冷凝集試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗對呼吸道肺炎支原體IgM抗體檢測的評價

季艷艷+楊正貴

[摘要] 目的 評價冷凝集試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗對診斷呼吸道肺炎支原體IgM抗體感染的臨床價值。 方法 收集我院呼吸內(nèi)科2012年12月～2013年10月共計100份診斷為呼吸道肺炎支原體感染患者的痰液標本。比較①酶聯(lián)免疫吸附試驗與冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性。②酶聯(lián)免疫吸附試驗與冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比。 結(jié)果 酶聯(lián)免疫吸附試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為95%、3%、97%、5%，冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為43%、39%、61%、57%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 酶聯(lián)免疫吸附試驗和冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比分別為95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%及43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 本研究認為酶聯(lián)免疫吸附試驗對呼吸道肺炎支原體IgM抗體敏感性、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比均明顯高于冷凝集試驗。

[關(guān)鍵詞] 冷凝集試驗；酶聯(lián)免疫吸附試驗；呼吸道肺炎支原體；IgM抗體

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）04-0107-03

[Abstract] Objective To evaluate the clinical value of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay in the diagnosis of respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody infection. Methods A total of 100 sputum samples of the patients diagnosed with respiratory tract mycoplasma pneumoniae infection in the respiratory medicine department of our hospital were collected. ①The true positive，false positive，true negative and false negative rates of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. ②The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value， positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. Results The true positive，false positive，true negative and false negative rates of enzyme-linked immunosorbent assay were 95%， 3%， 97% and 5% respectively and those of the cold agglutination test were 43%， 39%， 61% and 57% respectively， with statistically significant differences （P<0.05）. The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value， positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of enzyme-linked immunosorbent assay and cold agglutination test were 95%， 97%， 96%， 96.9%， 95.1%， 31.7%， 0.05% and 43%， 61%， 52%， 52.4%， 51.7%， 1.1%， 0.93%， respectively， with statistically significant differences（P<0.05）. Conclusion This study suggests that enzyme-linked immunosorbent assay has obviously higher sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value and positive likelihood ratio to respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody than cold agglutination test.

[Key words] Cold agglutination test； Enzyme-linked immunosorbent assay； Respiratory tract mycoplasma pneumoniae； IgM antibody

支原體是一類介于細菌與病毒之間、無細胞壁的微生物，易受環(huán)境變化而破壞，有研究統(tǒng)計[1]在確診的肺炎病例中，由肺炎支原體引起的肺炎占15%～20%，支原體通過飛沫傳入呼吸道，粘附上皮細胞表面神經(jīng)氨酸受體上，但支原體還可通過血行感染全身任何器官組織。支原體好發(fā)于晚秋，但無明顯的季節(jié)性[2]。人群對支原體普遍易感，學(xué)齡兒童由于呼吸系統(tǒng)發(fā)育不全，非常容易感染支原體，但近幾年疾病譜變化，成人感染支原體的比例逐步增高，因此，快速檢測支原體對臨床診斷有重要意義[3]。目前支原體感染的常用實驗室檢查手段為冷凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、PCR技術(shù)。但是由于PCR技術(shù)設(shè)備昂貴，且需要專業(yè)的技術(shù)人才，因此PCR法在臨床中使用較少，均可呈陽性反應(yīng)，對治療無指導(dǎo)意義。因此本研究的目的為評價冷凝集試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗對診斷呼吸道肺炎支原體IgM抗體感染的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

收集我院呼吸內(nèi)科2012年12月～2013年10月共計100份診斷為呼吸道肺炎支原體感染患者的痰液標本，肺炎支原體感染患者中男57例和女43例，年齡17～67歲，平均（39.8±25.7）歲。所有研究對象均簽定知情同意書、保密知情書，研究通過醫(yī)院倫理道德委員會的批準、核實。

1.2 入選標準

①就診時臨床資料、治療經(jīng)過完整。②呼吸道支原體感染的診斷符合中華醫(yī)學(xué)會呼吸內(nèi)科學(xué)分會關(guān)于呼吸道支原體感染的診斷與鑒別診斷[4]。③每個研究對象能配合護理人員，自愿參與本次研究。

1.3 排除標準

①入院時生命體征不平穩(wěn)的患者。②入院有嚴重肝腎功能不全、惡性腫瘤、自身免疫性疾病者，藥物有過敏、惡性心律失常者。

1.4 冷凝集試驗

在室溫下，配人紅細胞懸液（患者自身紅細胞與5倍生理鹽水進行配比），然后取試管10支，各加生理鹽水0.1 mL，血清0.1 mL加第1管，混勻后吸出0.1 mL至第2管，按上述的配比方法一直加至第9管，第10管作對照；每管加入人紅細胞懸液0.1 mL，在4℃的冰箱中放置1 h，陽性為出現(xiàn)紅細胞凝集，若加入37℃水浴后凝集消失則判定真陽性。當?shù)味却笥?∶32有參考意義。

1.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗

采用福建三明博峰生物科技有限公司提供的肺炎支原體IgM抗體試劑盒，操作及結(jié)果判斷按說明書進行。

1.6觀察指標

真陽性、假陽性、真陰性及假陰性敏感度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比。

1.7 評價指標

比較①酶聯(lián)免疫吸附試驗與冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性。②酶聯(lián)免疫吸附試驗與冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

將資料錄入SPSS18.0軟件。所有計量資料符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標準差（x±s）描述，兩組均數(shù)的比較使用t檢驗。計數(shù)資料采用頻數(shù)描述，用χ2檢驗法。三組間比較采用ANOVA單因素方差分析，方差齊者用LSD法檢驗，方差不齊者用Games-Howenll法。多因素分析：將單因素分析中P<0.05的變量納入Logistic回歸分析，計算優(yōu)勢比及95%可信區(qū)間。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

肺炎支原體（M.Pneumonia）是人類支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主，有時并發(fā)支氣管肺炎，稱為原發(fā)性非典型性肺炎。主要經(jīng)飛沫傳染，潛伏期2～3周，發(fā)病率以青少年最高。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀，若有也只是頭痛、咽痛、發(fā)熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個別死亡報道。一年四季均可發(fā)生，但多在秋冬時節(jié)。肺炎支原體也是誘發(fā)哮喘的重要病原體，可引起肺外器官病變，如腦炎、血液病、關(guān)節(jié)炎或多器官功能衰竭。支原體肺炎的病理變化主要為急性氣管-支氣管炎和間質(zhì)性肺炎，支氣管黏膜有中性粒細胞浸潤，肺泡內(nèi)可含少量滲出液，肺泡壁和間隔中有中性粒細胞浸潤[5-8]。肺炎支原體的致病首先通過其頂端結(jié)構(gòu)粘附在宿主細胞表面，并伸出微管插入胞內(nèi)吸取營養(yǎng)、損傷細胞膜，繼而釋放出核酸酶、過氧化氫等代謝產(chǎn)生引起細胞的溶解、上皮細胞的腫脹與壞死。誘發(fā)機體產(chǎn)生的抗體也可能參與了上述病理損傷。肺炎支原體感染后癥狀較輕，發(fā)病初期有乏力、咽痛、肌肉酸痛、惡心等，熱度不一，2～3 d后出現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀，發(fā)熱可持續(xù)2～3周，可有肺膿腫、支氣管擴張、閉塞性細支氣管炎，可聞及干性或濕性啰音。支原體肺炎可并發(fā)各種肺外并發(fā)癥，如自身免疫性溶血性貧血、腦脊膜炎、心包炎、結(jié)節(jié)性紅斑等皮膚黏膜損害。X線上肺部可表現(xiàn)斑點片狀模糊影，可侵犯至多葉，伴肺門淋巴結(jié)腫大。MP感染呈散在發(fā)病，一年四季均可發(fā)病。研究指出肺炎支原體感染臨床癥狀不明顯，隱性感染較多，癥狀不典型，僅靠臨床癥狀難以診斷[9]。因此，診斷須依據(jù)實驗室檢查。

本研究發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為95%、3%、97%、5%，冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為43%、39%、61%、57%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。酶聯(lián)免疫吸附試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比分別為95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%；冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比和陰性擬然比分別為43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。即本次研究認為酶聯(lián)免疫吸附試驗對呼吸道肺炎支原體IgM抗體敏感性、特異度、準確度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性擬然比均明顯高于冷凝集試驗。

首先，我們考慮冷凝集試驗雖然方法簡單，但其敏感性和特異性差。研究發(fā)現(xiàn)[10-13]它是一種非特異性血清學(xué)反應(yīng)，腺病毒感染、流感、肝硬化、自身免疫性溶血性貧血、螺旋體病均可產(chǎn)生假陽性。所以冷凝集試驗檢測抗體確診較困難[14]。而酶聯(lián)免疫吸附試驗應(yīng)用吸附于載體表面的抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成免疫復(fù)合物，與酶標記的第二抗體結(jié)合后形成免疫反應(yīng)，借助酶對底物發(fā)生降解作用后顯現(xiàn)的顏色反應(yīng)進行判斷。在本研究中表現(xiàn)很高的特異性和敏感性。有學(xué)者對肺炎支原體感染患者進行酶聯(lián)免疫吸附試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在發(fā)病后4～7周依靠此方法即可檢出肺炎支原體感染。而且有學(xué)者還指出該抗體還可作為亞急性感染的補充診斷，陽性率與病情呈正比。但是我們要注意到肺炎支原體感染早期（1～3 d）患者體內(nèi)還未產(chǎn)生足夠被檢測出的抗體，所以酶聯(lián)免疫吸附試驗不能做到早期診斷。

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（收稿日期：2014-11-13）