血推片檢測(cè)對(duì)乙二胺四乙酸二鉀鹽依賴(lài)性血小板假性減少癥的臨床意義

茅俊翔，茅 蔚(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200001)

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血推片檢測(cè)對(duì)乙二胺四乙酸二鉀鹽依賴(lài)性血小板假性減少癥的臨床意義

茅俊翔，茅 蔚△(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200001)

目的 探討乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)誘導(dǎo)血小板聚集的原因并加以糾正，為臨床提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。方法 采用邁瑞B(yǎng)C-5800全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀對(duì)2012年1月至2014年10月該院門(mén)診患者標(biāo)本中的血小板計(jì)數(shù)低于100×109/L的標(biāo)本進(jìn)行人工推片染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)存在血小板聚集現(xiàn)象的標(biāo)本33例。結(jié)果 33例EDTA依賴(lài)性血小板減少癥(PTCP)患者改用枸櫞酸鈉抗凝，綜合血涂片檢查，血小板假性減少全部得到糾正。結(jié)論 EDTA-PTCP的標(biāo)本僅憑儀器檢測(cè)無(wú)法與真正血小板減少的標(biāo)本進(jìn)行區(qū)分，必須進(jìn)行人工推片鏡檢，并用枸櫞酸鈉抗凝重新檢測(cè)加以糾正。

血小板聚集； EDTA-K2抗凝； 枸櫞酸鈉抗凝

目前全血細(xì)胞分析檢測(cè)已經(jīng)全面使用各種自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICSH)于1993年提出把乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA-K2)作為血細(xì)胞分析的最佳抗凝劑，因其對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響很小，被臨床廣泛使用。但EDTA-K2有時(shí)也會(huì)導(dǎo)致血小板聚集，使自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)血小板時(shí)出現(xiàn)的結(jié)果假性減低，稱(chēng)為EDTA依賴(lài)性血小板減少癥(EDTA-PTCP)[1]。本組在臨床檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)存在少數(shù)的EDTA-PTCP標(biāo)本，在人工推片染色鏡檢時(shí)可以發(fā)現(xiàn)有明顯的血小板聚集現(xiàn)象，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年1月至2014年10月該院門(mén)診患者全血細(xì)胞標(biāo)本共298 634例，對(duì)其中血小板計(jì)數(shù)低于100×109/L的標(biāo)本進(jìn)行人工推片染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)存在血小板聚集現(xiàn)象的標(biāo)本33例，其中男13例，女20例，年齡26～79歲。

1.2 儀器與試劑 (1)邁瑞公司生產(chǎn)的BC-5800全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，原廠配套試劑及質(zhì)控品。(2)EDTA-K2(1.5 mg抗凝全血1 mL)和枸櫞酸鈉抗凝管(1∶9抗凝)(浙江拱東醫(yī)療科技有限公司)[2]。(3)瑞氏-姬姆薩染色液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。(4) Axio Scope A1顯微鏡(蔡司公司)。

1.3 方法 (1)邁瑞B(yǎng)C-5800使用原廠配套試劑及質(zhì)控品，按說(shuō)明書(shū)提供的標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測(cè)質(zhì)控品，結(jié)果均在允許范圍內(nèi)。(2)全血細(xì)胞標(biāo)本檢測(cè)使用EDTA-K2抗凝的血標(biāo)本，抽取2 mL全血，充分與抗凝劑混勻，將EDTA-K2抗凝的血標(biāo)本按標(biāo)準(zhǔn)操作流程上機(jī)檢測(cè)。(3)對(duì)血小板計(jì)數(shù)低于100×109/L的標(biāo)本進(jìn)行人工推片，血膜應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可分[3]。瑞氏-姬姆薩染色后用油鏡(×1 000倍)觀察血小板分布情況，如發(fā)現(xiàn)存在血小板聚集現(xiàn)象則再次抽取患者血液，EDTA-K2和枸櫞酸鈉抗凝血各1管，分別上機(jī)檢測(cè)并推片。

2 結(jié) 果

2.1 枸櫞酸鈉與血液抗凝比為1∶9，將枸櫞酸鈉抗凝管的血小板結(jié)果乘以1.1為準(zhǔn)確結(jié)果[3]。EDTA-K2抗凝和枸櫞酸鈉抗凝結(jié)果進(jìn)行比較，分別為57 19.68×109/L和178 68.35×109/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 同一患者使用2種抗凝劑的血液樣本，分別推片染色鏡檢。EDTA-K2抗凝血推片可見(jiàn)血小板聚集現(xiàn)象；枸櫞酸鈉抗凝血推片的血小板無(wú)明顯聚集現(xiàn)象。見(jiàn)圖1、2。

圖1 EDTA-K2抗凝血推片

圖2 枸櫞酸鈉抗凝血推片

3 討 論

EDTA-K2作為血細(xì)胞分析的最佳抗凝劑，其抗凝機(jī)制是與血液中凝血因子Ⅳ(鈣離子)結(jié)合成螯合物，從而使其失去凝血作用，阻止血液凝固。因其對(duì)血細(xì)胞形態(tài)影響較小，被臨床廣泛使用。但EDTA-K2有時(shí)也會(huì)導(dǎo)致血小板聚集，造成自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)血小板時(shí)出現(xiàn)假性減低的結(jié)果，稱(chēng)為EDTA-PTCP，但患者臨床上并無(wú)血小板減低的癥狀。雖然其發(fā)生率很低，國(guó)外有研究報(bào)道為0.07%～1%，本組結(jié)果顯示為0.011%，但卻極易致使臨床出現(xiàn)誤診、誤治[4]。因此建立必要的人工推片鏡檢制度，對(duì)發(fā)現(xiàn)EDTA-PTCP具有重要的臨床意義。

BC-5800血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板的原理是采用電阻抗法，根據(jù)血細(xì)胞相對(duì)非導(dǎo)電性質(zhì)懸浮在電解質(zhì)溶液中的細(xì)胞顆粒,通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)可引起電阻的變化為基礎(chǔ)，對(duì)血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。血小板數(shù)量由血小板直方圖推導(dǎo)，在紅細(xì)胞/血小板計(jì)數(shù)池中計(jì)數(shù)2～20 fL的顆粒，再用電子擬合曲線擬合出0～70 fL范圍的所有血小板數(shù)量。因此如果出現(xiàn)EDTA-PTCP，聚集的血小板體積便會(huì)超出儀器計(jì)數(shù)范圍，從而使儀器不將其計(jì)數(shù)為血小板，引起報(bào)告結(jié)果的假性減低。因此EDTA-PTCP標(biāo)本會(huì)在血小板直方圖上出現(xiàn)翹尾等異常情況，但是最后的確定只有通過(guò)人工推片鏡檢,才能發(fā)現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象。

有學(xué)者認(rèn)為EDTA-PTCP形成的主要原因是與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)，EDTA-K2可導(dǎo)致血小板活化，從而改變血小板膜表面某種隱匿性抗原結(jié)構(gòu)，與存在血漿的自身抗體結(jié)合，激活磷脂酶A2(PLA2)、磷脂酶C(PLC)、花生四烯酸(AA)、ADP、5-TH等活性物質(zhì)。這些活性物質(zhì)能活化血小板纖維蛋白原受體，促進(jìn)血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán)，從而出現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象[5]。但是絕大多數(shù)情況下都無(wú)法與具體疾病建立聯(lián)系，可見(jiàn)于健康者，也可伴發(fā)某些疾病(如癌癥、自身免疫性疾病等)[6]。而臨床如果收到血小板減低的報(bào)告，極其可能會(huì)導(dǎo)致誤診、誤治。本組1例患者(女，36歲)在其他醫(yī)院診斷為血小板減低，但本組結(jié)果顯示無(wú)任何血小板減低的表征(如皮下出血點(diǎn)增多等)，凝血功能也正常，并不需要進(jìn)行相關(guān)治療。使用枸櫞酸鈉作為抗凝劑則不會(huì)引起血小板聚集，故在人工推片鏡檢后如發(fā)現(xiàn)血小板聚集現(xiàn)象，應(yīng)采用枸櫞酸鈉抗凝(但需嚴(yán)格控制抽血量，保證1∶9的比例)檢測(cè)血小板后，按照結(jié)果乘以1.1校正可以反映患者的真實(shí)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果[7-8]。

雖然自動(dòng)血細(xì)胞分析儀已經(jīng)承擔(dān)了全血細(xì)胞分析標(biāo)本的檢測(cè)工作，但是對(duì)于血小板異常減低的情況還是不能完全依賴(lài)儀器[9]。EDTA-PTCP的發(fā)現(xiàn)就來(lái)自人工推片鏡檢，這是任何儀器無(wú)法取代的，雖然其臨床發(fā)生率極低，但是一旦漏檢就可能造成臨床誤診、誤治，給患者帶來(lái)嚴(yán)重的身體傷害和經(jīng)濟(jì)損失，也容易導(dǎo)致醫(yī)療糾紛。所以建立全血細(xì)胞分析標(biāo)本的人工推片復(fù)檢規(guī)則是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的重要工作。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.11.041

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1672-9455(2015)11-1597-02

2014-12-20

2015-02-18)

△通訊作者，E-mail：maowei@renji.com。