新生兒病房分離金黃色葡萄球菌耐藥性及耐消毒劑基因檢測

雷新云，金正江

（湖北省婦幼保健院，湖北 武漢 430070）

金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，SA）分布廣泛，毒力強，易引起新生兒各種感染。一旦發生感染，由于新生兒自身原因，多種抗菌藥物使用受限，除β-內酰胺類，可選用藥物不多。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA）對β-內酰胺類、紅霉素類等多種抗菌藥物耐藥，該菌的出現給臨床治療帶來極大困難。因此，預防感染尤為重要，消毒劑的使用是有效的措施之一。近年來，不斷有文獻報道MRSA攜帶耐消毒劑基因，對多種消毒劑產生抗性，攜帶率各地區各有不同［1-2］。為了解本院新生兒病房SA的耐藥性及耐消毒劑的情況，本研究對新生兒病房送檢標本分離的SA耐藥譜進行了分析，并對其是否攜帶耐消毒劑基因qacA/B進行了檢測，現將結果報告如下。

1 對象與方法

1.1 菌株來源 2013年1—12月新生兒科住院新生兒送檢標本分離的225株SA，標本類型包括:痰、尿、胃液、糞便等，剔除同一患者重復菌株。

1.2 細菌鑒定及藥敏試驗 細菌鑒定及藥敏試驗采用法國生物梅里埃公司VITEK2 Compact全自動鑒定系統。試劑采用系統配套的GP卡和GP67卡。質控菌株為SA ATCC29213，頻率為每周一次。

1.3qacA/B基因檢測 采用聚合酶鏈反應（PCR）方法對耐消毒劑基因qacA/B進行檢測，特異性引物 為 5’-GCAGAAAGTGCAGAGTTCG-3’和 5’-CCAGTCCAATCATGCCTG-3’，產物長度為361 bp，PCR體系參數設置為:25μL PCR反應體系包括10×PCR緩沖液2.5μL，DNTP2.0μL（2.5 mmol/L），引物 各 2.5 μL （10μmol/L），無 菌 去 離 子 水12.7μL，DNA模板2.5μL，0.3μL TaqDNA聚合酶。96℃預變性3 min，然后94℃20 s，53℃20 s，72℃20 s，循環25個周期，最后72℃5 min［3］。

2 結果

2.1 標本來源 225株SA標本來源以呼吸道分泌物為主，占72.44%；20株 MRSA中，呼吸道分泌物占65.00%。見表1。

表1 225株SA標本來源分布Table 1 Specimen distribution of 225 S.aureusisolates

2.2 藥敏試驗 225株SA中，MRSA20株（占8.89%），甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（methicillin-sensitiveStaphylococcusaureus，MSSA）205株（占91.11%）。耐藥率見表2。

表2 225株SA對常用抗菌藥物的耐藥率（%）Table 2 Resistant rates of 225 S.aureus isolates to commonly used antimicrobial agents（%）

2.3qacA/B基因檢測 225株SA中21株攜帶qacA/B基因，陽性率為9.33%。其中MRSA3株，陽性率為15.00%（3/20）；MSSA18株，陽性率為8.78%（18/205），兩者比較差異有統計學意義（χ2＝148.84，P＜0.01）。PCR電泳圖見圖1。

圖1 qacA/B基因檢測電泳圖Figure 1 Electrophoresis map of PCR product of qacA/B gene

3 討論

革蘭陽性球菌在新生兒細菌感染中占重要地位，其細菌譜分布中SA居首位［4］。SA是一種需氧或兼性厭氧革蘭陽性球菌，可存在于外界環境及人體口腔、鼻咽等部位，是人類化膿性感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿性感染，也可引起肺炎、假膜性腸炎、心包炎等，甚至可引起敗血癥、膿毒癥等全身感染。本研究中，從標本來源分析，呼吸道分泌物占72.44%，可見在SA引起的新生兒感染中，呼吸道感染占主要地位；其次為胃腸道感染，糞便標本占1.78%。在局部感染中，臍部、眼及其他部位的化膿性分泌物共占25.33%。新生兒抵抗力差，如消毒隔離措施不到位，護理不當，極易引起臍部等部位的化膿性感染，一旦感染需及時合理選用抗菌藥物，采取有效護理措施，防止感染癥狀向全身蔓延。

本研究中，MRSA檢出率為8.89%，低于相關文獻［5-6］報道，可能存在地區及人群之間的差異。MRSA的耐藥性與青霉素結合蛋白2a（penicillin-binding protein 2a，PBP2a）有關［7］。PBP2a由 mecA 基因編碼，具有高度保守性，mecA基因檢測陽性即為MRSA。但近年來有文獻［8］報道，MRSA菌株中并非均攜帶mecA基因，說明可能還存在其他耐藥機制，值得關注。本研究中，SA對紅霉素、克林霉素、四環素、慶大霉素、環丙沙星及復方磺胺甲口惡唑的耐藥率高低不等，但MRSA的耐藥率普遍高于MSSA。左氧氟沙星、莫西沙星、替加環素、萬古霉素、利奈唑胺及呋喃妥因對所有SA均顯示出良好的抗菌活性，敏感率均為100%。因此，在MRSA感染危重患兒中，萬古霉素可作為經驗治療的首選。但隨著萬古霉素的應用越來越多，近年來不斷有萬古霉素中介SA和異質性萬古霉素耐藥SA的報道，本研究中雖尚未發現，但也應引起警惕，注意合理用藥，嚴防該類菌株的出現。

SA由于其毒力強，感染廣泛及耐藥嚴重而一直受到人們的關注。近年來，由于各種消毒劑在臨床被廣泛使用，SA對消毒劑的抗性及耐消毒劑機制的研究也日益受到各界的重視。SA對消毒劑的抗性主要與外排泵系統有關，由質?；蛉旧w上的相關蛋白基因編碼，種類繁多，作用機制均為借助質子泵的動力將胞內抗菌物質排出胞外，使其達不到有效抗菌濃度而產生耐藥。季胺類消毒劑基因（qac）在SA耐消毒劑機制中發揮重要作用，qac基因由于在親脂性消毒劑外排機制中發揮重要作用而得名，編碼蛋白型的外排系統。目前qac基因家族已發現有10余種，其中qacA/B基因存在于葡萄球菌的質粒中。qacA基因與qacB基因雖然作用底物不同，但結構十分相似，相差僅為幾個核苷酸，普通PCR方法無法區分［9］。因此，本研究中參考有關文獻設計通用引物對其進行檢測。結果顯示，225株SA中檢出qacA/B基因21株，陽性率為9.33%，其中MRSA菌株3株，陽性率為15.00%，MSSA菌株18株，陽性率為8.78%，結果與有關報道［10］相似。研究表明，MRSA菌株的耐消毒劑機制可能與其耐藥機制協同發揮作用，本研究中是否存在該現象有待進一步研究。

總之，新生兒SA感染中，在關注耐藥性的同時應關注其對消毒劑的抗性。在醫院感染控制中應以預防為主，加強消毒管理，提高手衛生依從性，加強新生兒基礎疾病護理，合理使用抗菌藥物和消毒劑，切實有效做好預防感染的發生或流行，保障新生兒生命健康安全。

［1］姜愛英，應俊，管瑜，等.臨床分離的金黃色葡萄球菌mecA和qacA/B基因檢測［J］.中華醫院感染學雜志，2010，20（9）:1212-1215.

［2］陳迎曉，劉俊，李小四，等.金黃色葡萄球菌耐消毒劑基因及抗生素耐藥相關基因檢測［J］.中國微生態學雜志，2012，24（12）:1103-1105.

［3］Noguchi N，Suwa J，Narui K，et al.Susceptibilities to antiseptic agents and distribution of antiseptic-resistance genes qacA/B and smr of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated in Asia during 1998 and 1999［J］.J Med Microbiol，2005，54（Pt6）:557-565.

［4］王維鵬，金正江.新生兒葡萄球菌屬感染及防治對策［J］.中華醫院感染學雜志，2006，16（11）:1250-1251.

［5］吳旭琴，馮薇，喬美珍，等.2007—2010年金黃色葡萄球菌臨床分離與耐藥變遷［J］.中國感染控制雜志，2012，11（1）:55-58.

［6］賈云霞，劉興莉，彭旭華，等.兒科重癥監護室病原菌分布及其耐藥性［J］.中國感染控制雜志，2012，11（3）:211-213，216.

［7］王輝，陳宏斌.甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌的實驗室診斷［J］.中國感染與化療雜志，2011，11（6）:420-422.

［8］李曉芳，范昕建，過孝靜.金黃色葡萄球菌耐藥機制的研究［J］.四川大學學報（醫學版），2006，37（3）:365-368.

［9］盧中一，陳勇，陳偉，等.金黃色葡萄球菌對消毒劑的抗性及其流行病學研究進展［J］.中國感染控制雜志，2014，13（7）:442-446.

［10］周庭權，黃文祥，賈蓓，等.金黃色葡萄球菌耐消毒劑基因qacA的流行病學研究［J］，中國感染與化療雜志，2009，9（4）:283-285.