細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)在宮頸癌早期篩查中的作用

孫艷秋， 劉莎莎

(1.河北省承德市中醫(yī)院， 河北 承德 067000 2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德 067000)

宮頸癌是威脅女性健康的惡性腫瘤之一，早期發(fā)現(xiàn)及治療宮頸癌前病變是防治宮頸癌的主要方法。目前國內(nèi)常用的宮頸癌篩查方法是宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測。而國外，DNA定量分析技術(shù)已經(jīng)成為實施宮頸癌篩查的常用檢測方法之一。該研究通過比較細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)和薄層液基細(xì)胞學(xué)方法在宮頸癌篩查中的病變檢出情況，以探索宮頸癌篩查的適合方法。

1 材料與方法

1.1 材料:選取2011年1月至2014年1月承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診及病房通過薄層液基細(xì)胞學(xué)和DNA定量分析技術(shù)行宮頸癌篩查的女性共12598例。其中有274例行宮頸活檢病理檢查，22例因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)后，行宮頸病理檢查。

1.1.1 固定液的配制:量取160mL甲醇、30mL甲醛及10mL冰醋酸，倒入試劑瓶中攪拌混勻。

1.1.2 染液的配制:量取196mL蒸餾水，加入4mL 5moL/L 的鹽酸，加入偏重亞硫酸鈉0.2g，硫堇0.2g，25℃溫箱中攪拌1～1.5h，充分溶解后過濾，避光備用。

1.1.3 儀器:MotiCytometer全自動細(xì)胞DNA圖像定量分析系統(tǒng)。

1.2 方法:制片和染色將標(biāo)本離心后去上清取細(xì)胞沉淀，加入細(xì)胞分散液，采用自然懸滴法制片2張，一張采用Feulgen染色做細(xì)胞DNA定量分析，另一張片巴氏染色做常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測。

1.3 TBS診斷方法:細(xì)胞學(xué)方法按照2001年TBS報告系統(tǒng)［1］診斷，分以下級別:①未見上皮內(nèi)病變或惡性病變(NILM);②非典型鱗狀細(xì)胞(ASCUS);③低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL);④高度鱗狀上皮內(nèi)病變(HSIL)或原位癌(CIS);⑤鱗狀上皮浸潤癌(SCC)。

1.4 DNA定量分析方法:正常細(xì)胞的DNA指數(shù)(DI)在1～2之間。考慮到測量的誤差，把DI=2.5作為病變細(xì)胞的界限。系統(tǒng)將測得的DI值分以下三種結(jié)果［2］:①未見 DNA 倍體異常細(xì)胞(DI值＞2.5 的細(xì)胞數(shù)為0)，建議2～3年復(fù)查。②可見少量DNA倍體異常細(xì)胞(DI＞2.5的細(xì)胞數(shù)為1～2個)或增生期細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的5% ～10%，建議4～6個月復(fù)查。③可見多量DNA倍體異常細(xì)胞(DI＞2.5的細(xì)胞數(shù)≥3個)或增生期細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的10%以上或出現(xiàn)非整倍體細(xì)胞峰者，建議行陰道鏡活檢。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法:以CINⅡ及以上級別作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，分別計算常規(guī)細(xì)胞學(xué)方法和DNA定量分析技術(shù)的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。

2 結(jié) 果

2.1 兩種細(xì)胞學(xué)檢測方法與組織學(xué)結(jié)果比較:在12598例宮頸癌篩查患者中，用常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢測異常人數(shù)為514例，包括323例ASCUS、121例LSIL和70例HSIL;用細(xì)胞DNA定量分析方法檢測陽性754例，可疑1725例。其中隨訪到活檢結(jié)果者296例，細(xì)胞DNA定量分析檢測陽性有140例，可疑103例，陰性53例，TBS檢測出陽性147例，ASCUS60例，陰性89例(見表1)。

表1 296例活檢結(jié)果與兩種細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果比較

通過表1我們可以看出，若以組織學(xué)CINII或以上級別的病變作為癌前病變的診斷標(biāo)準(zhǔn)，在得到病理證實的108例高級別宮頸病變中，細(xì)胞DNA定量分析檢測有102例(94.4%)為陽性，建議活檢。6例(5.5%)因建議4～6個月復(fù)查而延遲活檢時間。相比較而言，常規(guī)細(xì)胞學(xué)會建議108例中的85例(77%)做活檢，16例(14.8%)4～6個月復(fù)查，而有 7 例(6.5%)因檢測結(jié)果為陰性而漏診，其中還包括2例原位癌和1例浸潤癌。如果對同一個標(biāo)本采用聯(lián)合檢測方法全部癌前病變及浸潤癌均可被檢出。

2.2 常規(guī)細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞DNA:定量分析檢測準(zhǔn)確性的比較同樣以組織學(xué)診斷CINII及以上級別病變作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，可得出兩種方法的相對敏感性、相對特異性、陽性預(yù)測值及陰性預(yù)測值，(見表2)。

表2 常規(guī)細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞DNA定量分析檢測準(zhǔn)確性比較 (%)

從表2可以看出，隨訪到的296例患者中以CINII作為檢測標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)的敏感性和特異性均高于常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查方法。

3 討 論

宮頸癌作為婦女最常見的惡性腫瘤之一，正以每年2%～3%的發(fā)病率持續(xù)上升。早期發(fā)現(xiàn)并及時治療是預(yù)防宮頸癌的最有效方法。大量研究表明，常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查確實能有效地降低宮頸癌的發(fā)生率及死亡率，但是細(xì)胞學(xué)診斷是形態(tài)學(xué)檢測，具有主觀性，需要有豐富經(jīng)驗的病理醫(yī)師診斷才能保證其準(zhǔn)確性，否則，其敏感性較低，假陰性及假陽性率較高。在我國各地區(qū)差異較大，尤其缺乏接受過專業(yè)培訓(xùn)的病理醫(yī)生。細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)是對細(xì)胞DNA進(jìn)行特異染色，通過軟件記錄所有細(xì)胞核并對其DNA含量進(jìn)行精確分析。DNA是細(xì)胞核內(nèi)的遺傳物質(zhì)，其基因編碼可指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞功能，致癌因子引起基因突變所導(dǎo)致DNA含量的改變，都可以被細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)所檢出［3］。大量研究表明，細(xì)胞惡變過程中，出現(xiàn)DNA含量的改變較形態(tài)學(xué)改變要早，因此能更早檢測至癌前病變，敏感性更高。且研究表明，采用該技術(shù)，可對細(xì)胞的良惡性，預(yù)后評估以及指導(dǎo)治療提供可靠的依據(jù)。

本研究采用DNA定量分析和常規(guī)細(xì)胞學(xué)兩種方法對宮頸癌進(jìn)行篩查，研究發(fā)現(xiàn)，在108例活檢結(jié)果CINⅡ及以上級別的病變中，有85例通過液基薄層細(xì)胞學(xué)可診斷LSIL，其檢出CINⅡ及以上級別病變的敏感度為78.7%，特異度為67%;有102例通過DNA定量分析診斷為≥3個DNA倍體異常細(xì)胞，其敏感度為94.4%，特異度為79.8%，其檢測效果明顯好于薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查。因此細(xì)胞DNA定量分析方法對宮頸癌及癌前病變的篩查具有重要的應(yīng)用價值，可作為宮頸癌篩查的方法之一。本研究還發(fā)現(xiàn)如果使用兩種方法對宮頸癌進(jìn)行聯(lián)合篩查，能在一定程度上提高宮頸癌篩查的敏感度和特異度，既可以避免過度治療，又可為患者選擇最佳治療方法，從而有效地阻斷宮頸癌前病變發(fā)展為宮頸癌，降低宮頸癌的發(fā)病率，可作為宮頸癌篩查的合適技術(shù)并在基層單位廣泛推廣。

［1］ Solomon D，Davey D，Kurman R，et al.The 2001 Bethesda System:terminology for reporting results of cervical cytology［J］.JAMA，2002，287(16):2114 ～2119.

［2］ Auer GU，Caspersson TO，Wallgren AS.DNA content and survival in mammary carcinoma［J］.Anal Quant Cytol，1980，2(3):161～165.

［3］ 田玉旺，劉光，周建，等.細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)在宮頸癌及癌前病變早期篩查中的應(yīng)用價值［J］.診斷病理學(xué)雜志，2013，20(7):425 ～428.