松針總黃酮提取工藝的優(yōu)化及復合袋泡茶的研制

曾 菲，魏 芳，夏道宗

(浙江中醫(yī)藥大學，杭州 310053)

松針，別名豬鬃松毛、松毛、山松須［1］。《本草綱目》記載［2］:“松針，氣味苦、溫、無毒，久服令人不老，輕身益氣，主風濕瘡，生毛發(fā)，安五臟，守中，不饑延年”。松針的主要藥理活性有抗血小板聚集活性、降血脂、降血糖、鎮(zhèn)痛抗炎以及抗菌殺菌，抗過敏等藥理作用［3-8］。中醫(yī)氣化論認為［9］，鮮松針為補陰要藥，其性多燥，久服大益脾土，以滋其肺，“四季脾旺不受邪”。此外大量的試驗研究也表明，松針內(nèi)富含糖類、粗蛋白、粗脂肪、氨基酸和微量礦物元素，具有很高的營養(yǎng)價值和藥用價值。近來年，松針被開發(fā)為飲料、美容保健品等進入市場，在法國、日本、俄羅斯等地應用很廣，非常流行［10］。在國內(nèi)，也有將松針加工成混濁型飲料、澄清型飲料、松針乳飲料或將松針與其它原料按一定的比例混合發(fā)酵成保健酒產(chǎn)品以及將松針直接開發(fā)成松針茶的研究［11］。本研究優(yōu)化松針中總黃酮的提取工藝，經(jīng)過配方優(yōu)化，研制一款具有輔助降血脂、降血糖等功效的功能性袋泡茶飲料。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、鹽酸、碳酸鈉、氯化鈉:均為分析純;市購新鮮馬尾松松針;蘆丁標準品(純度≥98%)。

752 紫外可見分光光度計，型號:L0903007，上海菁華科技儀器有限公司;電子天平，型號:FA2004，上海潢海儀器有限公司;中草藥粉碎機，型號:FW135，天津市泰斯特儀器有限公司;旋轉蒸發(fā)儀，型號:R201，上海中勝生物技術有限公司;數(shù)控超聲波清洗器，型號:KQ-250DE，昆山市超生儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 總體工藝

(1)松針→脫蠟→脫澀→烘干→粉碎→過篩→醇提→濃縮→定量→松針提取液。

(2)松針粉+配料→調(diào)配→袋裝→封口→殺菌→成品。

1.2.2 具體操作

(1)馬尾松松針中黃酮的提取

采用乙醇作為松針的提取溶劑，稱取2.0g 的松針干粉多份，分別加入6 倍、8 倍、10 倍、12 倍、14 倍、16 倍劑量的濃度為10%、20%、40%、60%、80%、95% 的乙醇分別在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃溫度下，在恒溫水浴鍋中回流反應30min、60min、120min、180min、240min、300min。過濾濾液置于旋轉蒸發(fā)器中回收溶劑，將濃縮得到的膏體用蒸餾水洗滌除渣，合并清液，最后用60%乙醇溶解［13］。

(2)馬尾松松針中黃酮含量測定

總黃酮的提取樣品用752 紫外分光光度計在510 nm處測定其吸光度值，黃酮提取率公式如下。

(1)式中，K 為馬尾松松針中黃酮提取率、c 為黃酮的質(zhì)量濃度、a 為稀釋倍數(shù)、V 為提取液體積、m 為馬尾松松針粉質(zhì)量。

(3)松針處理

脫蠟:用3%Na2CO3溶液，將松針浸泡1min。清洗濾去水分備用。

脫澀:用3%氯化鈉溶液，將松針放入浸泡1 h。清洗濾去水分，晾開備用。

烘干:將晾去表面水分的松針放于60℃烘箱中烘干，等到松針酥脆易粉碎時取出備用，此時松針含水量為8%—10%。

粉碎:用粉碎機分別將干燥后的松針粉和茶葉粉碎備用。

過篩:將粉碎好的松針粉和茶葉粉篩分成不同粒度，分成＜40 目、40—60 目、60—80 目、80—100 目、＞100 目5 個等級［13］。

(4)袋泡茶的配制與包裝

根據(jù)正交試驗，選擇合適的配比進行調(diào)配，密封包裝，輻射殺菌得袋泡茶成品。

2 結果與討論

2.1 工藝優(yōu)化

2.1.1 乙醇濃度因素 乙醇濃度對提取效果的影響:液料比10∶1 (V/m)、提取溫度50℃、提取時間60min，乙醇濃度分別為10%、20%、40%、60%、80%、

95%。

2.1.2 料液比因素 液料比對提取效果的影響:提取溫度50℃、乙醇濃度:60%、提取時間60min，料液比分別為1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14、1∶16 (V/m)。

2.1.3 時間因素 提取時間對提取效果的影響:液料比10∶1 (V/m)、提取溫度50℃、乙醇濃度60%，提取時間分別為30、60、120、180、240、300min。

2.1.4 溫度因素 提取溫度對提取效果的影響:液料比10∶1 (V/m)、提取時間60min、乙醇濃度60%，提取溫度分別為30、40、50、60、70、80℃。

2.1.5 正交試驗 在單因素的基礎上，以總黃酮的提取率為指標，乙醇濃度(A)、提取時間(B)、提取溫度(C)、料液比(D)4 個因素，選擇L9(34)正交表安排試驗(表1)。

表1 正交因素

2.2 松針復合袋泡茶的單因素試驗

2.2.1 粒度因素

不同粒度對松針袋泡茶品質(zhì)的影響:袋泡茶中內(nèi)容物粒度不應太大，也不能太小。粒度太大了則茶不易泡開，茶中滋味不易溶出;粒度太小則內(nèi)容物容易穿過濾紙袋，影響茶的口感。所以選擇30%的配比，凈重2g，分成＜40 目、40—60 目、60—80 目、80—100 目、＞100 目5 個等級，進行試驗，得出最佳粒度［13］。

2.2.2 凈重因素

不同凈重對松針袋泡茶品質(zhì)的影響:袋泡茶在沖泡時，內(nèi)容物會吸水膨脹，因此內(nèi)容物太多會脹破濾紙袋，同時也會影響內(nèi)容物中營養(yǎng)成分的浸出量。所以選擇配比為30%，粒度為60—80 目，分成1.0g、1.5g、2g、2.5g、3g 進行試驗，得出最佳凈重［13］。

2.2.3 配比因素

不同配比對松針袋泡茶品質(zhì)的影響:三者配比對袋泡茶的滋味、香氣、色澤都有很大影響。所以選擇粒度為60—80 目，凈重為2g，分成10%、15%、20%、25%、30%綠茶進行試驗，得出最佳配比［13］。

2.2.4 正交試驗

根據(jù)單因素試驗的結果，采用L934正交設計對影響因素予以分析。正交設計分16 組試驗，據(jù)16 個組合制得袋泡茶，然后加150mL 沸水中沖泡5min 并進行感官評定［13］。配方篩選正交試驗因素與水平設計見表2。

表2 正交試驗因素水平

2.3 馬尾松松針中黃酮提取工藝的優(yōu)化

2.3.1 蘆丁標準曲線

蘆丁標準曲線方程為y=0.009 8x +0.048 9，R2=0.999 2。見圖1。

圖1 蘆丁標準曲線

2.3.2 乙醇濃度馬尾松松針中黃酮提取率的影響

乙醇濃度對馬尾松松針中黃酮提取率的影響如圖2。

圖2 乙醇濃度對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

2.3.3 料液比對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

料液比對馬尾松松針中黃酮提取率的影響如圖3所示。

圖3 液料比對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

2.3.4 溫度對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

提取溫度對馬尾松松針中黃酮提取率的影響如圖4所示。

圖4 溫度對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

2.3.5 時間對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

提取時間對馬尾松松針中黃酮提取率的影響如圖5所示。

圖5 時間對馬尾松松針中黃酮提取率的影響

2.4 松針復合袋泡茶的配方優(yōu)化

由單因素試驗的結果可知，采取L9(34)正交設計對影響因素予以分析。正交設計分16 組試驗，據(jù)16 個組合制得袋泡茶，然后加150mL 沸水中沖泡5min 并進行感官評定。配方篩選正交試驗因素與水平設計見表3。

表3 正交試驗因素水平

按表2 安排進行正交試驗，正交試驗結果和極差分析如表4 所示。

表4 正交試驗

2.5 松針復合袋泡茶感官評價

取袋泡茶1 包，加入150mL 沸水中沖泡5min，倒出茶湯對其湯色、香氣、滋味分別進行感官評定。采用百分制對各因子打分，最后相加得出品質(zhì)總分［13］(表5)。

表5 感官評定評分

3 結論

根據(jù)單因素試驗可知，料液比在1∶8—1∶12 時，總黃酮的提取率較高;在料液比為1∶8 時，馬尾松松針中黃酮的提取率最高。在乙醇濃度為50%—80%時，馬尾松松針中黃酮提取率維持在較高水平;提取溫度對馬尾松松針中總黃酮的提取率的影響在達到40℃時趨于穩(wěn)定;在提取溫度高于70℃時，提取率又開始有下降的趨勢。提取時間對馬尾松松針中黃酮的提取率影響不大，在3h 時達到最高。采用不同溫度、時間、乙醇濃度、料液比4 個因素進行綜合分析得到工藝條件為:溫度為40—60℃、時間為180min、料液比為1∶8—1∶10、乙醇濃度為50%—70%。而利用正交試驗可以得到馬尾松松針中黃酮提取工藝最佳提取工藝條件:提取溫度為40℃、提取時間為180min、乙醇濃度為80%、料液比為1∶12，提取率為6.42%。

松針黃酮最佳提取工藝為:提取溫度為40℃、提取時間為180min、乙醇濃度為80%、料液比為1∶12，提取率為6.42%。以及復合袋泡茶的最佳配比為:粒度40—60 目、凈含量為1.5g、茶葉量20%，該工藝實現(xiàn)了松針總黃酮提取工藝的優(yōu)化，復合袋泡茶呈色澤鮮明的黃綠色，香氣濃郁怡人，口感清爽，是一款具有開發(fā)前景的功能性飲料。

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