南瓜苗期腐爛病病原鑒定及藥劑防治試驗

劉永亮等

摘要：通過組織分離法，從溫室大棚內發生南瓜苗期腐爛病的植株中分離得到一株菌株。采用南瓜莖人工接種試驗進行致病性測定，確認該菌株為病原菌。經形態學鑒定，初步將該病原菌鑒定為瓜枝孢霉（Cladosporiumcucumerinum），編號為Cc-1。孢子萌發試驗及溫室防病試驗結果表明：6225%腈菌唑·福美雙可濕性粉劑800倍液與75%百菌清可濕性粉劑600倍液對真菌Cc-1的孢子萌發抑制率均高于90%，溫室防治效果分別為7611%與7550%。

關鍵詞：南瓜苗；腐爛病；病原鑒定；芽枝霉屬；藥劑防治

中圖分類號：S436.429+S484+.9文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0086-03

壽光蔬菜大棚南瓜育苗生產中，發生一種危害南瓜苗期莖葉的病害。該病害在作砧木用的南瓜幼苗莖部與葉片均可發病，多為嫩莖發病，發病初期為淡黃綠色水漬狀病斑，后期發病部位凹陷龜裂，表面產生大量灰褐色霉層，易倒伏。葉片發病時，初期形成褪綠色病斑，后期病斑處正反面產生灰褐色霉層。多在溫度低、濕度大的傍晚與次日上午發病，嚴重影響南瓜砧木的生長與發育。

該病害癥狀與報道的黃瓜黑星病癥狀表現相似[1～3]。但目前尚未見關于南瓜上發生類似黑星病的研究報道。本試驗通過南瓜砧木莖葉腐爛病原菌分離與鑒定，初步確定了病原菌種類，并通過溫室藥劑抗病試驗，檢測出所用藥劑的防治效果，為該病害的防治提供了依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試品種京新白雪南瓜，由河北省青縣大地育苗中心繁育，從泰安友誼種業批發部購買。

1.1.2供試藥劑75%百菌清：由山東大成農藥股份有限公司生產；62.25%腈菌唑·福美雙：由山東恒利達生物科技有限公司生產。均購自泰安富華農資。

1.2試驗方法

1.2.1病原菌的組織分離與鑒定取新鮮的病葉與病莖，用清水沖洗，經75%酒精與0.1%升汞消毒，從其病健交界處切3～5cm見方的組織塊，置于PDA培養基上25℃恒溫培養，待菌絲長出后，進行純化轉移至新的PDA培養基上培養，4℃保存菌種。

觀察菌落、菌絲、產孢結構及孢子形態，參考魏景超（1979）[4]的方法對病原進行初步鑒定。

1.2.2離體南瓜莖接種試驗在PDA培養基上劃線接種分離的真菌，25℃培養6～8d，向培養皿中倒入無菌水10～15ml，用曲玻棒在菌落表面輕輕刮動數次，即制成孢子母液，倒入滅菌小燒杯中，加入適量無菌水，用玻璃棒充分攪拌。用4層滅菌紗布過濾到另一個無菌小燒杯中，制成1×105cfu/ml孢子懸浮液。

取10株健康的南瓜植株，切取長為5cm左右的健康嫩莖，接種孢子懸浮液，保濕處理，7d后觀察結果。對病斑進行再次組織分離，觀察比較所得病原菌與初次分離病原菌形態有無差異。

1.2.3孢子萌發試驗取已滅菌試管7支，各倒入1×105cfu/ml孢子懸浮液9ml，然后分別加入無菌水，腈菌唑·福美雙800、900、1000倍液，百菌清600、800、1000倍液各1ml。每處理重復3次，置于25℃處，12h后觀察并記錄結果，用懸滴法測孢子的萌發率及抑制率。

1.2.4溫室防病試驗選取健康南瓜種子，溫水浸種3d催芽，選取出芽較一致的種子，播到裝有滅菌土的營養缽中，每盆4～5粒。參考李光華等（2003）[5]和曹守軍等（2011）[6]的方法，等幼苗長出一片真葉時，噴濃度為106cfu/ml孢子懸浮液10ml/株，每天1次，連續噴4d。在第2次噴孢子懸浮液前，分別噴無菌水及藥劑腈菌唑·福美雙800倍液和百菌清600倍液各10ml/株，植株液滴消失后，再噴孢子液，每處理6盆。最后一次接種病原菌后7d，觀察結果并記錄病情。

分級標準：參照李保聚（1997）[7]對苗期黃瓜黑星病的分級標準，略有改動。0級：植株健康，葉片形狀與葉色未發生變化；1級：葉片萎縮或出現直徑小于0.5mm的病斑，葉柄及莖表面無病斑；2級：葉片出現大于0.5mm的病斑，葉柄及莖表面出現病斑，病斑未凹陷龜裂；3級：葉柄及莖表面出現凹陷龜裂病斑，植株未在龜裂病斑處倒伏；4級：植株在龜裂病斑處倒伏，出現萎蔫癥狀，生長點還存在；5級：植株死亡或生長點腐爛死亡。

病情指數=∑（各級病株數×相應病級代表值）/（調查總株數×最高病級代表值）×100

防治效果（%）=（對照組病情指數-處理組病情指數）/對照組病情指數×100

1.3數據分析

試驗數據均由SPSS17.0軟件進行分析，經Duncan氏新復極差法進行差異顯著性分析。

2結果與分析

2.1病原菌形態學鑒定結果

經組織分離，得到1株菌株，其分離率達85%。該菌株在PDA培養基上培養3～4d后，可形成單個菌落（圖1-A），菌落為圓形，邊緣較整齊，初期白色，后期為灰褐色，菌落生長緩慢。其菌絲（圖1-B）初期無色，后期為褐色，光滑壁薄，呈銳角分支，有隔，排列緊密。分生孢子梗（圖1-C與1-D）無色或淺色，直立細長，有分支，有隔。頂端尖銳，分生孢子頂生，2～4個孢子串生，以分生孢子鏈進行分支。分生孢子（圖1-F）淡褐色或橄欖色，單胞，壁薄，少見分隔，大小不一，一般為（28.9～41.6）μm×（12.8～14.6）μm。孢子間易斷裂，孢子萌發（圖1-E）時，多從一端長出菌絲，有時可見兩端長出菌絲。endprint

摘要：通過組織分離法，從溫室大棚內發生南瓜苗期腐爛病的植株中分離得到一株菌株。采用南瓜莖人工接種試驗進行致病性測定，確認該菌株為病原菌。經形態學鑒定，初步將該病原菌鑒定為瓜枝孢霉（Cladosporiumcucumerinum），編號為Cc-1。孢子萌發試驗及溫室防病試驗結果表明：6225%腈菌唑·福美雙可濕性粉劑800倍液與75%百菌清可濕性粉劑600倍液對真菌Cc-1的孢子萌發抑制率均高于90%，溫室防治效果分別為7611%與7550%。

關鍵詞：南瓜苗；腐爛病；病原鑒定；芽枝霉屬；藥劑防治

中圖分類號：S436.429+S484+.9文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0086-03

壽光蔬菜大棚南瓜育苗生產中，發生一種危害南瓜苗期莖葉的病害。該病害在作砧木用的南瓜幼苗莖部與葉片均可發病，多為嫩莖發病，發病初期為淡黃綠色水漬狀病斑，后期發病部位凹陷龜裂，表面產生大量灰褐色霉層，易倒伏。葉片發病時，初期形成褪綠色病斑，后期病斑處正反面產生灰褐色霉層。多在溫度低、濕度大的傍晚與次日上午發病，嚴重影響南瓜砧木的生長與發育。

該病害癥狀與報道的黃瓜黑星病癥狀表現相似[1～3]。但目前尚未見關于南瓜上發生類似黑星病的研究報道。本試驗通過南瓜砧木莖葉腐爛病原菌分離與鑒定，初步確定了病原菌種類，并通過溫室藥劑抗病試驗，檢測出所用藥劑的防治效果，為該病害的防治提供了依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試品種京新白雪南瓜，由河北省青縣大地育苗中心繁育，從泰安友誼種業批發部購買。

1.1.2供試藥劑75%百菌清：由山東大成農藥股份有限公司生產；62.25%腈菌唑·福美雙：由山東恒利達生物科技有限公司生產。均購自泰安富華農資。

1.2試驗方法

1.2.1病原菌的組織分離與鑒定取新鮮的病葉與病莖，用清水沖洗，經75%酒精與0.1%升汞消毒，從其病健交界處切3～5cm見方的組織塊，置于PDA培養基上25℃恒溫培養，待菌絲長出后，進行純化轉移至新的PDA培養基上培養，4℃保存菌種。

觀察菌落、菌絲、產孢結構及孢子形態，參考魏景超（1979）[4]的方法對病原進行初步鑒定。

1.2.2離體南瓜莖接種試驗在PDA培養基上劃線接種分離的真菌，25℃培養6～8d，向培養皿中倒入無菌水10～15ml，用曲玻棒在菌落表面輕輕刮動數次，即制成孢子母液，倒入滅菌小燒杯中，加入適量無菌水，用玻璃棒充分攪拌。用4層滅菌紗布過濾到另一個無菌小燒杯中，制成1×105cfu/ml孢子懸浮液。

取10株健康的南瓜植株，切取長為5cm左右的健康嫩莖，接種孢子懸浮液，保濕處理，7d后觀察結果。對病斑進行再次組織分離，觀察比較所得病原菌與初次分離病原菌形態有無差異。

1.2.3孢子萌發試驗取已滅菌試管7支，各倒入1×105cfu/ml孢子懸浮液9ml，然后分別加入無菌水，腈菌唑·福美雙800、900、1000倍液，百菌清600、800、1000倍液各1ml。每處理重復3次，置于25℃處，12h后觀察并記錄結果，用懸滴法測孢子的萌發率及抑制率。

1.2.4溫室防病試驗選取健康南瓜種子，溫水浸種3d催芽，選取出芽較一致的種子，播到裝有滅菌土的營養缽中，每盆4～5粒。參考李光華等（2003）[5]和曹守軍等（2011）[6]的方法，等幼苗長出一片真葉時，噴濃度為106cfu/ml孢子懸浮液10ml/株，每天1次，連續噴4d。在第2次噴孢子懸浮液前，分別噴無菌水及藥劑腈菌唑·福美雙800倍液和百菌清600倍液各10ml/株，植株液滴消失后，再噴孢子液，每處理6盆。最后一次接種病原菌后7d，觀察結果并記錄病情。

分級標準：參照李保聚（1997）[7]對苗期黃瓜黑星病的分級標準，略有改動。0級：植株健康，葉片形狀與葉色未發生變化；1級：葉片萎縮或出現直徑小于0.5mm的病斑，葉柄及莖表面無病斑；2級：葉片出現大于0.5mm的病斑，葉柄及莖表面出現病斑，病斑未凹陷龜裂；3級：葉柄及莖表面出現凹陷龜裂病斑，植株未在龜裂病斑處倒伏；4級：植株在龜裂病斑處倒伏，出現萎蔫癥狀，生長點還存在；5級：植株死亡或生長點腐爛死亡。

病情指數=∑（各級病株數×相應病級代表值）/（調查總株數×最高病級代表值）×100

防治效果（%）=（對照組病情指數-處理組病情指數）/對照組病情指數×100

1.3數據分析

試驗數據均由SPSS17.0軟件進行分析，經Duncan氏新復極差法進行差異顯著性分析。

2結果與分析

2.1病原菌形態學鑒定結果

經組織分離，得到1株菌株，其分離率達85%。該菌株在PDA培養基上培養3～4d后，可形成單個菌落（圖1-A），菌落為圓形，邊緣較整齊，初期白色，后期為灰褐色，菌落生長緩慢。其菌絲（圖1-B）初期無色，后期為褐色，光滑壁薄，呈銳角分支，有隔，排列緊密。分生孢子梗（圖1-C與1-D）無色或淺色，直立細長，有分支，有隔。頂端尖銳，分生孢子頂生，2～4個孢子串生，以分生孢子鏈進行分支。分生孢子（圖1-F）淡褐色或橄欖色，單胞，壁薄，少見分隔，大小不一，一般為（28.9～41.6）μm×（12.8～14.6）μm。孢子間易斷裂，孢子萌發（圖1-E）時，多從一端長出菌絲，有時可見兩端長出菌絲。endprint

摘要：通過組織分離法，從溫室大棚內發生南瓜苗期腐爛病的植株中分離得到一株菌株。采用南瓜莖人工接種試驗進行致病性測定，確認該菌株為病原菌。經形態學鑒定，初步將該病原菌鑒定為瓜枝孢霉（Cladosporiumcucumerinum），編號為Cc-1。孢子萌發試驗及溫室防病試驗結果表明：6225%腈菌唑·福美雙可濕性粉劑800倍液與75%百菌清可濕性粉劑600倍液對真菌Cc-1的孢子萌發抑制率均高于90%，溫室防治效果分別為7611%與7550%。

關鍵詞：南瓜苗；腐爛病；病原鑒定；芽枝霉屬；藥劑防治

中圖分類號：S436.429+S484+.9文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0086-03

壽光蔬菜大棚南瓜育苗生產中，發生一種危害南瓜苗期莖葉的病害。該病害在作砧木用的南瓜幼苗莖部與葉片均可發病，多為嫩莖發病，發病初期為淡黃綠色水漬狀病斑，后期發病部位凹陷龜裂，表面產生大量灰褐色霉層，易倒伏。葉片發病時，初期形成褪綠色病斑，后期病斑處正反面產生灰褐色霉層。多在溫度低、濕度大的傍晚與次日上午發病，嚴重影響南瓜砧木的生長與發育。

該病害癥狀與報道的黃瓜黑星病癥狀表現相似[1～3]。但目前尚未見關于南瓜上發生類似黑星病的研究報道。本試驗通過南瓜砧木莖葉腐爛病原菌分離與鑒定，初步確定了病原菌種類，并通過溫室藥劑抗病試驗，檢測出所用藥劑的防治效果，為該病害的防治提供了依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試品種京新白雪南瓜，由河北省青縣大地育苗中心繁育，從泰安友誼種業批發部購買。

1.1.2供試藥劑75%百菌清：由山東大成農藥股份有限公司生產；62.25%腈菌唑·福美雙：由山東恒利達生物科技有限公司生產。均購自泰安富華農資。

1.2試驗方法

1.2.1病原菌的組織分離與鑒定取新鮮的病葉與病莖，用清水沖洗，經75%酒精與0.1%升汞消毒，從其病健交界處切3～5cm見方的組織塊，置于PDA培養基上25℃恒溫培養，待菌絲長出后，進行純化轉移至新的PDA培養基上培養，4℃保存菌種。

觀察菌落、菌絲、產孢結構及孢子形態，參考魏景超（1979）[4]的方法對病原進行初步鑒定。

1.2.2離體南瓜莖接種試驗在PDA培養基上劃線接種分離的真菌，25℃培養6～8d，向培養皿中倒入無菌水10～15ml，用曲玻棒在菌落表面輕輕刮動數次，即制成孢子母液，倒入滅菌小燒杯中，加入適量無菌水，用玻璃棒充分攪拌。用4層滅菌紗布過濾到另一個無菌小燒杯中，制成1×105cfu/ml孢子懸浮液。

取10株健康的南瓜植株，切取長為5cm左右的健康嫩莖，接種孢子懸浮液，保濕處理，7d后觀察結果。對病斑進行再次組織分離，觀察比較所得病原菌與初次分離病原菌形態有無差異。

1.2.3孢子萌發試驗取已滅菌試管7支，各倒入1×105cfu/ml孢子懸浮液9ml，然后分別加入無菌水，腈菌唑·福美雙800、900、1000倍液，百菌清600、800、1000倍液各1ml。每處理重復3次，置于25℃處，12h后觀察并記錄結果，用懸滴法測孢子的萌發率及抑制率。

1.2.4溫室防病試驗選取健康南瓜種子，溫水浸種3d催芽，選取出芽較一致的種子，播到裝有滅菌土的營養缽中，每盆4～5粒。參考李光華等（2003）[5]和曹守軍等（2011）[6]的方法，等幼苗長出一片真葉時，噴濃度為106cfu/ml孢子懸浮液10ml/株，每天1次，連續噴4d。在第2次噴孢子懸浮液前，分別噴無菌水及藥劑腈菌唑·福美雙800倍液和百菌清600倍液各10ml/株，植株液滴消失后，再噴孢子液，每處理6盆。最后一次接種病原菌后7d，觀察結果并記錄病情。

分級標準：參照李保聚（1997）[7]對苗期黃瓜黑星病的分級標準，略有改動。0級：植株健康，葉片形狀與葉色未發生變化；1級：葉片萎縮或出現直徑小于0.5mm的病斑，葉柄及莖表面無病斑；2級：葉片出現大于0.5mm的病斑，葉柄及莖表面出現病斑，病斑未凹陷龜裂；3級：葉柄及莖表面出現凹陷龜裂病斑，植株未在龜裂病斑處倒伏；4級：植株在龜裂病斑處倒伏，出現萎蔫癥狀，生長點還存在；5級：植株死亡或生長點腐爛死亡。

病情指數=∑（各級病株數×相應病級代表值）/（調查總株數×最高病級代表值）×100

防治效果（%）=（對照組病情指數-處理組病情指數）/對照組病情指數×100

1.3數據分析

試驗數據均由SPSS17.0軟件進行分析，經Duncan氏新復極差法進行差異顯著性分析。

2結果與分析

2.1病原菌形態學鑒定結果

經組織分離，得到1株菌株，其分離率達85%。該菌株在PDA培養基上培養3～4d后，可形成單個菌落（圖1-A），菌落為圓形，邊緣較整齊，初期白色，后期為灰褐色，菌落生長緩慢。其菌絲（圖1-B）初期無色，后期為褐色，光滑壁薄，呈銳角分支，有隔，排列緊密。分生孢子梗（圖1-C與1-D）無色或淺色，直立細長，有分支，有隔。頂端尖銳，分生孢子頂生，2～4個孢子串生，以分生孢子鏈進行分支。分生孢子（圖1-F）淡褐色或橄欖色，單胞，壁薄，少見分隔，大小不一，一般為（28.9～41.6）μm×（12.8～14.6）μm。孢子間易斷裂，孢子萌發（圖1-E）時，多從一端長出菌絲，有時可見兩端長出菌絲。endprint