頂空氣相色譜法測(cè)定苯甲酸阿格列汀原料藥中3種有機(jī)溶劑殘留量

謝 嵩，徐濟(jì)萍，楊 磊（.山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院藥劑科，濟(jì)南 500；.濟(jì)南市皮膚病防治院，濟(jì)南

250022）

苯甲酸阿格列汀（Alogliptin benzoate）是由日本Takeda公司研發(fā)上市的降糖藥，臨床主要用于2型糖尿病的治療，患者耐受性較好[1-4]。阿格列汀能高度選擇性地抑制絲氨酸蛋白酶二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ），從而維持體內(nèi)胰高血糖素樣肽1（GLP-1）和葡萄糖依賴(lài)性促胰島素多肽（GIP）的水平，促進(jìn)胰島細(xì)胞產(chǎn)生胰島素，同時(shí)降低胰高血糖素濃度，從而發(fā)揮降糖作用。

苯甲酸阿格列汀在制備過(guò)程中使用了甲苯、正丁醇、乙醇等有機(jī)溶劑[5-6]，這些有機(jī)試劑對(duì)人體有一定的危害性，故須確保產(chǎn)品中的殘留量在規(guī)定的范圍內(nèi)。目前已有文獻(xiàn)報(bào)道了苯甲酸阿格列汀片的含量測(cè)定[7-8]，但尚未見(jiàn)有關(guān)苯甲酸阿格列汀原料藥中有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)方法的報(bào)道。為此，本研究建立了頂空毛細(xì)管氣相色譜（GC）法測(cè)定苯甲酸阿格列汀原料藥中甲苯、正丁醇、乙醇?xì)埩袅康姆椒ā?/p>

1 材料

1.1 儀器

6890型GC儀，包括氫火焰離子化（FID）檢測(cè)器、色譜工作站及G1888自動(dòng)頂空進(jìn)樣器（美國(guó)安捷倫公司）；X205型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2 藥品與試劑

苯甲酸阿格列汀原料（自制，批號(hào)：130801、130802、130803，純度＞99.0%）；甲苯、正丁醇、乙醇、二甲基亞砜（DMSO）均為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，純度≥99.0%）；水為自制蒸餾純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

取苯甲酸阿格列汀原料約1.0 g，精密稱(chēng)定，置于20 ml頂空瓶中，精密加入DMSO 5.0 ml使溶解，密封，作為供試品溶液；精密稱(chēng)取甲苯、正丁醇、乙醇各適量，用DMSO定量稀釋?zhuān)瞥擅? ml中約含甲苯0.089 mg、正丁醇0.5 mg、乙醇0.5 mg的溶液，精密量取5.0 ml，置于20 ml頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：毛細(xì)管柱Agilent DB-624（30 m×0.53 mm，3.00 μm）；柱溫：程序升溫，起始溫度40 ℃，保持1 min，以10 ℃/min的速率升至150 ℃，維持1 min，以20 ℃/min的速率升至220 ℃；載氣：高純度氮?dú)猓贿M(jìn)樣口溫度：200 ℃；檢測(cè)器溫度：250 ℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比為10∶1；流速：1 ml/min；進(jìn)樣量：20 μl。頂空瓶平衡溫度：80 ℃；平衡時(shí)間：30 min；進(jìn)樣體積：1.0 ml。理論板數(shù)以乙醇峰計(jì)應(yīng)不低于5 000，各峰間分離度不低于1.5。色譜見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；1.乙醇；2.正丁醇；3.甲苯Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substance；B.sample；1.ethanol；2.N-butanol；3.toluene

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取甲苯、正丁醇、乙醇各適量，置于同一量瓶中，用DMSO定量稀釋?zhuān)瞥擅? ml中約含甲苯0.89 mg、正丁醇5.0 mg、乙醇5.0 mg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取對(duì)照品貯備液20.0、15.0、10.0、5.0、2.5 ml至100 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品的質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明，各對(duì)照品的質(zhì)量濃度均在各自線性范圍內(nèi)與其峰面積呈良好線性關(guān)系，詳見(jiàn)表1。

表1 回歸方程和線性范圍Tab 1 Regression equations and linear range

2.4 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品貯備液1 ml，置于10 ml量瓶中，加DMSO稀釋成質(zhì)量濃度分別為甲苯0.089 mg/ml、正丁醇0.5 mg/ml、乙醇0.5 mg/ml的溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，重復(fù)5次。結(jié)果，甲苯、正丁醇、乙醇峰面積的RSD分別為1.36%、1.13%、0.98%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.5 檢測(cè)限和定量限

精密稱(chēng)取甲苯、正丁醇、乙醇各適量，用DMSO定量稀釋?zhuān)瞥擅? ml中約含甲苯0.1 mg、正丁醇0.5 mg、乙醇0.02 mg的溶液，分別稀釋400倍和2 000倍，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。當(dāng)信噪比＞3時(shí)，溶液中甲苯、正丁醇和乙醇的檢測(cè)限分別為0.05、0.25、0.01 μg/ml；當(dāng)信噪比＞10時(shí)，溶液中甲苯、正丁醇和乙醇的定量限分別為0.25、1.25、0.05 μg/ml。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取樣品1.0 g，置于20 ml頂空瓶中，分別加入相當(dāng)于對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度80%、100%、120%的溶液（每個(gè)質(zhì)量濃度3份）各5.0 ml，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

2.7 樣品中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定

取3批樣品（批號(hào)：130801、130802、130803）各適量，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算有機(jī)溶劑的殘留量。根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典》（二部）[9]，本試驗(yàn)所檢測(cè)的正丁醇和乙醇屬于三類(lèi)溶劑，藥物中此類(lèi)溶劑殘留量應(yīng)小于0.5%；甲苯屬于二類(lèi)溶劑，其殘留量應(yīng)小于0.089%。本試驗(yàn)中3批樣品均未檢出殘留溶劑，結(jié)果符合規(guī)定。

3 討論

測(cè)定殘留溶劑的方法多為GC法，進(jìn)樣方法有直接進(jìn)樣法和頂空進(jìn)樣法。采用頂空進(jìn)樣法時(shí)，苯甲酸阿格列汀不能揮發(fā)成氣體進(jìn)入GC柱，因此可排除主藥對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾。為了選擇合適的溶劑，筆者曾用水、二甲基甲酰胺作為溶劑溶解樣品，效果都不如DMSO理想，因此最終選擇了DMSO。

綜上所述，本研究所建立的頂空GC法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于苯甲酸阿格列汀原料藥中有機(jī)溶劑殘留的控制。

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