復(fù)方中草藥肉雞飼料添加劑的藥效學(xué)研究

范廣璞+楊猛

摘要：為了給復(fù)方中草藥肉雞飼料添加劑的研制奠定藥效學(xué)基礎(chǔ)，依據(jù)單味中草藥對肉雞規(guī)模化養(yǎng)殖常見病原菌的抑菌和飼喂效果，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制出3劑中草藥復(fù)方制劑，研究了3劑中草藥復(fù)方制劑的免疫學(xué)試驗，結(jié)果顯示配制的3劑中草藥復(fù)方制劑都能夠明顯提高肉雞機體的免疫機能。免疫學(xué)綜合試驗結(jié)果表明，復(fù)方制劑Ⅲ效果最佳，最終確定中草藥復(fù)方Ⅲ進行飼喂試驗。

關(guān)鍵詞：中草藥；飼料添加劑；藥效學(xué)

中圖分類號： S816.75文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）02-0198-03

收稿日期：2014-04-17

基金項目：江蘇省高校科研成果產(chǎn)業(yè)化推進項目（編號：JHZD08-47）。

作者簡介：范廣璞（1968—），江蘇淮安人，副教授，主要研究方向為藥物微生物技術(shù)。E-mail：spxyym80@163.com。

隨著肉雞飼養(yǎng)方式從散養(yǎng)型向規(guī)模化轉(zhuǎn)變，養(yǎng)殖密度增加1倍，發(fā)病率會增加4倍以上。為保障肉雞的存活率，飼料添加劑的使用量逐漸增加，在為肉雞養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展作出巨大貢獻的同時，也衍生了不少問題。飼料添加劑含有抗生素類藥物，可以提高肉雞的存活率和產(chǎn)量，但雞肉中藥物殘留的提高，直接危害了人類健康[1-3]。隨著生活水平的提高，人們健康保健意識顯著增強，消費者對雞肉的品質(zhì)和安全性等方面的要求顯著提高，低脂藥殘少的雞肉成為消費者的首選。

開發(fā)一種既能提高肉雞存活率和產(chǎn)量，又能改善雞肉品質(zhì)的飼料添加劑迫在眉睫，中草藥無毒副作用、無抗藥性、無污染、無殘留，多為常見藥物，價格低廉，優(yōu)于抗生素，因而成為人們研究開發(fā)的首選對象[4-8]。本研究在單味中草藥對肉雞養(yǎng)殖常見菌抑菌和飼喂研究的基礎(chǔ)上，依據(jù)中藥配伍的原理，配制3劑中草藥復(fù)方制劑，并對其進行免疫學(xué)試驗，篩選出藥效最好的中草藥復(fù)方制劑，進行飼喂試驗，旨在為研制應(yīng)用于肉雞養(yǎng)殖業(yè)的復(fù)方中草藥肉雞飼料添加劑奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗中草藥復(fù)方

根據(jù)單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制出3劑中草藥復(fù)方制劑，分別為制劑Ⅰ、制劑Ⅱ、制劑Ⅲ[9]。

1.2試驗動物

昆明種小白鼠、家兔、雞。

1.3試劑與儀器

牛津杯、瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂培養(yǎng)基、無菌營養(yǎng)肉湯、抗雞紅細胞抗體、蒸餾水、無菌生理鹽水、小牛血清淋巴細胞分層液、0.8%戊二醛溶液、蘇木精和伊紅染色液、培養(yǎng)皿 TDL-40B 低速臺式水平離心機、低溫冰箱、電熱恒溫水浴箱、OLYMPUS顯微鏡等。

1.4方法

1.4.1抗雞紅細胞抗體的制備選擇體重量2～3 kg的健康雄性家兔，用Hanks液洗過的壓積雞紅細胞進行免疫。每日背部皮下注射50%雞壓積紅細胞1次，連續(xù)5次，注射量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL；7 d后耳靜脈注射50%的壓積雞紅細胞懸液1 mL，連續(xù)3 d，用96孔反應(yīng)板測定抗體效價，當抗體效價開始下降時，耳靜脈注射50%的壓積紅細胞懸液2 mL加強免疫1次，3 d后開始測定抗體效價，當效價達1 ∶4 096時捕殺，采血、分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆肹10]。

1.4.2中草藥飼料添加劑飼喂試驗試驗組小白鼠飼喂含1%中草藥飼料添加劑的飼料，對照組小白鼠飼喂正常的飼料，連續(xù)飼喂7 d，分別對試驗組和對照組小白鼠Ea花環(huán)形成率、EAC花環(huán)形成率、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、紅細胞C3b受體花環(huán)形成率和IC花環(huán)形成率等免疫指標進行測定[10]。

1.4.3測定方法Ea花環(huán)形成率的測定：按林清華的方法[11]；EAC花環(huán)形成率的測定、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的測定、中性粒細胞功能的測定，按何昭陽等的方法[12]；紅細胞免疫功能的測定：按朱立平等的方法[13]測定紅細胞C3b受體花環(huán)形成率和紅細胞IC花環(huán)形成率。

1.5統(tǒng)計與分析

試驗值以平均數(shù)±標準差（x±s）表示，并采用SPSS 17.0進行單因素方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1中草藥飼料添加劑對小白鼠Ea花環(huán)率的影響

2.2中草藥飼料添加劑對小白鼠EAC花環(huán)形成率的影響

從表2可以看出，飼喂后10 d，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ試驗組小白鼠EAC玫瑰花環(huán)形成率與對照差異顯著，制劑Ⅲ試驗組與對照比較差異極顯著，制劑Ⅲ試驗組與制劑Ⅰ、制劑Ⅱ組比較差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ和制劑Ⅲ試驗組小白鼠EAC玫瑰花環(huán)形成率與對照差異顯著，各制劑試驗組間差異不顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。表2中藥飼料添加劑對小白鼠EAC玫瑰花環(huán)形成率的影響

處理EAC玫瑰花環(huán)率（%）10 d20 d30 d對照 12.050±1.682aA12.450±1.763bA 12.320±1.780a 制劑Ⅰ15.050±1.528bAB 14.785±1.248aA 13.617±1.491a 制劑Ⅱ15.796±1.426aAB14.869±1.236aA13.627±1.483a制劑Ⅲ18.326±2.236cB15.896±2.432aA13.323±1.681a

2.3淋巴細胞轉(zhuǎn)化率測定

從表3可以看出，飼喂10 d，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ試驗組小白鼠的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率與對照差異顯著，制劑Ⅲ試驗組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。表3中草藥飼料添加劑對小白鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響

處理淋巴細胞轉(zhuǎn)化率（%）10 d20 d30 d對照 52.520±3.543aA52.785±3.203bA57.785±2.858a制劑Ⅰ56.735±3.595bAB55.520±3.355aA53.570±3.508a制劑Ⅱ56.265±3.240bAB55.785±2.548aA53.858±2.580a制劑Ⅲ60.582±3.430cB56.510±2.436aA53.695±2.230aendprint

2.4中性粒細胞功能測定

由表4可知，飼喂10 d，制劑Ⅰ、Ⅱ試驗組小白鼠中性白細胞吞噬活性與對照差異顯著，制劑Ⅲ組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ、Ⅱ組差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠中性白細胞吞噬活性與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。

2.5紅細胞C3b受體花環(huán)率的測定

從表5可以看出，飼喂10 d，制劑Ⅰ試驗組、制劑Ⅱ試驗組小白鼠C3b受體花環(huán)形成率與對照差異顯著，制劑Ⅲ組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組比較差異顯著；20 d 時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠C3b受體花環(huán)形成率與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。表5中藥復(fù)方對小白鼠紅細胞C3b受體花環(huán)形成率

處理C3b花環(huán)形成率（%）10 d20 d30 d對照 8.735±1.798aA8.653±1.899bA8.893±1.471a制劑Ⅰ11.653±2.423bAB 11.520±2.630aA8.328±1.680a制劑Ⅱ11.381±1.932bAB11.450±1.652aA8.130±1.864a 制劑Ⅲ14.910±1.796cB 11.553±1.657aA9.800±1.675a

2.6紅細胞IC花環(huán)率的測定

從表6可以看出，飼喂10 d時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠IC花環(huán)形成率與對照差異顯著，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組與制劑Ⅲ組差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠IC花環(huán)形成率與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。

3結(jié)論

通過Ea花環(huán)形成率、EAC花環(huán)形成率、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率、紅細胞C3b受體花環(huán)形成率和IC花環(huán)形成率等免疫指標分析，結(jié)果表明，由金銀花等中草藥制成的小白鼠中草藥飼料添加劑能夠明顯促進小白鼠機體的免疫機能，復(fù)方制劑Ⅲ效果最佳。

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