綿羊痘病毒感染的診斷與病原分離

王 珅

（遼寧醫學院畜牧獸醫學院，遼寧 錦州121000）

綿羊痘（Sheeppox，SP）是由綿羊痘病毒（Sheep poxvirus，SPPV）引起綿羊的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。SPPV 是痘病毒科（Poxviridae），山羊痘病毒屬（Capripoxvirus）的成員，該病毒具有高度的嗜上皮性，可感染不同年齡和不同品種的綿羊，其中以羔羊最為敏感，感染后引起皮膚和黏膜發生增生性病變，臨床上以在感染羊唇、乳房、會陰、尾根以及皮膚無毛少毛處發生丘疹、痘疹和膿皰為特征，若無繼發感染，綿羊痘引起的死亡率一般在10%～20%之間。目前，該病廣泛流行于世界各養羊國家，該病在我國內蒙古、遼寧、吉林和黑龍江等多個養羊業發達的省市都有該病發生和流行的報道。給養羊業造成嚴重的經濟損失。

1 發病情況

2014 年9 月遼寧省一養殖戶從外地新購入小尾寒羊54 只。羊到場后由于更換飼料飼草，以及飼養環境的變化，大多數羊出現食欲不振，挑食。每天下午出去放牧2～3 h，1 周后陸續有5～6 只羊發病，后發展到21 只羊發病，2 周后出現死亡病例，在發病期間新生羔羊5 只，最后統計總發病21 只，死亡11 只。

2 臨床癥狀

發病時出現咳嗽、眼瞼發紅以及發熱癥狀，最高體溫達41.5 ℃，不吃草，離群呆立，之后1～2 d，病羊出現口腔和皮膚病變，最初是在局部皮膚出現紅斑，紅斑大小如黃豆粒到指甲蓋大小，1～2 d 后，紅斑變為丘疹突出于皮膚表面，隨后丘疹逐漸增大，變為灰白色或淡紅色的隆起結節，結節大的直徑可以達到4 cm 左右，結節在幾天之內轉變成典型的水皰，水皰初為透明液體，后變為膿性液體，形成膿皰，最后破潰結痂。出現皮膚損害的部位多是腹股溝、腋下和會陰等皮膚無毛或少毛部位。口腔病變明顯，在齒齦和上下腭均可形成水皰，口腔及嘴唇腫脹，流涎嚴重，病羊眼瞼腫脹、流淚、角膜發炎、失明；流鼻涕，咳嗽，呼吸困難，最終衰竭而死。癥狀輕微的羊不影響食欲和食量，只是偶爾咳嗽、尾根和腿內側有少量痘疹，在少量水皰破潰后康復。

3 剖檢變化

剖檢病死羊4 只，可見咽喉、氣管、食道等部位有大小不等的圓形或半球形結節；肺充血、水腫,整個肺部分布大量灰白色的結節性病變，結節質地堅實，切面灰白色，肝臟有壞死灶；真胃、瘤胃表面有許多大小不一的結節，個別病例見有糜爛或潰瘍病變，小腸空虛，結腸腸壁變薄，黏膜脫落。

4 病原檢查

4.1 細菌分離培養 無菌采集病死羊的血液、肝臟、脾臟以及皮膚痘疹做病料觸片和涂片，并進行細菌的分離培養，經革蘭染色和美藍染色鏡檢。未發現細菌感染。

4.2 PCR檢測 參照相關文獻[1]針對綿羊痘病毒P32基因設計1 對特異性引物，引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，預期擴增的目的片段為1 045 bp。結果利用綿羊痘病毒RNA pol 基因序列設計特異性引物進行PCR 擴增，經瓊脂糖凝膠電泳檢測，擴增出與預期片段大小一致的條帶，大小為1 045 bp，見圖1，凝膠回收，克隆測序，經同源性分析，與AY077834 同源性為97.4%，測序結果見圖2。

圖1 S PPV PC R 電泳

5 診斷

根據小羊發病率高并且死亡率高，以及呼吸道癥狀為主，口腔、皮膚較薄處出現痘疹做出初步診斷，最終通過PCR 檢測確診，并排出細菌混合感染。

6 病原分離

將采集到的病羊的肺部痘疹組織痂皮剪碎，制作病毒懸液，將其接種于生長良好的原代胎羊腎細胞，從病羊肺組織中分離獲得1 株綿羊痘病毒。收集細胞病變液，反復凍融3 次后使用差速離心法對病毒進行純化。

7 討論

7.1 關于發病原因的分析 此次羊群發病原因主要有以下幾點：第一是引進動物只做了綿羊痘的臨床基本檢查，并沒有作特異性的ELISA 檢測和PCR 檢測；第二是引進動物沒有嚴格隔離，進場的第2 天就出去放牧；第3 是飼養場周邊可能存在綿羊痘的傳染源。