HBV-DNA檢測(cè)在乙型肝炎診斷中的價(jià)值分析

羅 瀾

(湖北省荊州市公安縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 434300)

?

·臨床研究·

HBV-DNA檢測(cè)在乙型肝炎診斷中的價(jià)值分析

羅 瀾

(湖北省荊州市公安縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 434300)

目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)-DNA檢測(cè)在乙型肝炎診斷中的價(jià)值。方法 選取2012年2月至2013年2月收治的門(mén)診及住院患者684例，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)HBV血清標(biāo)記物，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果將所有患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組，并采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)HBV-DNA，比較各組 HBV-DNA 陽(yáng)性檢出率及水平。結(jié)果 Ⅰ組(“大三陽(yáng)”組)患者HBV-DNA陽(yáng)性檢出率達(dá)100.0%，平均水平為5.10×107copy/mL，較其他各組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；V組(乙肝兩對(duì)半“全陰”組)患者HBV-DNA陽(yáng)性檢出率為0.0%，平均水平為1.11×102copy/mL。結(jié)論 單獨(dú)采用ELISA定性檢測(cè)HBV血清標(biāo)志物對(duì)乙型肝炎的診斷具有一定的局限性，輔以HBV-DNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)可提高早期診斷的準(zhǔn)確率及靈敏度。

乙型肝炎； 血清標(biāo)志物； HBV-DNA； 定量檢測(cè)

乙型肝炎是全球最常見(jiàn)的慢性傳染性疾病之一，我國(guó)慢性乙型肝炎的發(fā)病率位居世界首位[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年因乙型肝炎及其相關(guān)性疾病，如乙型肝炎所致肝衰竭等死亡的人數(shù)高達(dá)25萬(wàn)，給社會(huì)及患者家庭帶來(lái)了嚴(yán)重的威脅[2]。乙型肝炎屬于病毒性感染疾病，根治極為困難，因此臨床早期診斷顯得尤為重要。目前，臨床對(duì)乙型肝炎的檢查主要通過(guò)乙型肝炎病毒(HBV)5項(xiàng)血清標(biāo)志物的定性檢測(cè)及HBV-DNA的定量檢測(cè)。本研究通過(guò)分析HBV-DNA檢測(cè)在診斷乙型肝炎中的價(jià)值及其與HBV血清標(biāo)志物的相關(guān)性，為臨床診斷乙型肝炎提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年2月至2013年2月在本院就診的684例門(mén)診及住院患者為研究對(duì)象，其中男432例，女252例；年齡1～87歲，平均(33.7±1.1)歲；病程3 d至6年，平均為(1.5±0.1)年。所有患者均晨起抽取空腹靜脈血6 mL，均分為2管，分別進(jìn)行HBV血清標(biāo)志物及HBV-DNA檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法及儀器設(shè)備 (1)HBV血清標(biāo)志物的檢測(cè)：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(抗-HBe)和乙型肝炎核心抗體(抗-HBc)的檢測(cè)采用中山生物公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒。(2)HBV-DNA檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)，從血清中提取HBV-DNA加入反應(yīng)管，放入擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)結(jié)束后由電腦自動(dòng)分析結(jié)果；儀器采用美國(guó)MJ公司生產(chǎn)的Option DNA Engine型PCR擴(kuò)增儀及上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供的熒光定量 HBV-DNA試劑盒。所有操作過(guò)程均嚴(yán)格按照試劑盒要求及防污染措施進(jìn)行。

1.2.2 分組及指標(biāo)陽(yáng)性值界定 按照HBV血清標(biāo)志物的ELISA檢測(cè)結(jié)果將所有患者分成5組，Ⅰ組(“大三陽(yáng)”組)為HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽(yáng)性，Ⅱ組(“小三陽(yáng)”組)為HBsAg、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性，Ⅲ組為抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc陽(yáng)性，Ⅳ組為HBsAg、抗-HBc陽(yáng)性；Ⅴ組為抗-HBs陽(yáng)性。未提及者即為陰性。HBV-DNA≤500 copy/mL為陰性，>500 copy/mL為陽(yáng)性。并根據(jù)HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果分為4個(gè)水平。

2 結(jié) 果

2.1 HBV血清標(biāo)志物ELISA檢測(cè)結(jié)果 Ⅱ組患者例數(shù)最多，所占百分率達(dá)44.0%(301/684)，其次為Ⅰ組，占30.8%(211/684)，均明顯高于Ⅲ組(12.6%)、Ⅳ組(10.8%)、Ⅴ組(1.8%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 HBV-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果 Ⅰ組患者HBV-DNA陽(yáng)性檢出率達(dá)100.0%，HBV-DNA水平較其他各組明顯增高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 HBV-DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

由于肝炎病毒的入侵，急慢性肝炎患者的肝細(xì)胞受到嚴(yán)重的損害。我國(guó)目前約有2億人口感染HBV，給社會(huì)造成了很大的負(fù)擔(dān)[3]。HBV屬于一種部分雙鏈DNA病毒，所有遺傳信息均載于DNA片段上，病毒以此復(fù)制、增殖。HBV-DNA為無(wú)蛋白質(zhì)包裹的裸露DNA，具有感染性，可單獨(dú)完成對(duì)宿主的侵襲，使宿主體內(nèi)出現(xiàn)完整的HBV顆粒[4]。由于HBV感染早期的臨床表現(xiàn)不典型，大量乙型肝炎患者就診時(shí)已出現(xiàn)并發(fā)癥，這給乙型肝炎的臨床治療帶來(lái)了很大的困難，極大地影響患者預(yù)后[5]。因此，早期診斷與預(yù)防乙型肝炎至關(guān)重要。

HBV-DNA檢測(cè)的主要目的是判斷患者的病毒復(fù)制量，反映疾病的傳染性，尤其在判斷乙型肝炎的轉(zhuǎn)歸及用藥前后的療效等方面有重要的參考價(jià)值，同時(shí)也是重要的抗病毒治療用藥指征之一[6]。本研究采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)HBV-DNA進(jìn)行檢測(cè)，可以準(zhǔn)確地為乙型肝炎的診斷提供依據(jù)。實(shí)時(shí)熒光定時(shí)PCR是臨床基因診斷的有力手段，該方法現(xiàn)已采取閉管方式進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)，克服了以往普通 PCR的污染問(wèn)題，進(jìn)一步增加了檢測(cè)的可信度[7]。此外，熒光探針加強(qiáng)了PCR檢測(cè)的特異性，使其能直接定量檢測(cè)HBV水平，準(zhǔn)確地反映HBV的感染、復(fù)制及治療情況[8]。并且，該方法的實(shí)際操作過(guò)程可設(shè)陽(yáng)性梯度，定量范圍極廣。而ELISA作為臨床診斷HBV感染的傳統(tǒng)方法，與實(shí)時(shí)熒光定量PCR相比，該方法是一種檢測(cè)病毒感染的間接手段，反映了人體對(duì)HBV的免疫反應(yīng)狀態(tài)[9]。

本研究684例患者血清均經(jīng)ELISA檢測(cè)乙型肝炎兩對(duì)半，結(jié)果顯示“小三陽(yáng)”患者所占百分率最高(44.0%)，其次為“大三陽(yáng)”患者(30.8%)，均明顯高于其他各組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。說(shuō)明目前乙型肝炎的患病率高，但早期檢出率低。對(duì)所有患者行HBV-DNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，“大三陽(yáng)”患者HBV-DNA陽(yáng)性檢出率達(dá)100.0%，平均水平為5.10×107copy/mL，較其他各組明顯增高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而在乙型肝炎兩對(duì)半全陰的Ⅴ組，HBV-DNA定量檢測(cè)平均水平為1.11×102copy/mL，陽(yáng)性率為0.0%。HBV-DNA的定量檢測(cè)可以作為ELISA的補(bǔ)充，充分反映HBV在體內(nèi)的感染與復(fù)制狀況；并且，在臨床干預(yù)后檢測(cè)HBV-DNA水平還可以判斷療效，為進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療提供依據(jù)[10]。

綜上所述，單純的ELISA定性檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物對(duì)乙型肝炎的診斷具有一定的局限性，輔以HBV-DNA的定量檢測(cè)能提高乙型肝炎早期診斷的準(zhǔn)確率及靈敏度。

[1]Martinot-Peignoux M，Lapalus M，Laouénan C，et al．Prediction of disease reactivation in asymptomatic hepatitis B e antigen-negative chronic hepatitis B patients using baseline serum measurements of HBsAg and HBV-DNA[J]．J Clin Virol，2013，58(2)：401-407．

[2]秦雯，董慧珠．乙型肝炎兩對(duì)半和HBV-DNA定量檢測(cè)的臨床應(yīng)用[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5(22)：1353-1355．

[3]梁森，張順祥，胡東生，等．乙型病毒性肝炎病人經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)研究進(jìn)展[J]．中國(guó)公共衛(wèi)生，2011，27(10)：1227-1229．

[4]張敏潔，陳維順．HBV感染與宿主基因及病毒DNA甲基化[J]．醫(yī)學(xué)綜述，2012，18(19)：3181-3183．

[5]段正軍，徐杰，田鵬飛．時(shí)間分辨熒光免疫法測(cè)定乙型肝炎病毒標(biāo)志物[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2007，4(11)：1057-1058．

[6]吳云忠，趙鳳林，張春澤，等．慢性重型乙型肝炎轉(zhuǎn)歸相關(guān)因素及抗病毒治療研究[J]．中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2007，21(2)：120-122．

[7]蔣棟能．乙肝病毒標(biāo)志物定量檢測(cè)與乙肝患者肝損傷的相關(guān)性分析[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2006，35(18)：1641-1642．

[8]羅慧琴，王志剛，李玲，等．乙肝患者血清標(biāo)志物與前S1抗原及HBV-DNA相關(guān)性分析[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(24)：3337-3338．

[9]李金明．聚合酶鏈反應(yīng)臨床應(yīng)用的優(yōu)越性和局限性[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28 (3)：225-227．

[10]靳禮松．乙型肝炎病毒DNA與＂乙肝兩對(duì)半＂模式關(guān)系的臨床研究[J]．國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(21)：2837-2839．

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.045

A

1672-9455(2015)06-0827-01

2014-07-27

2014-11-22)