無糖型黃疸茵陳顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王 帆，孫 巖，楊玉華

蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730046

黃疸茵陳顆粒由茵陳、黃芩、大黃、甘草4味中藥組成，具有保肝、退黃疸、增強(qiáng)免疫力的功效，臨床用于治療急、慢性黃疸型傳染性肝炎［1］。為了更好地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，本試驗(yàn)采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定該制劑中黃芩苷的含量，為該制劑的質(zhì)量控制提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 藥物與試劑 黃芩苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110715-200212)；黃疸茵陳顆粒(無糖型，蘭州佛慈制藥股份有限公司提供，批號(hào)：201301)。甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2 試驗(yàn)儀器 SHIMADZU Prominence高效液相色譜儀；Luna 5u C18100A型色譜柱(美國(guó)菲羅門公司)；SK250HP型超聲波儀 (上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司)；SHZ-DШ型循環(huán)水式真空泵 (鞏義市英峪予華儀器廠)；XS205型十萬分之一電子天平；UPH-I-10T純化水系統(tǒng)(成都超純科技有限公司)。

1.3 色譜條件 色譜柱為Phenomenex DDS-C18(5μm，4.6 mm×150 mm)，甲醇 -0.7%磷酸溶液 (46∶54)，檢測(cè)波長(zhǎng)為 276 nm，柱溫 30℃，流速1mL/min，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于3000。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 測(cè)波長(zhǎng)：據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2］，黃芩苷在檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm處有最大吸收；經(jīng)過試驗(yàn)驗(yàn)證，認(rèn)為黃芩苷在276 nm處有最大吸收，且以276 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，分離效果較好。

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取2g，精密稱定，加70%乙醇40mL，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，濾液置100mL量瓶中，用70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆汉喜V入同一量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 取黃芩苷對(duì)照品(0.1572 mg/mL)溶液，精密量取5.0mL置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。制成黃芩苷為15.72μg/mL的對(duì)照品溶液并精密量取2.0，4.0，6.0，8.0mL置10mL容量瓶中，各加甲醇稀釋至刻度，搖勻。再從黃芩苷為15.72μg/mL的對(duì)照品溶液中，精密量取 2.0，4.0，6.0，8.0mL置 10mL容量瓶中，各加甲醇稀釋至刻度，搖勻。制得一系列不同濃度的黃芩苷對(duì)照品溶液。按上述色譜條件分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10μL，測(cè)定峰面積。求得回歸方程為：y=4649416x-6420，R=0.9998。結(jié)果表明黃芩苷對(duì)照品在0.0314～1.2576μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 取黃芩苷對(duì)照品溶液(0.01866 mg/mL)，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣量10μL。測(cè)定峰面積，結(jié)果RSD為0.37%，表明本法精密度較好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 按“3.3”項(xiàng)制備方法及色譜條件，取同一批供試品(批次3次)，制備6份供試品溶液，分別測(cè)定含量，其平均含量為4.5805 mg/g，RSD為2.48%。結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 按“3.3”項(xiàng)制備方法及色譜條件，對(duì)同一批供試品在不同間隔時(shí)間 0、0.5、1、2、3、4、5小時(shí)測(cè)定 7次，RSD=0.28%。結(jié)果表明供試品溶液在5小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn) 因本品黃芩苷含量較高，為節(jié)省標(biāo)準(zhǔn)品，樣品及溶劑減量加入進(jìn)行加樣回收率的測(cè)定，具體操作如下：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取0.15 g左右，共6份(批次3次，含量：4.5805mg/g)，精密稱定，各精密加入濃度為0.1572mg/mL的黃芩苷對(duì)照品溶液4 mL，加70%乙醇20mL，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，濾液置50mL量瓶中，用70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)匆汉喜V入同一量瓶中，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

回收率=[(測(cè)出黃芩苷量－樣品中黃芩苷量)／加入黃芩苷量]×100%

試驗(yàn)結(jié)果表明，本方法具有較好的準(zhǔn)確度。

表1 加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.9 樣品中黃芩苷的含量測(cè)定 為了確定黃疸茵陳顆粒(無糖型)中黃芩苷的含量限度，按“3.3”項(xiàng)制備方法及色譜條件，對(duì)10批黃疸茵陳顆粒(無糖型)樣品進(jìn)行了黃芩苷的含量測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 10批樣品的黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果 mg/袋

3 討論

通過對(duì)本品的各項(xiàng)檢測(cè)，證明在保證《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-中藥成方制劑》黃疸茵陳顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的同時(shí)，所增加的鑒別項(xiàng)目及含量測(cè)定方法也確認(rèn)可行，從而更好地保證了“黃疸茵陳顆粒(無糖型)”的產(chǎn)品質(zhì)量。在測(cè)試中我們經(jīng)過試驗(yàn)驗(yàn)證后認(rèn)為黃芩苷在276 nm處有最大吸收，且以276 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，分離效果較好。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991:173.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：85.