hMSH2和nm23在腸癌中的表達及臨床意義

沈 冬，張 瑜

(1.江蘇省蘇州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科 215000；2.江蘇省蘇州市立醫(yī)院北區(qū)檢驗科 215008)

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·論 著·

hMSH2和nm23在腸癌中的表達及臨床意義

沈 冬1，張 瑜2△

(1.江蘇省蘇州市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科 215000；2.江蘇省蘇州市立醫(yī)院北區(qū)檢驗科 215008)

目的 探討人MutS同源蛋白2(hMSH2)和轉(zhuǎn)移抑制基因nm23在腸癌中的表達、相互關(guān)系及其臨床意義。方法 選取未經(jīng)過術(shù)前放、化療的腸癌標本48例及癌旁正常黏膜組織15例，XP免疫組織化學(xué)法檢測hMSH2和nm23蛋白的表達，分析hMSH2和nm23蛋白的表達與腸癌臨床病理特征的關(guān)系及其相互關(guān)系。結(jié)果 腸癌組織hMSH2和nm23蛋白陽性表達率分別為35.4%、62.5%，均顯著低于正常腸黏膜組織(93.3%)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；nm23表達與患者性別、年齡及腫瘤分化程度無關(guān),但與腫瘤漿膜浸潤、腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)；hMSH2與臨床病理參數(shù)無相關(guān)性；nm23與hMSH2蛋白的表達呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 nm23蛋白質(zhì)水平與惡性程度相關(guān),可作為預(yù)測入侵和轉(zhuǎn)移的評判指標。hMSH2蛋白的表達與nm23蛋白合并后的表達對腸癌預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。

nm23； hMSH2； 腸癌； 腫瘤轉(zhuǎn)移

腸癌是消化道最常見的惡性腫瘤，最近幾年腸癌的發(fā)病率和病死率逐年增加，占所有癌癥相關(guān)死亡原因的第3位[1]。目前，腸癌發(fā)生、發(fā)展的確切機制尚不清楚，被視為是多因素、多步驟的復(fù)雜過程。例如，癌基因的活化、抑癌基因的失活和錯配修復(fù)基因的突變等。研究表明，腸癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后與不同基因和蛋白的表達密切相關(guān)，相關(guān)的敏感指標可以更好地指導(dǎo)臨床篩查高危患者,從而加強治療,密切隨訪,并提高患者的生存期。最近,許多實驗研究表明,DNA錯配修復(fù)(MMR)和轉(zhuǎn)移抑制基因nm23的失活在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中扮演一個重要的角色[2-6]。本研究利用XP免疫組織化學(xué)法檢測錯配修復(fù)基因：人MutS同源蛋白2(hMSH2)和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23在腸癌組織中的表達,并探討其與腸癌臨床參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選用腸癌組織48例，為蘇州市立醫(yī)院病理科2010～2012年的存檔蠟塊，為手術(shù)切除腸癌標本、正常腸黏膜組織(據(jù)腫瘤5 cm以上)15例，均有詳細臨床資料，年齡26～86歲，中位年齡62.2歲。全部患者術(shù)前均未接受放療或化療，所有標本均經(jīng)2位病理專家進行組織病理證實。

1.2 儀器與試劑 nm23一抗為鼠抗人多克隆(基因公司，工作液)；hMSH2一抗為兔抗人多克隆(基因公司，工作液)；二抗選用福州邁新公司產(chǎn)品。

1.3 方法 按照傳統(tǒng)的方法石蠟包埋組織4 μm切片，采用XP免疫組織化學(xué)法，試驗中以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照；以試劑公司提供的陽性對照片作為陽性對照。nm23和hMSH2的陽性判定標準按照參考文獻[1]標準讀片：hMSH2蛋白表達位于細胞核，無著色或小于1%的細胞核著色視為(-)，>1%為(+)；nm23蛋白表達位于胞漿，無著色為(-)，>1%著色為(+)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS18.0分析軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 nm23和hMSH2在正常腸黏組織及腸癌組織中的表達 15例正常腸黏膜組織中表達nm23和hMSH2均為14例(93.3%)；nm23在48例腸癌中的陽性表達率為62.5%(30/48)(圖1A)；hMSH2在腸癌中的陽性表達為35.4%(17/48)(圖1B)。腸癌組織nm23、hMSH2蛋白的陽性表達均顯著低于癌旁正常腸黏組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

注：A表示nm23腸癌胞漿陽性;B表示hMSH2腸癌細胞核陽性(XP免疫組織化學(xué)法高倍放大)。

圖1 nm23和hMSH2在腸癌中的陽性表達

2.2 nm23和hMSH2的表達與臨床病理特征的關(guān)系 見表1。統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性分析表明，nm23蛋白表達與患者的性別、腫瘤分化程度、年齡無明顯相關(guān)性(P>0.05),但與腫瘤漿膜是否浸潤、腸癌淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P<0.05)。hMSH2蛋白的表達與腸癌臨床病理參數(shù)之間無相關(guān)性(P>0.05)。

表1 nm23和hMSH2蛋白表達與腸癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 腸癌組織中nm23和hMSH2蛋白表達相關(guān)性分析 見表2。Spearman等級相關(guān)分析結(jié)果顯示，48例腸癌nm23陽性者hMSH2亦陽性為14例，nm23和hHMSH2蛋白在腸癌中的表達呈正相關(guān)(r=0.304，P=0.037)。

表2 腸癌組織中nm23和hMSH2蛋白表達的相關(guān)性

3 討 論

人類DNA錯配修復(fù)基因包括hMSH2、人MutS同源蛋白3(hMSH3)、人MutS同源蛋白6(hMSH6)、人MutL同源蛋白1(hMLH1)、人MutL同源蛋白3(hMLH3)和人減數(shù)分裂后分離增加蛋白1(hPMS1)6種[7]。其作用機制可能是由錯配修復(fù)蛋白編碼MMR基因構(gòu)成異二聚體參與錯配修復(fù)。修復(fù)單個堿基錯配及單個堿基缺失/插入錯配，維持基因組的穩(wěn)定性[8-10]。MMR基因缺陷會導(dǎo)致錯配修復(fù)功能損失,增加細胞突變頻率,不斷擴大和積累突變事件,這樣的錯誤信息通過整個基因組,并最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，48例腸癌中hMSH2蛋白陰性表達者31例(64%)，與Wu等[1]的研究相比較略高，可能與本組標本例數(shù)較少有關(guān)，但腸癌與周圍正常腸黏膜hMSH2蛋白表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，腸癌中hMSH2缺失，表明DNA修復(fù)能力減弱；同時與Wu等[1]的研究相一致：hMSH2蛋白表達與臨床病理參數(shù)之間無相關(guān)性，但通過Spearman等級相關(guān)統(tǒng)計分析顯示，hHMSH2和nm23蛋白在腸癌中的表達呈正相關(guān)(r=0.304，P=0.037)。表明這二者可能有積極反饋調(diào)控機制。

nm23基因是腫瘤轉(zhuǎn)移抑癌基因，其家族包括8個成員中,只有nm23 H1和nm23 H2被證明有能力抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[12]，是美國國立癌癥研究所的Steeg等[13]1988年從7個轉(zhuǎn)移潛力不同的K-1735鼠黑色素瘤細胞株中用消減雜交分離克隆成功的，nm23等位基因的突變、缺失和失表達與許多惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[14-15]。Steeg等[13]的研究表明，nm23在低轉(zhuǎn)移細胞株中的表達強度是高轉(zhuǎn)移細胞株內(nèi)的10倍，表明nm23基因在高轉(zhuǎn)移腫瘤中表達降低，這一結(jié)果與本研究結(jié)果相一致，本研究中nm23蛋白的表達在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達率為50.0%(15/30)，而在淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移組其表達率為83.3%(15/18),說明nm23基因在轉(zhuǎn)移組中表達降低，同時，nm23蛋白在腫瘤浸潤達漿膜及漿膜外者的表達率為36.4%(4/11)而在腫瘤浸潤深度未達漿膜者中nm23蛋白的表達率為70.2%(26/37)，由此表明腫瘤浸潤越深其表達強度降低，與文獻[1]報道一致。進一步說明nm23基因失表達時,機體對癌細胞約束力下降,從而極大地促進周圍組織的侵犯和遠處轉(zhuǎn)移。

綜上所述，hMSH2錯配修復(fù)基因的突變會導(dǎo)致廣泛的體細胞突變和DNA復(fù)制錯誤,導(dǎo)致因癌基因突變率增加,從而推動相關(guān)因素，如下調(diào)nm23基因表達。總之，nm23蛋白質(zhì)水平與惡性程度有關(guān),可以作為一項指標來預(yù)測入侵和轉(zhuǎn)移潛能[16]。hMSH2蛋白的表達與nm23蛋白呈正相關(guān),二者合并后的表達對腸癌預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。

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The expression of hMSH2 and nm23 in intestinal cancer and its clinical significance

SHENDong1,ZHANGYu2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,SuzhouHospitalofTraditionalChineseMedicine,Suzhou,Jiangsu215000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,NorthBranchofSuzhouMunicipalHospital,Suzhou,Jiangsu215008,China)

Objective To study the expression of hMSH2 and nm23 in intestinal cancer,and to explore their inter-relationship and clinical significance.Methods XP immunohistochemistry was used to detect the expression levels of hMSH2 and nm23 in samples including 48 cases of intestinal cancer tissues without radiotherapy or chemotherapy and 15 cases of adjacent normal colon tissues.The relevance of the expression levels of nm23 and hMSH2 and their correlations to the clinicophathologic features of intestinal cancer were analyzed.Results The positive rates of hMSH2 and nm23 were respectively 35.4% and 62.5% in intestinal cancer tissues,which were significantly lower than those in adjacent normal colon tissues(93.3%),with statistical difference (P<0.05).The expression level of nm23 was not significantly associated with the genders,ages or differentiation of the patients,however,it was closely associated with serous coat infiltration and lymphatic metastasis of intestinal cancer (P<0.05).The expression level of hMSH2 was not significantly correlated with these clinicopathologic features.There was a positive correlation between the expression of nm23 and hMSH2 in intestinal cancer (P<0.05).Conclusion The expression level of nm23 was related with the degree of malignancy,which could be used as a potential index to predict the invasion and metastasis.The expression of hMSH2 and nm23 had certain guiding significance for the prognosis of intestinal cancer.

nm23; hMSH2; intestinal cancer; tumor metastasis

沈冬，男，本科，主管技師，主要從事臨床檢驗工作。△

，E-mail：13584884983@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.017

A

1672-9455(2015)24-3655-02

2015-04-21

2015-06-17)