富硒羅漢果中羅漢果皂苷V的HPLC測定

陳薇 劉庚貴 段小群 吳衛(wèi)

摘要：建立富硒羅漢果（Siraitia grosvenorii）果實中羅漢果皂苷V的HPLC測定方法，以Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm， 5 μm）為固定相，乙腈-水（24∶76，V/V）為流動相，檢測波長203 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃。結(jié)果表明，羅漢果皂苷V在0.21～2.10 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 3），平均回收率為97.64%，RSD為1.66%。該方法可用于富硒羅漢果果實中羅漢果皂苷V含量的測定。

關(guān)鍵詞：羅漢果（Siraitia grosvenorii）;羅漢果皂苷V;高效液相色譜法

中圖分類號：R284.1 ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ? ? ? ? ?文章編號：0439-8114（2015）02-0444-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.048

Determination of Mogroside V in Selenium-riched Siraitia grosvenorii Fruit with HPLC

CHEN Wei1，LIU Geng-gui2，DUAN Xiao-qun1，WU Wei1

（1. Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China;2. Guilin Aglycone Bio-technology Co.，Ltd.，Guilin 541001，Guangxi，China）

Abstract： A HPLC based method of analyzing mogroside V in selenium-riched Siraitia grosvenorii fruit was established. The samples were separated by Diamonsil C18 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） with a ?mobile phase of acetonitrile-water（24∶76， V/V） at 30 ℃. The flow rate was 1.0 mL/min and sample was detected at 203 nm. The results showed that the good linear range （r=0.999 3） of mogroside V between 0.21 and 2.10 μg was obtained. The average recovery reached ?97.64% （RSD=1.66%）. This method is suitable for detecting mogroside V in selenium-riched Siraitia grosvenorii fruit.

Key words： Siraitia grosvenorii; mogroside V; HPLC

羅漢果（Siraitia grosvenorii）屬葫蘆科（Ducurbi taceae），主產(chǎn)于廣西，為中國特色植物，在東南亞及歐美地區(qū)享有良好聲譽，備受人們青睞，被譽為“東方神果”。羅漢果味甘、性涼，具有清熱潤肺，利咽開音，滑腸通便等功效，常用于治療肺火咳嗽、咽痛失音、便秘等，藥用價值高[1]。富硒羅漢果是近年研制出的羅漢果新品種，除上述功效外，富含硒元素，具備清除體內(nèi)過量羥基自由基的功效[2]，可抗氧化、增強免疫力、抗疲勞等[3，4]。葫蘆烷型三萜皂苷類成分羅漢果皂苷V是富硒羅漢果中的主要有效成分[5-8]，通過建立富硒羅漢果中羅漢果皂苷V的HPLC分析方法，將有助于控制富硒羅漢果制劑的質(zhì)量，為開發(fā)相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

1 ? 材料與方法

1.1 ? 材料與試劑

富硒羅漢果（產(chǎn)地：廣西桂林，桂林亦元生現(xiàn)代生物技術(shù)有限公司提供，經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室品種鑒定為富硒羅漢果）;羅漢果皂苷V（批號：20120619，純度≥98%，上海源葉生物科技有限公司）。

甲醇、乙腈為色譜純，去離子水等。

1.2 ? 儀器

1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;BS110S型電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）;1810A型電熱恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）;SY-360型超聲波提取器（上海寧商超聲儀有限公司）;MSP-8600型微波消解儀（北京北分瑞利分析儀器公司）。

1.3 ?方法

1.3.1 ?色譜分析 ?以Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）為色譜柱，以乙腈-水（24∶76）為流動相，檢測波長為203 nm，柱溫30 ℃，流速1. 0 mL/min，樣品過0.22 μm微孔濾膜后，進(jìn)樣10 μL，其理論板數(shù)按羅漢果皂苷V峰計算應(yīng)不低于3 000。

1.3.2 ?對照品溶液的制備 ?稱取10.5 mg羅漢果皂苷V于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至50 mL，搖勻，得0.21 mg/mL對照品溶液。

1.3.3 ?供試品溶液的制備 ?取富硒羅漢果粉末0.5 g，加入甲醇50 mL，加熱回流2 h，回收溶劑，減壓蒸干，加去離子水10 mL溶解，以AB-8大孔樹脂柱純化，依次以去離子水、20%（V/V）乙醇各100 mL洗脫[7]，棄去洗脫液，50%（V/V）乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，揮干，殘渣以流動相溶解，定容至10 mL，搖勻待測。

1.3.4 ?硒的測定 ?取富硒羅漢果粉末0.5 g于消化管中，加10 mL硝酸、2 mL過氧化氫，搖勻，微波消化后，加水至25 mL，用稀鹽酸調(diào)至pH 2，加1% （m/v）鄰苯二胺2 mL，振搖，放置1 h，加甲苯10 mL萃取，取甲苯液，在340 nm處測定，并計算硒含量。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?線性關(guān)系的考察

對照品和樣品的色譜圖見圖1。由圖1可知，該方法可實現(xiàn)目標(biāo)化合物的有效分離。取羅漢果皂苷V對照品溶液，分別吸取不同體積（2～20 μL）注入液相色譜儀分析，峰面積（Y）與進(jìn)樣量（X）的線性回歸方程為Y=310 662.9X+107.3（r=0.999 3）。結(jié)果表明，羅漢果皂苷V進(jìn)樣量在0.21～2.10 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2 ?方法學(xué)分析

取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測定6次，羅漢果皂苷V峰面積的RSD為1.12%，說明本方法精密度良好;稱取6份樣品，各0.5 g，參照上述方法分析，測定樣品中羅漢果皂苷V平均含量達(dá)10.75 mg/g（RSD=1.37%），表明該方法重現(xiàn)性良好;稱取樣品0.5 g，參照上述方法制備樣品提取液，并于0，1，2，4， 6，12，24 h測定，其峰面積RSD為2.03%，表明提取液中羅漢果皂苷V在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好;稱取已知羅漢果皂苷V含量為10.75 mg/g的富硒羅漢果樣品粉末0.25 g，然后加一定量的羅漢果皂苷V，測定分析，計算回收率為95%～105%，平均回收率97.64%（RSD=1.66%），表明該法準(zhǔn)確。

2.3 ?樣品分析

取3批樣品（20130921，20131009，20131011），按上述方法分別測定羅漢果皂苷V和硒含量，結(jié)果表明，樣品中羅漢果皂苷V含量分別為7.61，10.75，

9.33 mg/g，硒含量分別為28.77，31.09，30.56 μg/g，其中羅漢果皂苷V符合2010版藥典中對羅漢果含量的要求[9]。

3 ?討論

羅漢果皂苷味甜，甜度約為蔗糖的300倍，不含熱量，理化性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于水，作為食品添加劑具有安全無毒的優(yōu)點，適合長期食用，在國家強制標(biāo)準(zhǔn)《GB2760食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定，羅漢果皂苷可不限量用于各類食品，羅漢果皂苷在藥品和食品中具有廣泛的應(yīng)用前景[10]。

富硒羅漢果是桂林近年研制栽培出的新品種。通過收集優(yōu)良栽培品種和野生株系，利用物理和化學(xué)方法誘導(dǎo)羅漢果植株染色體加倍、將二倍體大花粉與單倍體卵細(xì)胞雜交，培育出有效成分含量大幅提高的無子富硒羅漢果，其中果實中硒元素含量高達(dá)30 μg/g左右。目前，富硒羅漢果藥用價值的研究尚處于起步階段，開展相關(guān)系統(tǒng)研究，將挖掘其發(fā)展?jié)摿Γ浣?jīng)濟效益和社會效益前景廣闊。

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