骨髓間充質干細胞對肝衰竭患者生存預后的影響

張美華，黃建偉，溫 凌，王巧瑜，潘 潔(廣州市第十二人民醫院消化內科，廣州 510620)

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骨髓間充質干細胞對肝衰竭患者生存預后的影響

張美華，黃建偉，溫 凌，王巧瑜，潘 潔(廣州市第十二人民醫院消化內科，廣州 510620)

目的 探討骨髓間充質干細胞(BMSCs)對肝衰竭患者生存預后的影響。方法 將60例肝衰竭患者按隨機數字表法分為觀察組和對照組，每組30例。對照組給予標準內科護肝、退黃(促肝細胞生長素、復方甘草酸苷、思美泰等)等綜合治療，1個月為1個療程。觀察組在標準內科綜合治療基礎上加用BMSCs移植治療，5 d為1個療程。測定并觀察2組血清中肝功能指標[谷丙轉氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)]，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1β等細胞因子水平及凝血功能指標[凝血酶原時間(PT)，部分凝血活酶時間(APTT)]的變化，對2組患者的療效進行比較。結果 觀察組治療后ALT、TBIL、PT、APTT、TNF-α及IL-1β均明顯低于對照組，ALB明顯高于對照組(P<0.05或P<0.01)。觀察組總有效率為96.67%，對照組總有效率為73.33%，2組比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論 BMSCs移植治療對于肝衰竭患者的生存預后具有重要意義。

骨髓間充質干細胞； 肝衰竭； 生存預后； 影響

肝衰竭是多種因素引起的嚴重肝臟損害，導致其合成、解毒、排泄和生物轉化等功能發生嚴重障礙或失代償，出現以凝血機制障礙、黃疸、肝性腦病及腹水等為主要表現的一組臨床癥候群。肝衰竭可在急性或慢性肝病、中毒及其他器官衰竭等過程中發生，臨床表現有意識障礙、黃疸、呼氣有肝臭以及出血傾向等[1-3]。肝衰竭病情危重，必須及早救治，否則轉歸預后不良。臨床上常采用護肝、退黃等標準內科綜合治療。本研究對30例肝衰竭患者在標準內科治療的基礎上進行骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植，探討BMSC對肝衰竭患者生存預后的影響。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2011年10月至2014年5月在廣州市第十二人民醫院住院治療的肝衰竭患者60例，均符合《肝衰竭診治指南》[1]的診斷標準。其中男42例，女18例，年齡28～70(51.37±9.82)歲，病程 1～18(6.8±2.52)個月。將60例患者按隨機數字表法分為觀察組和對照組，每組30例。2組患者在性別、年齡以及病情程度及病程等方面比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法

2組患者均給予標準護肝、退黃(促肝細胞生長素、復方甘草酸苷、思美泰等)等內科綜合治療。觀察組在標準內科綜合治療基礎上，通過外周靜脈輸注 BMSCs，1次·d-1，每次移植(1×106)·kg-1，5 d為1個療程。

1.3 BMSCs的分離、純化、擴增

無菌條件下采集患者骨髓1～2 mL，采用密度梯度離心法，反復貼壁純化分離 BMSCs。抗凝骨髓標本置于Percoll 分離液梯度離心，吸取中間單個核細胞(MNC)白膜層，以1×106·mL-1的密度接種于培養瓶，培養體系為含10%FBS 的DMEM 培養基，于37 ℃、5%CO2飽和濕度條件下培養。48 h 后去除未貼壁細胞，3～4 d換液1次，當瓶底貼壁細胞達到90%以上融合時，以0.25%胰酶消化進行傳代，記錄每一代的傳代時間并進行比較。傳至3～4 代時，觀察細胞形態均一、BMSCs純度達90%時即可進行移植治療。

1.4 觀察指標

測定觀察2組患者血清中肝功能指標[谷丙轉氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、白蛋白(ALB)]，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1β等細胞因子水平及凝血功能指標[凝血酶原時間(PT)，部分凝血活酶時間(APTT)]的變化。

1.5 療效評價標準

對預后效果使用醫院自擬評分系統進行評分，總分為100分。顯效：評分結果>90分，或生存時間在3年以上；有效：評分結果為60～89分，或生存時間>1年；無效：評分結果<60分，或死亡[4]。總有效率=(顯效+有效)病例數/總病例數×100%。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 2組患者治療后肝功能、凝血功能指標變化的比較

觀察組治療后ALT、TBIL、PT、APTT、TNF-α及IL-1β均明顯低于對照組，ALB明顯高于對照組(P<0.05或P<0.01)。見表1。

組別n肝功能指標凝血功能指標ALBρ/(g·L-1)TBILc/(μmol·L-1)ALT/(U·L-1)PTt/sAPTTt/sTNF-αρ/(ng·L-1)IL-1βρ/(ng·L-1)觀察組3028．5±4．2160．2±53．445．67±5．613．5±2．630．5±3．413．29±7．178．80±6．0對照組3023．8±3．4302．1±62．6102．73±7．318．7±3．243．6±2．820．12±8．7219．50±15．0t2．2802．02513．1116．90813．8033．2237．526P0．0260．0310．0000．0000．0000．0220．000

2.2 2組患者療效的比較

觀察組治療后總有效率為96.67%，對照組總有效率為73.33%，2組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組療效的比較

3 討論

肝衰竭是臨床上的危重急癥，病死率較高，且預后不良，單純常規護肝退黃等內科綜合治療效果尚不十分理想。本研究通過對30例肝衰竭患者(觀察組)在標準內科治療的基礎上加用 BMSCs移植治療，結果顯示：觀察組肝功能和凝血功能均較對照組明顯改善，且TNF-α、IL-1β等細胞因子的水平較對照組明顯減少(P<0.05或P<0.01)，預后明顯優于對照組。究其原因，筆者認為可能是： BMSCs 移植操作簡便，其在體外培養能夠維持多向分化潛能，且其遺傳基因穩定，植入到患者體內不易出現免疫排斥反應。原代肝細胞很難在體外進行擴增培養，并且不能將自身正常的生理功能予以維持。將 BMSCs進行分化擴增后，其能夠進行大量擴增，還能分化為肝細胞或肝樣細胞，具有肝細胞合成、分泌以及解毒功能，很好地代替正常肝細胞在科研及臨床上的應用[5]。在 BMSCs橫向分化為肝樣細胞時，使多種因子共同作用，在平板培養中誘導單層細胞得以實現。但是這樣使得細胞難以維持正常生物學作用。最終經過研究，使用基質等進行聚集培養，給細胞創造良好的培養環境，延長細胞存活時間，維持其自身特異性功能。所以臨床上使用 BMSCs在患者體外進行培養以及擴增后將 BMSCs重新輸回至患者體內，可有效地緩解患者肝衰竭的病情。此外， BMSCs還具有一定的免疫調節功能，通過細胞間的相互作用及產生細胞因子抑制T細胞的增殖及其免疫反應，從而發揮其免疫重建的功能，有效地減少炎癥因子的數量，最終緩解病情[6]。

綜上所述， BMSCs對于肝衰竭患者的生存預后具有重要的意義，安全性較高，值得臨床推薦應用。

[1] 中華醫學會感染病學分會肝衰竭與人工肝學組,中華醫學會肝病學分會重型肝病與人工肝學組.肝衰竭診治指南:2012年版[J].中華肝臟病雜志,2013,21(3):177-183.

[2] 李小鵬，張倫理.慢加急性肝衰竭研究新進展[J].內科急危重癥雜志,2014,20(3):157-158.

[3] Lee W M，Stravitz R T，Larsin A M，et al.Introduction to the revised american association for the study of liver diseases position paper on acute liver failure 2011[J].Hepatology，2012，55(3):965-967.

[4] 陳菲菲,楊麗華,陳苑莉,等.慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者行異體骨髓間充質干細胞移植的護理[J].中國實用護理雜志,2014,30(18):1-4.

[5] 范敬靜.骨髓間充質干細胞及其向肝樣細胞分化的潛能[J].中國組織工程研究,2014,18(28):4578-4582.

[6] Yagi H,Parekkadan B,Suganuma K,et al.Long-term superior performance of a stem cell/hepatocyte device for the treatment of acute liver failure[J].Tissue Eng part A,2009,15(11):3377-3388.

(責任編輯：周麗萍)

Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell Transplantation on Survival Prognosis of Patients with Liver Failure

ZHANG Mei-hua,Huang Jian-wei,Weng Ling,Wang Qiao-yu,Pan Jie
(DepartmentofGastroenterology,GuangzhouTwelfthMunicipalPeople’sHospital,Guangzhou510620,China)

Objective To study the effect of transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells(BMSCs) on survival prognosis of patients with liver failure.Methods Sixty patients with liver failure were randomly divided into two groups,with 30 patients in each group.Patients in control group were given standard liver protection,jaundice elimination(hepatocyte growth factor,compound glycyrrhizin,transmetil,etc.) and other comprehensive treatments for 1 month in each course.Patients in observation group were treated with the transplantation of BMSCs for 5 day in each course,based on the comprehensive treatment.The levels of alanine transaminase(ALT),total bilirubin(TBIL),albumin(ALB),tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin-1β(IL-1β),prothrombin time(PT) and partial thromboplastin time(APTT) were measured in both groups.In addition,the curative efficacy was compared between the two groups.Results Compared with control group,levels of ALT,TBIL,PT,APTT,TNF-α and IL-1β decreased and levels of ALB increased in observation group(P<0.05 orP<0.01).Furthermore,the total effective rate in observation group was higher than that in control group(96.67% vs 73.33%,P<0.05).Conclusion The transplantation of BMSCs is of great significance for survival prognosis of patients with liver failure.

bone marrow mesenchymal stem cells; liver failure; prognosis; effect

2014-11-25

張美華(1979—)，女，碩士，主治醫師，主要從事肝病的臨床研究。

R575.3

A

1009-8194(2015)06-0015-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.06.005