扶正防癌方聯(lián)合化療對(duì)晚期結(jié)腸癌患者生活質(zhì)量及免疫功能的影響

劉 聲 王笑民 楊國(guó)旺 王 皓

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010)

扶正防癌方聯(lián)合化療對(duì)晚期結(jié)腸癌患者生活質(zhì)量及免疫功能的影響

劉 聲 王笑民 楊國(guó)旺 王 皓

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京，100010)

目的：觀察扶正防癌方聯(lián)合化療對(duì)晚期結(jié)腸癌患者生活質(zhì)量及免疫功能的影響。方法：將符合入選標(biāo)準(zhǔn)的66例患者隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，對(duì)照組給予FOLFOX4方案化療和對(duì)癥支持治療，治療組在上述治療的基礎(chǔ)上使用FZFA，比較2組患者近期客觀有效率、穩(wěn)定率和生活質(zhì)量；2組患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞中Th17/Treg細(xì)胞百分比及比值；以及2組人血液炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平。結(jié)果：2組患者近期客觀有效率、穩(wěn)定率和生活質(zhì)量改變，患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞中Th17/Treg細(xì)胞百分比及比值，以及外周血以及炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：扶正防癌方聯(lián)合化療藥物和單純化療藥物對(duì)晚期結(jié)腸癌患者均可改善免疫功能，減輕不良反應(yīng)，提高生活質(zhì)量，但前者明顯優(yōu)于后者。

晚期結(jié)腸癌；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；輔助性T細(xì)胞17；扶正防癌方；臨床實(shí)驗(yàn)

腫瘤炎性內(nèi)環(huán)境是腫瘤發(fā)生的背景和土壤[1-2]，其中又與免疫調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(RegulatoryTcells，Treg)和輔助性T細(xì)胞17(Thelper17cells，Th17)失衡存在著密切關(guān)系。Th17和Treg均來(lái)源于初始T細(xì)胞，兩者相互制約共同維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[3]。在腫瘤進(jìn)程中，Treg與Th17之間受免疫細(xì)胞因子的影響會(huì)發(fā)生分化上的比例失衡，最終導(dǎo)致疾病惡化。本實(shí)驗(yàn)從腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中重塑免疫細(xì)胞Treg/Th17動(dòng)態(tài)平衡的新視角，深入研究扶正防癌方(FZFA)聯(lián)合化療對(duì)Treg/Th17動(dòng)態(tài)平衡以及細(xì)胞因子的影響，并對(duì)患者的療效、生活質(zhì)量變化以及遠(yuǎn)期療效進(jìn)行比較觀察，揭示FZFA聯(lián)合化療藥物調(diào)節(jié)腫瘤炎性微環(huán)境的分子機(jī)制,為臨床治療晚期結(jié)腸癌提供新的科學(xué)依據(jù)。為此，自2012年至2014年期間，選取我院確診的晚期結(jié)腸癌66例，進(jìn)行了觀察和分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 1)病理診斷屬大腸惡性腫瘤。2)年齡在48～65歲。3)臨床分期為Ⅱ～Ⅳ期。4)首次擬接受至少2個(gè)周期FOLFOX4方案化療者。5)Karnofsky評(píng)分≥60分。6)心、肺、肝、腎、骨髓功能正常者，至少有1個(gè)可評(píng)價(jià)病灶。7)簽署知情同意書。8)中醫(yī)證候診斷標(biāo)準(zhǔn)，參照中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部1997年頒布的《中藥新藥治療結(jié)直腸癌的臨床研究指導(dǎo)原則》制定[4]。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 1)孕婦及妊娠患者；2)合并活動(dòng)性結(jié)核、嚴(yán)重感染或精神障礙性疾病患者；3)合并未控制的其它惡性腫瘤者；4)并發(fā)未控制的活動(dòng)性腦轉(zhuǎn)移者。

1.1.3 臨床資料 66例患者病程最短半年，最長(zhǎng)5年。采用隨機(jī)表法分為治療組和對(duì)照組2組；其中治療組36例，男19例，女17例；年齡為34～78歲；中位年齡55.5歲。升結(jié)腸癌18例，橫結(jié)腸癌9例，乙狀結(jié)腸癌9例；病理類型：管狀腺癌16例，黏液腺癌11例，印戒細(xì)胞癌5例，未分化癌4例，治療期間加用中醫(yī)療法。對(duì)照組30例，其中男15例，女15例，年齡38～70歲，平均(47.4±6.3)歲；升結(jié)腸癌19例，橫結(jié)腸癌11例；乙狀結(jié)腸癌15例；病理類型：管狀腺癌14例，黏液腺癌9例，印戒細(xì)胞癌3例，未分化癌4例，治療期間不加中醫(yī)療法。2組受試者在年齡、性別、病程病種等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 對(duì)照組給予單純的化療和對(duì)癥支持治療；FOLFOX4方案化療：第1天，國(guó)產(chǎn)注射用奧沙利鉑130 mg∕m2加入5%葡萄糖注射液500 mL中靜脈滴注2 h；第1～2天，注射用亞葉酸鈣200 mg∕m2加入生理鹽水注射液500 mL中靜脈滴注2 h；第1～2天，氟尿嘧啶注射液400 mg∕m2靜脈注射；第1～2天，5-Fu 600 mg∕m2，請(qǐng)核對(duì)標(biāo)注的單位。加入5%葡萄糖注射液500 mL中持續(xù)微泵靜脈滴注22 h；2周重復(fù)，每28 d為1個(gè)周期，連續(xù)用藥至少2個(gè)周期后評(píng)價(jià)療效。化療前常規(guī)應(yīng)用5-HT。拮抗劑鹽酸格拉司瓊3 mg靜脈滴注，化療前30 min；第1～2天，預(yù)防嘔吐。治療期間如發(fā)生Ⅲ～Ⅳ度骨髓抑制，立即給予重組人粒細(xì)胞集落刺激因子75～150 ug皮下注射，至自細(xì)胞升至10×109∕L以上。常規(guī)給予門冬酸鉀鎂防止神經(jīng)毒性。化療期間忌食冷飲，給予軀體保暖。治療組在化療和對(duì)癥支持治療的基礎(chǔ)上使用FZFA。

1.2.2 材料和藥物 1)試劑：FITCanti-humanCD4、PEanti-mouseCD25、PEcy5anti-humanFoxp3、PEanti-humanIL-17、CD4+CD25+RegulatoryTcellIsolationKit。2)儀器：FACS Calibur Flow Cytometer System(BD)，SM800解剖顯微鏡(Nikon)，VarioMACS磁性細(xì)胞分選儀(Miltenyi)，ABI7500熒光定量PCR儀(ABI)，DU-640型紫外分光光度計(jì)(Beckman)等。3)受試藥物FZFA由黨參15 g、黃芪30 g、枸杞子12 g、何首烏15 g、拳參15 g、藤梨根15 g等藥物組成。草藥由首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院中草藥房提供，由清水煎至200 mL，早晚分2次服。28 d為1個(gè)療程，2個(gè)療程評(píng)價(jià)療效，2組患者在整個(gè)觀察期間，均未使用其他任何生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑或?qū)γ庖吖δ苡杏绊懙乃幬铩?/p>

1.2.3 療效評(píng)定 按WHO標(biāo)準(zhǔn)判定，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(NC)或者進(jìn)展(PD)。CR為可見病變完全消失超過(guò)1個(gè)月；PR為腫塊縮小≥50%，時(shí)間不少于4周；NC為腫塊縮小<50%或增大未>25%；PD為一個(gè)或多個(gè)病變?cè)龃?25%以上或出現(xiàn)新病變。近期客觀有效為CR+PR，穩(wěn)定為CR+PR+NC，有效者應(yīng)1個(gè)月后再檢查確認(rèn)。不良反應(yīng)：按照WHO抗癌藥物急性及亞急性毒性反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，分為0～Ⅳ°，以Ⅲ°或Ⅳ°視為嚴(yán)重反應(yīng)。生活質(zhì)量評(píng)價(jià)：按照卡氏評(píng)分(Karnofsky)標(biāo)準(zhǔn)，增加≥10分為改善，減少≥10分為下降，無(wú)變化者為穩(wěn)定[5]。

1.2.4 觀察指標(biāo) 1)a. 2組近期客觀有效率、穩(wěn)定率。b.治療前后生活質(zhì)量情況和體重情況。采用Karnofsky評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[6]，進(jìn)行評(píng)定。Karnofsky評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：若治療后評(píng)分增加10分以上為提高，減少10分以上為下降，若治療后評(píng)分變化<10分為穩(wěn)定，Karnofsky評(píng)分越高表示生活質(zhì)量越好。c.病灶變化情況。d.定期檢查血常規(guī)、肝腎功能，及相關(guān)物理檢查，如胸片、B型超聲或CT，以便進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組人血CD4+T淋巴細(xì)胞中Th17/Treg細(xì)胞百分比變化：采集患者血液，取5×105分選后CD4+，CD25+T淋巴細(xì)胞，按照試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行PECy5-抗CD4、APC-抗CD25、PE-抗IL-17染色，之后流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾Th17細(xì)胞；FITC-抗CD4、PE-抗CD25、PEcy5-抗Foxp3染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾Treg細(xì)胞；IL-17、IL-23、γ-IFNE lisa。試劑由北京賽百盛生物技術(shù)公司提供。3)Elisa法檢測(cè)各組患者外周血中IL-17、IL-23、IFN-γ水平：在酶標(biāo)包被板待測(cè)樣品孔中滴加樣品稀釋液40 μL，之后加待測(cè)樣品10 μL；每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，空白孔除外；顯色；酶標(biāo)儀450～630 nm處雙波長(zhǎng)測(cè)各孔吸光度(A)值，用標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的A值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從中求得各細(xì)胞因子的含量。

2 結(jié)果

2.1 治療效果比較 治療組CR 2例，PR 8例，近期客觀有效率50.0%；對(duì)照組CR 1例，PR 5例，近期客觀有效率30.0%(P<0.05)；2組客觀有效率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；治療組穩(wěn)定17例，穩(wěn)定率85.8%，對(duì)照組12例，穩(wěn)定率70.6%，2組穩(wěn)定率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。不良反應(yīng)：2組均無(wú)Ⅲ°以上不良反應(yīng)；治療組與對(duì)照組轉(zhuǎn)氨酶升高發(fā)生率分別為9%、13%，白細(xì)胞下降發(fā)生率分別為14.8%、23.6%，均P<0.05。三組惡心、嘔吐、腹瀉、口腔炎、周圍神經(jīng)毒性發(fā)生率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 2組患者體質(zhì)量和Karnofsky評(píng)分比較 如表1所示，治療組治療后體質(zhì)量比治療前顯著增加(P<0.05)；治療組治療后Karnofsky評(píng)分比治療前顯著增加(P<0.05)，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療組的預(yù)后好于對(duì)照組。

表12組患者治療前后體質(zhì)量和Karnofsky評(píng)分比較

注：*P<0.05，與治療前相比；與對(duì)照組比較，△P<0.05。

2.3 2組患者血液CD4+T淋巴細(xì)胞中Th17/Treg細(xì)胞百分比及比值比較 如表2所示，兩者患者治療后Thl7細(xì)胞和Treg細(xì)胞百分比及二者比值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與治療前比較，治療組Thl7與Treg百分比及比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；對(duì)照組上述指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 2組患者治療前后外周血中Thl7與Treg百分比(%)

注：*P<0.05，與治療前相比；與對(duì)照組比較，△P<0.05。

2.4 2組患者外周血細(xì)胞因子IL-17、IL-23、IFN-γ比較 如表3所示，2組患者治療后外周血中細(xì)胞因子IL-17、IL-23比較，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與治療前比較，治療組外周血中細(xì)胞因子IL-17、IL-23比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組上述指標(biāo)無(wú)顯著變化(P>0.05)。

表3 2組患者外周血中細(xì)胞因子IL-17、IL-23、

注：*P<0.05，與治療前相比；與對(duì)照組比較，△P<0.05。

3 討論

結(jié)腸癌是一種常見的惡性消化道腫瘤，其發(fā)病率及病死率在我國(guó)乃至全世界有逐漸上升的趨勢(shì)，是常見的十大惡性腫瘤之一。我國(guó)結(jié)腸癌發(fā)病率占全部惡性腫瘤第4位，占胃腸道惡性腫瘤的第3位，且有逐漸增加的趨勢(shì)[7-8]。結(jié)腸癌對(duì)人類的健康構(gòu)成極大的威脅，嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量及壽命，同時(shí)也造成了社會(huì)經(jīng)濟(jì)的巨大負(fù)擔(dān)。

目前對(duì)結(jié)腸癌的治療手段多種多樣，采用了諸如手術(shù)、化療、放療以及免疫治療等多種方法，但是結(jié)腸癌的預(yù)后仍不理想，因?yàn)樵跉⒊[瘤的同時(shí)，也對(duì)免疫功能造成進(jìn)一步損害。而靶向治療藥物的治療有效率偏低，原因是調(diào)控過(guò)程體靶點(diǎn)環(huán)節(jié)的單一[9-10]。中醫(yī)藥從整體觀念出發(fā)，運(yùn)用豐富的中藥品種，積累了大量的臨證治療經(jīng)驗(yàn)，并隨著現(xiàn)代中醫(yī)藥研究廣泛深入發(fā)展，在腫瘤防治中地位和作用已然突顯，中醫(yī)藥治療腫瘤的模式日漸完善[11-12]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為：惡性腫瘤發(fā)生的病機(jī)關(guān)鍵在于臟腑虛損，正氣不足為本，邪毒內(nèi)結(jié)，繼而流散為標(biāo)。其中正氣不足之關(guān)鍵又在于脾虛、腎虛，是腫瘤發(fā)生的內(nèi)因[13]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)[14-15]，腎對(duì)人體的免疫起著穩(wěn)定調(diào)節(jié)作用，是免疫之本；脾則是免疫活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有促進(jìn)免疫功能的作用。同時(shí)體內(nèi)癌毒的存在是腫瘤發(fā)生的外因，正邪盛衰決定了腫瘤發(fā)生與否。因此，防治腫瘤首應(yīng)采取健脾益腎法以扶助正氣，增強(qiáng)抗病力，同時(shí)抗癌解毒，驅(qū)除病邪。扶正防癌方是根據(jù)中醫(yī)理論的治療法則，研究擬定的臨床抗胃腸癌具有確切療效的復(fù)方制劑，方中黨參、黃芪健脾益氣，枸杞子、何首烏滋補(bǔ)肝腎，拳參、藤梨根解毒抗癌，諸藥合力，以扶正祛邪為治則，既平衡陰陽(yáng)、調(diào)補(bǔ)氣血，又在扶正同時(shí)增強(qiáng)祛邪效力。本次實(shí)驗(yàn)從2組患者近期客觀有效率、穩(wěn)定率和生活質(zhì)量；2組患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞中Th17/Treg細(xì)胞百分比及比值；以及2組人血液炎性細(xì)胞因子表達(dá)水平來(lái)看，F(xiàn)ZFA配合化療藥物明顯優(yōu)于單純化療藥物。

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(2014-08-16收稿 責(zé)任編輯：徐穎)

Effects of Fuzhengfangai Decoction (FZFA) Combined with Chemotherapy on Quality of Life and Immune Function of Advanced Colorectal Cancer Patients

Liu Shen,Wang Xiaomin,Yang Guowang,Wang Hao

(BeijingHospitalofTraditionalChineseMedicine,Beijing100010,China)

Objective:To observe the effect of FZFA combined with chemotherapy on life quality and immune function of advanced colorectal cancer patients.Methods:Sixty six patients were randomly divided into treatment group and control group. Patients in the control group were given FOLFOX4 chemotherapy and supportive treatment, and the treatment group using FZFA based on the above treatment. We compared two groups of patients with recent objective efficient and stable rate and quality of life; the percentage of Th17/Treg cells and the ratio of CD4+T lymphocyte and inflammatory cytokines expression levels in blood of the two groups.Results:The objective response and stable rate and quality of life changes, the percentage of Th17/Treg cells and the ratio of CD4+T lymphocytes in peripheral blood of the two groups, and the expression of peripheral blood and inflammatory cytokine levels had significant difference (P<0.05).Conclusion:FZFA combined with chemotherapy and chemotherapy for advanced colorectal cancer patients can improve immune function, alleviate the adverse reaction, improve the quality of life, but the former is obviously better than the latter.

Colon cancer; Regulatory T cell; The helper 17 cells; Fuzhengfangai decoction; Clinical trials

國(guó)家自然科學(xué)基金“基于‘肺與大腸相表里’理論的肺腸同源發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制研究”(編號(hào)：81273614)

R273;R285.6

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.02.015