHA-C恒溫振蕩器(常州國華電器有限公司)；TGL-16G離心機(上海安亭科學儀器廠)。

穿心蓮內酯原料藥(西安天一生物科技有限公司，質量分數≥98.0%，批號:TYM140216)；穿心蓮內酯對照品(中國食品藥品檢定研究院，質量分數> 98.7%，批號:110797-201108)。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果 2.1 溶液的制備 水溶液飽和的正辛醇及正辛醇飽和的水溶液：將正辛醇和水等比例混合后，在振蕩器上振蕩24 h，使其相互飽和，靜置分層后，兩相分離，分別保存備用。對照品溶液的配制：稱取穿心蓮內酯2.55 mg 置10 mL 容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀釋至刻度，即得。用甲醇溶液作空白對照溶液。供試品溶液的配制：稱取1mg的穿心蓮內酯原料藥，用甲醇定容于10mL的容量瓶中，得供試品溶液。

2.2 穿心蓮內酯HPLC-DAD測定方法的建立

時間/min Agilent ZORBAX Extend-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水(40∶60)，等度洗脫。檢測波長：225.0 nm。柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進樣量：10 μL。記錄30 min色譜圖，見圖1。

A 穿心蓮內酯對照品溶液；B 穿心蓮內酯原料藥溶液

2.3 方法學考察 2.3.1 線性關系考察:分別精密吸取對照品混標溶液儲備液0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以穿心蓮內酯質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得穿心蓮內酯回歸方程為Y=20.394X-5.3577(R=0.9999)，線性范圍為1.275～255 μg·mL-1。

2.3.2 精密度試驗:精密吸取對照品溶液10μL，重復進樣6次，結果穿心蓮內酯峰面積的RSD分別為0.73%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性試驗:精密稱取同一批穿心蓮內酯原料藥6份，按2.1項下方法制備供試品溶液，按2.2.2項下色譜條件連續測定6次，結果穿心蓮內酯平均質量濃度為0.9955 mg·g-1，即純度為99.55%，RSD為1.51%，表明該方法重復性良好，穿心蓮內酯原料藥純度符合要求。

2.3.4 穩定性試驗:取同一樣品，按2.1項下方法制備供試品溶液，放置0、2、4、6、8、12和24 h分別進樣10 μL后測定，穿心蓮內酯的峰面積RSD為0.7829%，表明供試品溶液在24 h以內穩定。

2.3.5 加樣回收試驗:準確稱取已知含量的穿心蓮內酯樣品適量，加入定量的穿心蓮內酯對照品溶液，按2.1項下方法制備供試品溶液，按2.2.2項下色譜條件測定，計算平均加樣回收率。穿心蓮內酯的加樣率分別為100.25 %，見表1。

表1 穿心蓮內酯加樣回收率結果(n=6)

稱樣量(mg)樣品中含量(mg)加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0．450．44800．50150．9576101．560．520．51770．50151．010498．190．560．55750．50151．0698102．080．450．44800．50150．9529100．630．460．45790．50150．943496．750．470．46790．50150．9811102．27100．252．2676

2.4 穿心蓮內酯在自微乳制劑不同輔料中溶解度的測定 取過量的穿心蓮內酯分別加入到裝有適量的不同新劑型輔料的具塞試管中，攪拌均勻后密封超聲30 min，使藥物均勻分布，于37 ℃恒溫振蕩24 h，平衡后，4000 r·min-1離心15 min，取上清液100 μL置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，HPLC法測定溶解度。可知穿心蓮內酯在不同新劑型輔料中的溶解度，見表2。

表2 穿心蓮內酯在不同介質中的溶解度

種類名稱溶解度(mg/mL)名稱溶解度(mg/mL)油相EO0．1256±0．08Maisine35?10．4498±0．03GTCC0．2661±0．05油酸0．2512±0．04LabrafilM1944CS0．2828±0．01IPM0．1017±0．06乳化劑吐溫802．4737±0．28Labrasol3．9448±0．09EL?351．4717±0．04F68?△RH401．8201±0．59TopcithinSB?△PlurololeiqueCC4970．4883±0．14HS?155．1599±0．19助乳化劑1，2?丙二醇8．7291±0．21PEG?4006．9987±0．15乙醇8．5590±0．19TranscutolHP13．400±0．77

注：△“-”：不溶

2.5 穿心蓮內酯油水分配系數的測定 2.5.1 油水分配振搖時間的確定:精密稱取穿心蓮內酯3.0 mg，置10 mL 量瓶中，加入水溶液飽和的正辛醇使溶解并稀釋至刻度。從中精密吸取8.0 mL 至25 mL 具塞三角瓶中，加入8.0 mL 正辛醇飽和的水溶液，蓋緊塞子，置于振蕩器上振蕩，分別于振蕩0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h后取出，靜置30 min，分離出水相，油相經0.45 μm 微孔濾膜過濾，注入液相色譜儀。結果見圖2。結果表明，振蕩3 h 后，體系基本已達平衡，故選擇振搖時間為3 h。

圖2 穿心蓮內酯在不同振搖時間的油水分配系數

2.5.2 油水分布系數的測定:37℃條件下，穿心蓮內酯的不同油水比例下油水分布系數測定結果見表3。計算公式為：P=C油相/C水相=CO/CW。

表3 穿心蓮內酯的油/水分布系數(37 ℃)

比例(O/W)C油相(μg/mL)C水相(μg/mL)PlgP1∶1111．57543．129535．65721．55211∶2112．59023．131135．95881．55581∶3113．16063．169135．73281．55311∶9113．82763．229235．25091．5472

3 討 論 3.1 溶解度 通過對穿心蓮內酯在常用的新劑型輔料中溶解度的考察，篩選出溶解度較大的乳化劑為Labrasol、吐溫80、RH40，助乳化劑為Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇，油相為Maisine 35-1，可為穿心蓮內酯的新劑型開發等研究提供參考。

3.2 平衡溶解度 采用不同油-水比例測得穿心蓮內酯油水分布系數RSD為0.828%，lgP的RSD為0.232%，結果表明，不同油-水比例對油水分布系數的測定影響較小。穿心蓮內酯的油水分布系數為(35.6399±0.2953)，lgP為(1.5520±0.0036)，說明藥物脂溶性較高。據文獻[5]報道，藥物最佳lgP值為-1.0

[1] 劉 意,龍曉英,何 琳,等.穿心蓮內酯微乳的制備及含量測定[J].中成藥, 2010, 32(8):1424-1426.

[2] 康虞玲,張 娜, 張立娜,等. 葛根黃豆苷元的溶解度及油水分配系數的研究[J]．中華中醫藥雜志,2010,25(3):446-448．

[3] 陸 彬．藥物新劑型和新技術[M]．第2 版．北京:人民衛生出版社, 2005:384．

(收稿2014-10-11；修回2014-11-09)

* 陜西省科學技術研究發展計劃項目(編號2011ZX09401-308-6)

穿心蓮內酯 溶解度 油水分布系數 色譜法,高壓液相

R94

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.03.045

△陜西省中醫藥研究院(西安 710003)

▲西安培華學院(西安 710065)

●通訊作者