惠州龍門地區婦女宮頸病變中p16INK4a蛋白與KGFR的表達及意義

王永良，陳美才

(1.廣東省惠州市龍門縣人民醫院 516800；2.廣州金域醫學檢驗中心有限公司 510330)

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·臨床研究·

惠州龍門地區婦女宮頸病變中p16INK4a蛋白與KGFR的表達及意義

王永良1，陳美才2

(1.廣東省惠州市龍門縣人民醫院 516800；2.廣州金域醫學檢驗中心有限公司 510330)

目的 探討p16INK4a蛋白、角質細胞生長因子受體(KGFR)在惠州龍門地區婦女宮頸病變中的表達及意義。方法 選取2013年6月至2014年6月于惠州市龍門人民醫院就診的180例婦女，按照病例診斷結果將所有研究對象分為宮頸鱗癌組(40例)，宮頸上皮內瘤變(CIN)Ⅱ/Ⅲ組(45例)，CINⅠ組(48例)，健康及慢性炎癥組(47例)。采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白過氧化物酶連結(SP)法對p16INK4a蛋白及KGFR的表達進行檢測，并比較分析不同病理分期的表達差異。結果 宮頸鱗癌組、CINⅡ/Ⅲ組、CINⅠ組、健康及慢性炎癥組的p16INK4a蛋白表達陽性率分別為90.0%、82.2%、29.2%、0.0%，KGFR表達陽性率分別為87.5%、84.4%、52.1%、42.6%。p16INK4a蛋白與KGFR在宮頸組織中的表達隨著病理分期的上升而增加，組間p16INK4a蛋白及KGFR表達陽性率比較差異均有統計學意義(P<0.01)。結論 惠州龍門地區婦女宮頸病變中p16INK4a蛋白、KGFR均有不同程度的表達，且與宮頸病變進展密切相關。

宮頸病變； p16INK4a； 角質細胞生長因子受體

宮頸癌是目前第2高發的女性腫瘤，其發病率僅次于乳腺癌，已成為中青年婦女的重要死因，據統計全世界每年約有27萬人死于宮頸癌，其中發展中國家占85%[1]。宮頸癌的發展與多個抑癌基因的失活密切相關。其中p16INK4a基因位于9p21，直接參與細胞從G1到S期的調節，如失去該調控作用，細胞將會去分化而形成腫瘤[2]。而角質細胞生長因子受體(KGFR)則與上皮源性腫瘤的發展相關，目前已證實KGFR在各種上皮源性腫瘤中表達。p16INK4a、KGFR在不同地區人群的表達各有差異，本研究主要探討惠州龍門地區婦女宮頸病變中p16INK4a、KGFR的表達及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年6月至2014年6月于該院婦產科就診的婦女180例，其中宮頸鱗癌患者40例(宮頸鱗癌組)，平均年齡(48.32±8.22)歲，平均身高(158.12±4.26)cm，平均體質量(48.13±6.74)kg,平均體質量指數(BMI)(21.64±3.24)kg/m2；宮頸上皮內瘤樣變(CIN)Ⅱ/Ⅲ患者45例(CINⅡ/Ⅲ組)，平均年齡(47.25±8.72)歲，平均身高(159.54±4.47)cm，平均體質量(50.25±5.59)kg,平均BMI(22.61±3.42)kg/m2；CINⅠ患者48例(CINⅠ組)，平均年齡(49.72±7.45)歲，平均身高(158.74±4.79)cm，平均體質量(51.80±5.56)kg,平均BMI(23.61±7.67)kg/m2；健康及慢性炎癥患者47例(健康及慢性炎癥組)，平均年齡(48.52±6.62)歲，平均身高(159.82±5.15)cm，平均體質量(50.26±7.87)kg,平均BMI(26.24±7.88)kg/m2。所有研究對象的病理診斷均由2位病理專家進行復核，且均未經過任何放化療治療。各組年齡、身高、體質量和BMI等一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學檢測 采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白過氧化物酶連結(SP)法對p16INK4a、KGFR蛋白進行檢測。切片厚度為2 μm，60 ℃恒溫過夜后脫蠟，乙醇梯度脫水后分別進行：蒸餾水洗片，抗原修復，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶，PBS再沖洗，加基因科技(上海) 有限公司生產的鼠單抗人p16INK4a (1∶100)，美國Santa Cruz公司產生的KGFR(1∶200)，4 ℃過夜，PBS沖洗，生物素化后加入二抗(羊抗鼠)，PBS沖洗，加入鏈霉素抗生物素-過氧化物酶，北京中杉金橋生物公司產生的二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木精復染，脫水透明，中性樹膠封片。陰性對照以PBS液代替一抗，余下操作同上。

1.2.2 結果判讀 光學顯微鏡下，每張切片取5～10個視野,每個視野計數150個細胞。KGFR于細胞質或細胞膜表達，P16INK4a蛋白于細胞質或細胞核表達。判斷標準:以陽性細胞小于5%為陰性，5%～25%為弱陽性，26%～50%為中陽性，51%～75%為強陽性。

2 結 果

p16INK4a蛋白與KGFR在宮頸組織中的表達隨著病理分期的上升而增高，組間p16INK4a蛋白與KGFR表達陽性率比較差異均有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 P16INK4a蛋白與KGFR表達與不同病理分期宮頸組織學類型的關系[n(%)]

續表1 P16INK4a蛋白與KGFR表達與不同病理分期宮頸組織學類型的關系[n(%)]

3 討 論

人乳頭瘤病毒(HPV)感染是宮頸癌最重要的病因，高危型 HPV 與宮頸鱗狀上皮內病變的發生密切相關[3]，用基因分型等技術可在99.17%的宮頸癌標本中檢出高危型HPV，其中以HPV16、18 型最為常見。HPV16型多見于鱗癌，HPV18型則多見于腺癌[4]。近年來研究顯示，抑癌基因p16INK4a幾乎在所有HPV陽性的宮頸病變中表達[5]。

p16INK4a蛋白由抑癌基因INK4a編碼,被證實為直接調控細胞周期的抑癌基因。p16INK4a通過與CDK4和CDK6結合發揮調節作用，調控細胞增殖。Braganca等[6]研究發現，79.2%的宮頸癌患者p16INK4a表達陽性，該抑癌基因參與宮頸癌的整個病理過程，隨著宮頸病變程度的增加，p16INK4a蛋白的表達也越來越明顯。Guo等[7]研究顯示，p16INK4a基因對CIN的預測較HPV基因分型更為敏感。本研究對本地區宮頸病變婦女的p16INK4a蛋白進行檢測，同樣表明p16INK4a蛋白與病變的嚴重程度密切相關。

角質細胞生長因子(KGF)屬于纖維母細胞生長因子家族，主要參與間質細胞與上皮細胞間的相互作用，與KGFR特異結合，促進上皮細胞分化、增殖和遷移。KGFR屬于跨膜酪氨酸激酶,由成纖維細胞生長因子受體2(FGFR2)剪接而成，主要在上皮細胞內表達。通過與成纖維細胞生長因子受體1(FGFR1)、FGFR3、FGFR10等受體結合發揮作用。越來越多的研究發現，KGFR與眾多上皮源性腫瘤密切相關，其中結腸癌和胰腺癌中KGFR的表達早已經被證實，表明其在腫瘤演變中起著促進作用。Kurban等[8]發現，在宮頸癌的CaSKi和HeLa細胞株中檢測到KGFR，而在ME-180細胞株中并未發現，KGFR在正常宮頸上皮及平滑肌上幾乎無表達，宮頸癌上皮儲備細胞和鱗狀細胞KGFR的陽性率高達86%，而其他非腫瘤區域及非上皮細胞和儲備細胞中則未見KGFR表達。本研究結果提示，KGFR的表達與宮頸病變程度有關，再次證明KGFR在宮頸癌的發生、發展中起著重要定作用，可與p16INK4a蛋白一同作為預測因子。

綜上所述，本研究初步證實KGFR與p16INK4a在本地宮頸病變婦女有一定的表達，且與病變嚴重程度密切相關。為使結果更加可靠，并為宮頸癌篩查及治療提供可靠的依據與評估指標，將進一步增大樣本量進行研究。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.044

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1672-9455(2015)06-0825-02

2014-08-01

2014-12-02)