桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查人群珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布*

陳麗坤，韋國(guó)凱，陳湘壬，黃麗梅，廖珍藝，王俊利，韋貴將(.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西百色 533000)

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桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查人群珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布*

陳麗坤1，韋國(guó)凱1，陳湘壬1，黃麗梅1，廖珍藝1，王俊利2△，韋貴將(1.右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西百色 533000)

目的 調(diào)查桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查人群珠蛋白生成障礙性貧血 (簡(jiǎn)稱地貧)的基因攜帶率、基因型及其分布特征。方法 回顧性分析2012～2013年桂西地區(qū)的右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、百色市人民醫(yī)院、百色市婦幼保健院共三家醫(yī)院的以產(chǎn)前篩查為目的的育齡人群地貧檢查相關(guān)數(shù)據(jù)，包括血常規(guī)、血紅蛋白電泳、地貧基因檢查等。結(jié)果 收集到1 718例(即859對(duì))夫婦的地貧篩查的相關(guān)數(shù)據(jù)，得出育齡人群中地貧基因攜帶者651例，地貧總發(fā)生率為37.90%，其中 α-地貧347例，發(fā)生率為20.20%，β-地貧304例，發(fā)生率為17.70%，α-地貧復(fù)合β-地貧54例，發(fā)生率為3.14%。共檢出攜帶有相同α 或 β-地貧基因型的高風(fēng)險(xiǎn)夫婦 53對(duì)，占參檢夫婦對(duì)數(shù)的6.17 %。結(jié)論 桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查育齡人群地貧基因攜帶率近40%，其中α-地貧基因型以αα/--SEA 和αα/-α3.7為主；β-地貧基因型以β17M/N和β41-42M/N為主；此數(shù)據(jù)可為該地區(qū)育齡人群的地貧防控提供支持。

桂西地區(qū)； 育齡人群； 珠蛋白生成障礙性貧血； 基因型分布

珠蛋白生成障礙性貧血(簡(jiǎn)稱地貧)，是由于常染色體遺傳性缺陷，引起珠蛋白肽鏈合成障礙，使一種或幾種珠蛋白肽鏈數(shù)量不足或完全缺乏，導(dǎo)致的一種危害嚴(yán)重的溶血性貧血遺傳性疾病[1]。地貧常見(jiàn)于在我國(guó)長(zhǎng)江以南省區(qū)，特別是廣西、廣東和海南三省[2-3]。地貧的高發(fā)病率，已使各種血紅蛋白病成為這些地區(qū)嚴(yán)重的社會(huì)公共衛(wèi)生問(wèn)題。此外，重型地貧可導(dǎo)致死亡，且目前尚缺乏對(duì)重型地貧的根治方法，因此在廣西地區(qū)對(duì)人口質(zhì)量構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅[4]。目前，在人群中實(shí)施遺傳篩查預(yù)防，對(duì)妊娠婦女實(shí)施產(chǎn)前診斷是最有效的降低地貧發(fā)生率的措施。本研究以廣西桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查育齡人群為對(duì)象，旨在初步掌握該地區(qū)育齡人群中地貧的基因攜帶率、基因型及其分布特征，為當(dāng)?shù)卣歪t(yī)療單位制定有效的地貧控制策略，避免重型地貧患兒的出生奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2012～2013年桂西地區(qū)右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、百色市人民醫(yī)院、百色市婦幼保健院共三家醫(yī)院以產(chǎn)前篩查為目的育齡人群地貧檢查相關(guān)數(shù)據(jù)，包括血常規(guī)、血紅蛋白電泳、地貧基因檢查等，調(diào)查對(duì)象年齡20～46歲。

1.2 方法

1.2.1 血標(biāo)本采集 用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝真空管分別采集外周血各2 mL進(jìn)行地貧基因型分布研究。

1.2.2 紅細(xì)胞參數(shù)分析及血紅蛋白(Hb)電泳 采用日本東亞Sysmex XE-5000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行各項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)分析；按照《全國(guó)檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版，制備血紅蛋白液，然后將其加樣于已浸透Tris緩沖液的醋酸纖維薄膜條上，置pH 8.5 的緩沖液中電泳30 min，各區(qū)帶剪下直接洗脫于蒸餾水中比色測(cè)定(721分光光度計(jì))，對(duì)HbA2及Hb F水平進(jìn)行定量。最后，以紅細(xì)胞平均體積(MCV)小于82 fL作為α和β地貧陽(yáng)性表型的篩查指標(biāo)，以Hb F>5%為δβ地貧及HPFH的陽(yáng)性表型篩查指標(biāo)。

1.2.3 DNA提取 采用商品化全血基因組提取試劑盒(QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit)提取標(biāo)本DNA，提取后的標(biāo)本DNA用紫外分光光度計(jì)UV-2000(美國(guó)Unico 公司)檢測(cè)DNA的濃度。

1.2.4 地貧基因檢測(cè) 采用深圳亞能公司生產(chǎn)的α地貧檢測(cè)試劑盒[國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))2008第3401251號(hào)]提取 EDTA-K2抗凝真空管(廣州陽(yáng)普醫(yī)療公司)抽取 2 mL靜脈血DNA，用Gap-PCR和PCR-RDB檢測(cè)中國(guó)人常見(jiàn)8種α地貧和18種β地貧基因型；對(duì)Hb A2>3.5%且18種β地貧檢測(cè)陰性的標(biāo)本，進(jìn)行β珠蛋白基因全測(cè)序；用MLPA技術(shù)分析Hb F>5%標(biāo)本，根據(jù)其結(jié)果設(shè)計(jì)Gap-PCR或普通PCR引物，擴(kuò)增后測(cè)序，確認(rèn)δβ地貧或HPFH基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料的相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 α和β-地貧的基因攜帶率 收集到1 718例(即859對(duì))夫婦地貧篩查的相關(guān)數(shù)據(jù)，檢出地貧基因攜帶者651例，總發(fā)生率為37.90%，其中α-地貧347例，發(fā)生率為20.20%，β-地貧304例，發(fā)生率為17.70%，α-地貧復(fù)合β-地貧54例，發(fā)生率為3.14%。未發(fā)現(xiàn)δβ地貧及胎兒血紅蛋白持續(xù)增多癥(HPFH)。共檢出攜帶有相同α或β-地貧基因型的高風(fēng)險(xiǎn)夫婦53對(duì)，占參檢夫婦對(duì)數(shù)的6.17%。

2.2 α-地貧基因型及其構(gòu)成比 在檢出的347例α-地貧中，缺失型α-地貧基因型及所占比例分別為：東南亞缺失型雜合子(--SEA/αα)占53.03%，左、右缺失型雜合子(αα/-α4.2和 αα/-α3.7)分別占5.48%和15.27%，左、右缺失型純合子(-α4.2/-α4.2和-α3.7/-α3.7)分別占0.29%和0.86%，血紅蛋白H病-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA分布占3.46%、0.86%，α3.7/α4.2占1.15%。另外檢出突變型 α-地貧68例，其基因型見(jiàn)表1。本地區(qū)與廣西內(nèi)其他市區(qū)產(chǎn)前篩查人群α-地貧的調(diào)查結(jié)果的比較見(jiàn)表2。

表1 桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查人群中68例突變型α-地貧基因型及構(gòu)成比

表2 不同市區(qū)產(chǎn)前篩查人群中α-地貧的基因缺失型及其構(gòu)成比

表3 桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查人群中 11種β-地貧的基因型及其構(gòu)成比

續(xù)表3 桂西地區(qū)產(chǎn)前篩查人群中 11種β-地貧的基因型及其構(gòu)成比

2.3 β-地貧基因型及其構(gòu)成比 在檢出的304例β-地貧中，共檢出11種β-地貧雜合子，未檢出β-地貧純合子，其構(gòu)成比見(jiàn)表3，其中，最常見(jiàn)的5種突變類型依次為β17M/N(45.39%)、β41-42M/N(30.26%)、β71-72M/N(5.92%)、β-28M/N(3.95%)、β654M/N(1.97%)，共占β突變基因的87.49 %，與廣西內(nèi)其他市區(qū)產(chǎn)前篩查人群的β-地貧基因型調(diào)查結(jié)果的比較見(jiàn)表4。

表4 不同市區(qū)產(chǎn)前篩查人群中β-地貧的基因型及其構(gòu)成比

續(xù)表4 不同市區(qū)產(chǎn)前篩查人群中β-地貧的基因型及其構(gòu)成比

3 討 論

分子遺傳流行病學(xué)資料顯示，地貧基因突變類型和頻率具有明顯的地理和種族特異性，其廣泛地分布于地中海沿岸地區(qū)和東南亞，我國(guó)的廣東、廣西、海南、云南、貴州、四川及香港區(qū)比較常見(jiàn)。據(jù)以往的文獻(xiàn)報(bào)道顯示，我國(guó)廣西α-地貧發(fā)生率為10%～15%，β-地貧的發(fā)生率為4%～7%[7]。

根據(jù)缺乏的珠蛋白鏈種類及缺乏程度，地貧可分為α、β、δ、γ、δβγδβ等不同類型，其中分布最廣和最嚴(yán)重的是α和β-地貧。α-地貧有缺失型和突變型兩類，在我國(guó)大多數(shù)是由于α珠蛋白基因的缺失所致，少數(shù)由基因點(diǎn)突變?cè)斐伞＆林榈鞍谆虼囟ㄎ挥?6號(hào)染色體上，每條染色體有2個(gè)串聯(lián)的α珠蛋白基因，正常的二倍體細(xì)胞有4個(gè)α珠蛋白基因。缺失型就是α珠蛋白基因簇大片段的丟失致使全部或部分缺失了兩個(gè)α基因，α基因缺失的數(shù)量越多，病情越嚴(yán)重。我國(guó)南方最常見(jiàn)的α-地貧缺失類型為東南亞型(即--SEA型)。β珠蛋白基因的突變以點(diǎn)突變?yōu)橹鳎癜l(fā)現(xiàn)100余種，缺失型突變則很少見(jiàn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，在1 718例育齡人群的地貧篩查中，共檢出地貧基因攜帶者651例，檢出率為37.90%，低于廣西欽州市70.19%(3 033/4 304)[3]和南寧市66.44%(895/1 347)[8]，高于玉林市21.97%(359/1 634)[9]。導(dǎo)致這種差異的原因一是與研究方法有關(guān)，如蒲斌[3]對(duì)來(lái)欽州市醫(yī)院就診的2 152對(duì)夫婦一方或雙方均為α-地貧攜帶者行產(chǎn)前基因診斷，大大提高了地貧的檢出率；盧秋維[8]研究方法是首先基因診斷1 347例可疑地貧者(MCV篩檢陽(yáng)性)，然后進(jìn)行地貧基因診斷，最終確診地貧895例，實(shí)際上參檢的育齡夫婦3 219對(duì)(即6 438例)，地貧基因攜帶率應(yīng)為13.90%。其次原因可能與不同地區(qū)間地貧宣教、育齡人群地貧知曉程度等有關(guān)。

與廣西內(nèi)其他市區(qū)相比，桂西地區(qū)育齡人群α、β-地貧的基因型和構(gòu)成比基本相似。在α-地貧缺失型突變基因中，東南亞缺失型雜合子(--SEA/αα)和右缺失型雜合子αα/-α3.7所占比例最高，即這些地區(qū)α-地貧以這兩種基因型為主；在β-地貧基因類型中，桂西地區(qū)以β17 M/N所占比例最高，β41-42 M/N次之，而柳州市、玉林市以β41-42 M/N所占比例最高，β17 M/N次之，梧州市以β41-42 M/N所占比例最高，β-28 M/N次之，差異原因可能與不同區(qū)域人類遺傳學(xué)遷徙差異有關(guān)。

眾所周知，地貧是一種常見(jiàn)的單基因遺傳性溶血性疾病，目前尚無(wú)良好的根治方法。目前最有效的預(yù)防方法是防止重癥地貧患兒的出生，一旦新生兒出現(xiàn)重癥地貧，就需要通過(guò)定期輸血、去鐵胺除鐵，甚至造血干細(xì)胞移植治療。在中國(guó)，輸血和用去鐵胺治療地貧患者的費(fèi)用是極其昂貴的。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提出造血干細(xì)胞移植可能治愈地貧，但是這項(xiàng)技術(shù)要求高，費(fèi)用驚人，一般家庭難以承受。因此，地貧患兒的出生，對(duì)家庭、社會(huì)都會(huì)產(chǎn)生巨大的負(fù)擔(dān)，而在這些地區(qū)宣傳和開(kāi)展遺傳咨詢以及產(chǎn)前診斷來(lái)進(jìn)行預(yù)防是絕對(duì)必要的。桂西地區(qū)為地貧的廣西高發(fā)區(qū)，本研究的地貧分子流行病學(xué)數(shù)據(jù)初步明晰了桂西地區(qū)育齡人群常見(jiàn)基因型情況，有助于政府和醫(yī)療單位制定有效的地貧控制策略，有效避免重型地貧患兒的出生。

[1]Zheng CG，Liu M，Du J，et al.Molecular spectrum of α-and β-globin gene mutations detected in the population of Guangxi Zhuang Autonomous Region，People′s Republic of China[J].Hemoglobin，2011，35(1):28-39.

[2]鄧國(guó)生，羅宇迪，張寧．玉林地區(qū)地貧基因缺失和點(diǎn)突變分布的探討[J]．中華全科醫(yī)學(xué)，2011，9(1)：122-123．

[3]蒲濱．欽州市α-地貧基因診斷結(jié)果回顧性分析[J]．社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2013，11(12)：57-58．

[4]余永雄，黃麗，陳唯．梧州婚配群體的α地貧攜帶者篩查與基因診斷分析[J]．重慶醫(yī)學(xué)，2012，41(10)：1002-1003．

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[8]盧秋維．南寧市育齡人群地貧篩查與產(chǎn)前診斷研究[J]．廣西醫(yī)學(xué)，2010，32(7)：869-870．

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Genotype distribution of population screening for thalassemia prenatal in western area of Guangxi*

CHENLi-kun1，WEIGuo-kai1，CHENXiang-ren1，HUANGLi-mei1，LIAOZhen-yi1，WANGJun-li2△,WEIGui-jiang2

(1.YoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise,Guangxi533000,China；2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofYoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise,Guangxi533000,China)

Objective To investigate gene carrying rate,genotype and distribution characteristics of population screening for thalassemia prenatal in western area of Guangxi.Methods Relevant data of population screening for thalassemmia from 2012 to 2013 in Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities,People′s Hospital of Baise City and Maternity and Child Care Hospital of Baise City were analyzed retrospectively,including blood routine examination，hemoglobin electrophoresis,thalassemia gene inspection.Results Data of 1 718 cases (859 couples) screening thalassemia were collected，there were 651 persons carrying thalassemia gene，the total incidence rate was 37.90%，including α-thalassemia 347 cases(20.20%)，β-thalassemia 304 cases(17.70%)，α-thalassemia complex β-thalassemia 54 cases(3.14%).A total of 53 couples with high risk who were found to carry the same α or β-thalassemia gene，with the incidence rate as 6.17%.Conclusion Thalassemmia gene carrier rate of persons accepted prenatal screen in western area of Guangxi is nearly 40%，most of α-thalassemia genotypes are αα / -- SEA and αα/-α3.7，the proportion was 53.03% and 15.27%,most of β-thalassemia genotypes are β17N/N and β41-42M/N.

western area of Guangxi； childbearing age of persons; thalassemia； genotypes

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160212)；廣西醫(yī)療衛(wèi)生重點(diǎn)科研課題(2012085)；2014年自治區(qū)級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃立項(xiàng)項(xiàng)目(201410599012)。

陳麗坤，女，本科在讀，主要從事珠蛋白生成障礙性貧血分子流行病學(xué)研究。

△通訊作者，E-mail:13907768146@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.002

A

1672-9455(2015)10-1342-03

2014-09-19

2015-01-24)