石榴皮提取物中鞣花酸和沒食子酸在大鼠體內的藥代動力學研究

周靜+++++周本宏++凃杰++++++張嬋++++++羅毅++++++劉剛

[摘要] 目的 研究石榴皮提取物中鞣花酸和沒食子酸在大鼠體內的藥代動力學特征。 方法 健康大鼠灌胃給予石榴皮提取物，收集不同時間的含藥血漿，采用高效液相色譜法檢測大鼠血漿中鞣花酸和沒食子酸兩種成分的血藥濃度，運用WinNonlin 5.2藥動學軟件擬合房室模型，計算其藥動學參數。 結果 鞣花酸和沒食子酸在大鼠體內均呈二室模型分布，鞣花酸和沒食子酸的主要藥動學參數分別為：半衰期速率常數T1/2（ka）=0.150、0.779 h，分布半衰期T1/2α=0.570、0.856 h，消除半衰期T1/2β=6.73、5.59 h，達峰時間Tmax=0.50、1.38 h，最大血藥濃度Cmax=7.29、7.15 μg/mL，分布相速率常數α=1.21、0.81 h-1，消除相速率常數β=0.103、0.124 h-1，吸收速率常數Ka= 0.462、0.889 h-1。 結論 鞣花酸和沒食子酸藥動學特征為口服吸收、分布快、達峰時間短，石榴皮中沒食子酸的吸收大于鞣花酸的吸收。

[關鍵詞] 石榴皮提取物；鞣花酸；沒食子酸；藥代動力學；血藥濃度

[中圖分類號] R285 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2015）01（c）-0019-05

石榴（Punica granatum L.），又叫安石榴，屬于石榴科石榴屬的一種落葉果樹，廣泛栽培于熱帶和亞熱帶地區[1]。中醫認為石榴皮在澀腸、止血、殺蟲方面具有顯著的功效，故作為一種傳統的中藥材一直收載于《中國藥典》中。《中國藥典》2010年版[2]規定石榴皮中鞣質含量不得低于10%，這說明鞣質類成分是衡量石榴皮質量好壞的重要指標，而總鞣質中的主要活性成分就是鞣花酸和沒食子酸[3]。本實驗室在前期的研究中已經證實石榴皮中總鞣質具有抗菌[4]、抗病毒、抗氧化[5]、抑精抗生育活性[6]、改善慢性腎功能等作用[7]。現代研究證實其除了具有強大的抗氧化、抗菌、抗病毒作用外，在體外還可抑制癌細胞增殖，誘導細胞凋亡[8]。目前，還尚未有同時對鞣花酸和沒食子酸的藥代動力學研究的報道。本實驗采用口服方式給予大鼠石榴皮提取物，并運用高效液相色譜法測定鞣花酸和沒食子酸在大鼠體內的血藥濃度，從而研究這兩種成分在大鼠體內的藥代動力學特征，為進一步研究石榴皮鞣質成分提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Aligent 1100，US）；超聲波清洗儀（SK5200H，上海科導超聲儀器有限公司）；旋轉蒸發儀（W2-100S，上海申生科技有限公司）；冷凍干燥機（ALPHAI-4/RZ-2，Martin Christ，GER）；冷凍離心機（H-1600RW，上海利鑫堅離心機有限公司）。

1.2 試劑與藥品

石榴皮采購于武漢市藥材公司，并由武漢大學藥學院張洪教授鑒定為石榴科石榴屬石榴（Punica granatum L.）的干燥果皮；大孔吸附樹脂（HPD，滄州寶恩化工有限公司）；鞣花酸對照品（批號：A0714，成都曼斯特生物科技有限公司）；沒食子酸對照品（批號：110831-201204，中國藥品生物制品檢定所），干酪素（上海伯奧生物科技公司）；肝素鈉（天津市生物化學制劑廠）；水是實驗室自制的超純水；甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.3 實驗動物

健康雌性SD大鼠10只，體重180～220 g，購于武漢大學實驗動物中心，許可證號為SCXK（鄂）2008-0005。將大鼠采取自然光照和自由進食進水，飼養在武漢大學人民醫院SPF級動物房中，適應1周后開始實驗。

2方法

2.1 石榴皮提取物制備

2.1.1 石榴皮鞣質粗提物的制備[1]

將粉碎后的一定量的干燥石榴皮置于1000 mL蒸餾燒瓶中，按1∶10的料液比，用70%丙酮溶液作為溶劑在50℃下回流提取兩次，每次30 min。然后合并兩次提取液，趁熱過濾，再于50℃下減壓濃縮并回收溶劑，濃縮液冷凍干燥后得粗提物[9]，并保存于4℃冰箱中供實驗用。

2.1.2 磷鉬鎢酸-干酪素比色法測定鞣質含量[2]

2.1.2.1 對照品溶液的配制

將精密稱取的50 mg沒食子酸對照品置于100 mL棕色容量瓶中，加水溶解，稀釋至相應刻度并搖勻。再精密量取上述溶液5 mL，置于50 mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度并搖勻，即可得到0.05 mg/mL的沒食子酸對照品溶液。

2.1.2.2 標準曲線的制備

分別對6個25 mL棕色容量瓶進行編號，依次向編號的容量瓶中加入沒食子酸對照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL。然后各加入磷鉬鎢酸試液1 mL，再分別加水12、11、10、9、8、7 mL，最后分別用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min后，于760 nm波長處用紫外分光光度法測定吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。標準曲線為：Y=110.95X+0.0194，r=0.9998。結果見圖1。

2.1.2.3 鞣質含量測定

2.1.2.3.1 總酚 精密吸取樣品溶液2 mL，置于25 mL棕色量瓶中，按照“2.1.2.2”項下的方法測定吸光度，并從標準曲線中讀出待測樣品溶液中相應沒食子酸的含量（mg），計算即可得到總酚的量。

2.1.2.3.2 不被吸附的多酚 先精密量取25 mL的樣品溶液，然后加至盛有0.6 g干酪素的100 mL具塞錐形瓶中，密塞后置于30℃水浴中保溫1 h，攪拌，取出后放冷，搖勻并過濾，棄去初濾液。精密量取續濾液2 mL，置25 mL棕色量瓶中，“2.1.2.2”項下的方法測定相應的吸光度，并從標準曲線中讀出待測供試品溶液中沒食子酸的含量（mg），計算即可。鞣質的含量按下式計算得到：鞣質的含量=總酚的含量-不被吸附的多酚量。