腎癌組織EphA2、E-cadherin表達及其與腎癌臨床病理特征的關系

張俊霞，徐金升，白亞玲，崔立文，張慧然，張勝雷(河北醫科大學第四醫院，石家莊050011)

腎癌組織EphA2、E-cadherin表達及其與腎癌臨床病理特征的關系

張俊霞，徐金升，白亞玲，崔立文，張慧然，張勝雷(河北醫科大學第四醫院，石家莊050011)

摘要：目的探討Eph受體酪氨酸激酶A2(EphA2)及E-鈣黏蛋白(E-cadherin)在腎癌組織中的表達及其與腎癌臨床病理特征的關系。方法選擇52例腎癌患者的手術標本，采用免疫組化SP法檢測腎癌組織EphA2及E-cadherin蛋白的表達，計算每張切片的陽性細胞百分數及HSCORE分值。分析EphA2表達、E-cadherin表達與患者臨床病理特征(包括年齡、性別、TNM分期、腫瘤直徑、病理類型)的關系，計算3年生存率，應用COX比例風險模型分析腎癌患者預后影響因素。結果腎癌組織中EphA2蛋白高表達率為71.2%，E-cadherin蛋白低表達率為76.9%。腫瘤直徑≥5 cm者的EphA2蛋白高表達率高于直徑<5 cm者(P<0.05)，腫瘤直徑≥5 cm者E-cadherin蛋白低表達率高于直徑<5 cm者(P<0.05)。EphA2蛋白高表達是腎癌患者預后的獨立影響因素(P<0.05)。結論腎癌組織中EphA2蛋白表達增加、E-cadherin蛋白表達降低，EphA2蛋白高表達是腎癌患者預后的獨立影響因素。

關鍵詞：腎癌；Eph受體酪氨酸激酶A2；E-鈣黏蛋白；預后

腎癌是泌尿系統常見的惡性腫瘤，容易發生復發及轉移[1]。Eph家族是一類新發現的酪氨酸蛋白激酶受體，在腫瘤發生和發展中具有重要作用。Eph受體酪氨酸激酶A2(EphA2)是Eph家族中最早發現的受體，通過酪氨酸蛋白激酶途徑調控細胞的生長和分化，在腫瘤的發生發展過程中發揮重要作用。E-鈣黏蛋白(E-cadherin)作為另一類重要的細胞黏附分子，與EphA2協同定位于細胞間的接觸位點，共同調控細胞的生長及分化[2]。研究發現，卵巢癌[3]、結腸癌[4]、乳腺癌[5]等腫瘤組織中EphA2及E-cadherin蛋白的表達異常。目前，對腎癌患者EphA2及E-cadherin蛋白的表達及其與預后的關系尚不清楚。為此我們觀察了52例腎癌患者癌組織中EphA2、E-cadherin蛋白表達，現分析結果，探討EphA2、E-cadherin蛋白表達與腎癌患者預后的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2005年8月～2010年8月河北醫科大學第四醫院52例行腎癌根治術患者的癌組織標本，均經術后病理確診。患者男29例、女23例，年齡30～78(56.58±11.54)歲。術后均未接受化療或放療。標本于術中離體30 min內取材，經10%甲醛溶液固定，石蠟包埋、切片備用。本研究經河北醫科大學第四醫院倫理委員會批準，患者均簽訂知情同意書。

1.2相關指標觀察

1.2.1癌組織EphA2及E-cadherin蛋白表達采用免疫組化SP法檢測。石蠟切片經抗原修復和血清封閉后，滴加1∶1 000抗EphA2抗體或1∶130抗E-cadherin抗體，4 ℃過夜，次日滴加1∶200生物素標記的二抗及鏈霉菌抗生物素2過氧化物酶，DAB顯色。用已知EphA2蛋白陽性染色的乳腺癌石蠟切片為陽性對照，E-cadherin陽性染色的正常胃組織石蠟切片為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。EphA2(clone C-20)兔抗人多克隆抗體購于Santa Cruz公司；E-cadherin(clone Hecd-1)鼠抗人單克隆抗體購于Zymed Laboratories公司；免疫組織化學二抗試劑盒(SP9000)購于北京中杉生物技術有限公司。結果判定：EphA2和E-cadherin免疫組化染色以細胞質/細胞膜中出現棕黃色顆粒為陽性。由兩位有經驗的病理醫師采用雙盲法獨立評估結果，每張切片至少觀察200個目的細胞的免疫反應情況，于高倍鏡400倍視野下對目的細胞進行染色強度評分，未著色為陰性計0分，淺黃色為弱陽性計1分，黃色為陽性計2分，黃褐色為強陽性計3分；然后計算每張切片的陽性細胞百分數，陽性細胞百分數=(≥1分的細胞數量/觀察細胞總數)×100%。最后按文獻報道的方法[6,7]計算每張切片的HSCORE分值，HSCORE=(i+1)π，其中i和π分別代表染色強度評分及該陽性細胞百分數。以HSCORE分值>100%為高表達，≤100%為低表達。

1.2.2EphA2、E-cadherin蛋白表達與腎癌臨床病理特征及預后的關系分析EphA2、E-cadherin表達與患者臨床病理特征(包括年齡、性別、TNM分期、腫瘤直徑、病理類型)的關系。術后每3個月電話隨訪1次，共隨訪3年，計算3年生存率，分析影響預后的因素。

1.3統計學方法應用SPSS 17.0統計軟件，組間蛋白表達率的比較采用χ2檢驗，采用Kaplan-Meier方法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗，使用COX比例風險回歸模型行多因素分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1腎癌組織EphA2及E-cadherin蛋白表達免疫組化染色結果顯示，EphA2蛋白陽性表達于細胞質及細胞膜，E-cadherin蛋白陽性表達于細胞膜。52例腎癌組織標本中EphA2蛋白高表達率、低表達率分別為71.2%(37/52)、28.8%(15/52)，E-cadherin蛋白高表達率、低表達率分別為23.1%(12/52)、76.9%(40/52)。

2.2EphA2及E-cadherin蛋白表達與腎癌臨床病理特征的關系腫瘤直徑≥5 cm者EphA2蛋白高表達率高于腫瘤直徑<5 cm者(P<0.05)，腫瘤直徑≥5 cm者E-cadherin蛋白低表達率高于腫瘤直徑<5 cm者(P<0.05)，其余臨床病理特征與EphA2蛋白的高表達和E-cadherin蛋白低表達無相關性。見表1。

表1　EphA2及E-cadherin蛋白表達與腎癌

2.3EphA2及E-cadherin蛋白表達與腎癌患者預后的關系EphA2蛋白高表達者3年生存率為29.7%，E-cadherin蛋白低表達者3年生存率為35.0%。將單因素分析中有統計學意義的因素腫瘤直徑以及E-cadherin蛋白表達、EphA2蛋白表達納入多因素COX比例風險回歸模型，結果示EphA2蛋白高表達是腎癌患者預后的獨立影響因素(RR=12.784，95%CI：1.701～96.071，P<0.05)。

3討論

EphA2作為EphA亞家族受體8個成員中的第2個，在人的多種細胞或組織中均有表達[8]。生理情況下，EphA2與其配體EphrinA1結合后，可削弱誘導細胞生長的生長因子活性，抑制細胞的生長，同時EphA2經吞噬溶酶體途徑被快速降解，使其維持在正常生理水平[9]。在腫瘤組織中，由于腫瘤細胞極性消失、細胞之間的結合不緊密，致使EphA2不能與其配體EphrinA1有效結合，最終使其磷酸化受阻，導致大量EphA2蛋白在腫瘤組織中積聚。EphA2配體或抗體的刺激能快速而顯著地降低細胞與細胞外基質的黏附，長期刺激可抑制重要的細胞黏附蛋白水平，持續減弱細胞與細胞外基質的粘連[10]，最終導致腫瘤發生、發展。研究發現，在卵巢癌[3]、結腸癌[4]組織中EphA2蛋白表達增高，且增高程度與腫瘤進展密切相關。本研究發現，腎癌組織中EphA2蛋白高表達率為71.2%，腫瘤直徑≥5 cm者EphA2蛋白高表達率高于腫瘤直徑<5 cm者，提示EphA2在腎癌組織中表達增高，EphA2高表達可能參與腎癌的發生發展過程。

E-cadherin具有維持組織結構完整性和介導上皮細胞之間同質性黏附的作用，在多種腫瘤組織中低表達甚至不表達。E-cadherin表達降低或缺失可導致細胞間接觸抑制減弱以及細胞生長失控，導致EphA2與其配體不能有效結合，EphA2降解受阻，進而又進一步影響E-cadherin的表達，形成惡性循環，二者相互影響，協同促進腫瘤的發生、發展[11]。研究發現，上皮—間質轉化(EMT)在腫瘤細胞的侵襲轉移過程中發揮重要作用[12,13]，在分子水平表現為E-cadherin蛋白表達降低。本研究發現，腎癌組織中E-cadherin蛋白低表達率為76.9%，腫瘤直徑≥5 cm者E-cadherin蛋白低表達率高于腫瘤直徑<5 cm者，提示E-cadherin蛋白在腎癌組織中表達降低，可能參與了腎癌的發生、發展過程[14]。

研究發現，EphA2蛋白高表達不僅是腎癌發生的危險因素，還是反映腎癌患者預后的指標。本研究發現，EphA2蛋白高表達是腎癌患者預后的獨立影響因素，考慮EphA2高表達可能通過與局部微環境相互作用而調節細胞行為，導致腫瘤發生、預后較差。本研究結果顯示，TNM分期和腫瘤組織學類型不是腎癌患者預后的影響因素，可能與本研究樣本量小有關，有待進一步研究證實。

綜上所述，EphA2蛋白高表達、E-cadherin蛋白低表達是腎癌患者預后的獨立影響因素；EphA2蛋白可能在腎癌的發生、發展中起重要作用，檢測EphA2蛋白表達情況有助于對腎癌患者預后的判斷。

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Expression of EphA2, E-cadherin in renal cell carcinoma and its

relationship with clinical pathological features of patients

ZHANGJun-xia,XUJin-sheng,BAIYa-ling,CuiLi-wen,ZHANGHui-ran,ZHANGSheng-lei

(TheFourthHospitalofHeBeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China)

Abstract:Objective To investigate the expression of Eph receptor tyrosine kinase-A2 (EphA2) and E-cadherin in renal cell carcinoma (RCC) and its relationship with clinical pathological features of patients. MethodsThe expression of EphA2 and E-cadherin was detected by immunohistochemical SP method in the tumor tissues from 52 RCC patients. The HSCORE score and percentage of positively stained cells were calculated. The relationships between the expression of EphA2 and E-cadherin and clinical characteristics including age, gender, TNM classification, diameter of the tumor and pathologic types were analyzed. The three-year survival rate was calculated with the Kaplan-Meier method and compared by the Log-rank test. The main risk factors were screened by Cox hazard regression model. ResultsThe percentage of patients with high expression of EphA2 was 71.2%, and the percentage of patients with low expression of E-cadherin was 76.9%. The high expression rate of EphA2 in patients with a tumor diameter ≥5 cm was higher than those with a tumor diameter <5 cm (P<0.05), and the low expression rate of E-cadherin in patients with a tumor diameter ≥5 cm was higher than those with a tumor diameter <5 cm (P<0.05). The high expression of EphA2 was a risk factor for the outcome of RCC patients (P<0.05). ConclusionThe expression of EphA2 was increased, and the expression of E-cadherin was decreased in the RCC tissue. The high expression of EphA2 was the an independent risk factor for the prognosis of RCC patients.

Key words:kidney neoplasms, kidney carcinoma; Eph receptor tyrosine kinase-A2; E-cadherin; prognosis

(收稿日期：2014-09-08)

通信作者簡介：徐金升(1964-)，男，主任醫師，教授，博士生導師，研究方向為腎癌的發病機制研究。E-mail: xjs5766@126.com

作者簡介：第一張俊霞(1971-)，女，副主任醫師，研究方向為腎癌的發病機制研究。E-mail: lei06352511@126.com

基金項目：河北省科技計劃資助項目(122777219)。

中圖分類號：R737.11

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2015)10-0004-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.10.002