流式細胞術在淋巴瘤免疫表型分析中的作用

邢娟娟(南昌大學第一附屬醫院血液科，南昌 330006)

流式細胞術在淋巴瘤免疫表型分析中的作用

邢娟娟
(南昌大學第一附屬醫院血液科，南昌 330006)

目的 探討流式細胞術免疫表型分析在淋巴瘤診斷中的應用。方法 采用流式細胞術對92例淋巴瘤患者進行免疫表型分析。結果 在92例受檢者中，B細胞NHL67例，T細胞NHL25例。B細胞NHL標記抗原出現頻率較高的為CD19、 CD22;T細胞NHL標記抗原出現頻率最高的為CD7。結論 流式細胞術在淋巴瘤的診斷分型方面有重要意義。

淋巴瘤； 流式細胞術； 免疫表型分析

伴隨著免疫技術的極大發展，現在歐美淋巴瘤分型以及世界衛生組織的淋巴瘤分類中，已經將原本淋巴細胞白血病跟淋巴瘤兩種疾病歸類為同種疾病。這個分類方法綜合包括了疾病的臨床反應、形態學以及免疫學等多方面的特征。免疫學的分類方法起著極為重要的作用。各個類型的淋巴瘤患者的生物學行為以及臨床表現等均有很大差別，甚至于不同類型淋巴瘤的治療方案都會有極大不同[1]。淋巴瘤是因為血細胞在某個分化階段發生大量的聚集且表達出對應血細胞胞膜或者分化抗原，這些細胞的分化抗原就成為作為鑒別或者分類該種疾病的指標。現今，流式細胞術的免疫分型已經越來越成為淋巴瘤疾病診斷分型的重要手段。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選取2004年2月到2012年2月在南昌大學第一附屬醫院住院及院外的92例初治淋巴瘤患者，男57例，女35例，年齡8～54歲，平均(46.0±3.4)歲。

1.2 方法

1.2.1 試驗材料以及方法

所有標準單克隆抗體包括CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD9、CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD11b、CD11c、CD103、lgM、HLA-DR、FMC-7、K鏈，L鏈以及同型對照等，全部購自美國BD公司。試驗檢測采用美國BD公司三色流式細胞儀。

1.2.2 樣品檢測

抽取患者治療前骨髓液2 mL，加入EDTA抗凝試管,在各個試管里先加入一定量的不同熒光素標記的單克隆抗體，再加入50 μL骨髓，充分地混勻于室溫避光放置20 min，然后再加2 mL紅細胞裂解液，避光10 min，再用離心機于1 500 r/min進行離心5 min，棄去上清液，用PBS進行洗滌，在一天以內進行上機檢測。每管收集細胞2萬個，采用CD45/SSC雙參數散點圖設門來對原始細胞群粒細胞以及單核細胞群進行識別。

2 結果

通過統計研究發現B淋巴瘤細胞的分型表達，CD19、CD20分化抗原；而T系淋巴瘤細胞免疫表型表達較高的是CD7。92例患者中，B細胞來源和T細胞來源患者結果分別見表1和表2。

表1 B細胞NHL免疫表型統計結果

表2 T細胞NHL免疫表型統計結果

3 討論

淋巴細胞瘤是淋巴結或者淋巴結外部位的淋巴組織的免疫細胞瘤[2]。筆者采用流式細胞儀檢測了92例淋巴瘤患者的骨髓細胞免疫表型。同時也發現，T和B淋巴細胞抗原同時表達在 淋巴瘤中較為常見，在淋巴細胞瘤應該主要考慮B系淋巴瘤。

淋巴瘤是高異質性疾病，現今盡管形態學方面的手段雖然能夠做出診斷，但是卻無法細致地判斷瘤細胞的來源以及其生物學性質，也不能判斷出單克隆以及細胞分化的階段[3]，同時傳統的形態學方面的手段還往往帶有檢驗者主觀的判斷誤差。而免疫組織化學染色方法雖然能夠確定淋巴瘤的免疫表型，但卻無法對淋巴瘤進行準確的分型和判斷[4]。流式細胞術采用多色單抗體能夠同時進行標記，能夠做到快速而全面測出細胞抗原的分布，使得免疫分型最終的結果更為客觀而精確，所以采用流式細胞術對淋巴瘤分型診斷對疾病的治療以及預后都有著極為重要的意義。因為淋巴的腫瘤細胞已經基本上喪失其作為正常細胞的分化發育自然規律，所以在淋巴瘤患者中經常出現系列的交叉表達現象。也就是髓系細胞往往伴隨有淋巴系抗原表達或者淋巴細胞伴隨有髓系抗原的表達?，F今，學術界的大多數學者都認為淋巴瘤細胞起源是相對于淋巴定向干細胞，也可能是由于分化或者表達骨髓系以及淋巴系兩種以上抗原的造血祖細胞出現了惡性增殖而最終轉化表達，因此淋巴瘤的早期診斷對于治療極為重要。

淋巴瘤細胞的免疫分型對于反映淋巴瘤細胞的異質性，以及其分型、發病機理等各方面的研究甚至后期的治療方案制作上都具有十分重要的價值?，F今免疫表型跟治療方案的關系仍然存有極大爭議，需要有更多臨床資料的累積，最終為臨床醫師合理化選擇治療方案以及判斷最終患者的預后提供可靠的依據。

[1] 劉鑫.流式細胞術在白血病和淋巴瘤診斷中的應用[J].內蒙古民族大學學報：自然科學版，2010，17(3)：347-350.

[2] 河福金.多參數流式細胞術在非霍奇金淋巴瘤診斷中的應用[J].中華病理學雜志,2006,35(4):203-208.

[3] 夏成青，齊曼，徐先發，等.流式細胞術在彌漫性大B細胞淋巴瘤伴大量T細胞反應病理診斷中的應用[J].中華病理學雜志，2007,3(1):29-32.

[4] 吳宜嘉.流式細胞儀在淋巴瘤患者外周血T細胞亞群診斷中的應用研究[J].海南醫學院學報,2010，16(12)：1660-1662.

(責任編輯：劉大仁)

2014-04-29

R733.7

A

1009-8194(2015)04-0032-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.04.013