塞克硝唑的質量標準研究

潘 勇，何鴿飛，鄭金鳳，童 達，邱細敏（1.湖南省腫瘤醫院，長沙 1001；.長沙市第一醫院，長沙 10005；.湖南省食品藥品檢驗院，長沙 10001；.湖南師范大學醫學院藥學系，長沙 10005）

塞克硝唑（Secnidazole）化學名是1-（2-羥基丙基）-2-甲基-5-硝基咪唑，具有抗多種厭氧菌和原蟲的作用，特別是溶解宿主組織內阿米巴病、賈第鞭毛蟲等[1-2]。該藥由羅納普朗克樂安（Rhone-Poulenc Rorer）公司研制，于1980年在瑞士上市。我國塞克硝唑的現有質量標準為國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBH09922005和國家食品藥品監督管理局標準YBH00562010。目前，《美國藥典》（USP）33版、《英國藥典》（BP）2009版、《日本藥典》（JP）15版以及2010年版《中國藥典》均未收載該品種。本研究考察了塞克硝唑原料藥的性狀、鑒別、檢查、含量測定等項目，以為2015年版《中國藥典》塞克硝唑質量標準的擬訂提供參考。

1 材料

1.1 儀器

YRT-3型熔點測定儀（天津天光光學儀器有限公司）；UV-2550紫外分光光度計（日本島津公司）；pHS-3C型精密pH計（上海精科儀器有限公司）；1100高效液相色譜（HPLC）儀，配有VWD紫外檢測器（美國安捷倫公司）；GC-2010氣相色譜（GC）儀（日本島津公司）；Precisa-120A電子天平（上海分析儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

塞克硝唑（A公司，生產批號：200910F01、201006F01、201007F14；B公司，生產批號：20071226、20100724、20100725）；甲醇、乙腈、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 性狀

根據化學原料藥質量標準制定指導原則，性狀應分別記述藥品的外觀、嗅、味、溶解度以及有關物理常數。本研究參照現行的質量標準對塞克硝唑的外觀、溶解性、熔點及吸收系數進行了考察和統一。

2.1.1 外觀 取本品適量，目視法觀察其外觀性狀。結合6批樣品的實際外觀，將其外觀性狀項統一修訂為：本品為類白色或微黃色結晶或結晶性粉末，無臭，味苦。

2.1.2 溶解性 取本品適量，依2010年版《中國藥典》（二部）凡例試驗，結合6批樣品的實測結果，將其溶解性行為統一修訂為：在甲醇、乙醇、三氯甲烷、丙酮中易溶，在0.1 mol/L鹽酸溶液中溶解，在乙醚中略溶，在水中微溶。

2.1.3 熔點 取本品適量，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅥC測定，結合6批樣品的實測結果，將本品熔點統一修訂為：73～78 ℃。

2.1.4 吸收系數 取本品適量，精密稱定，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 ml中含塞克硝唑13 μg的溶液，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅣA紫外-可見分光光度法，在277 nm波長處測定吸光度，計算吸收系數。結合6批樣品的實際測定值，同時參照國家食品藥品監督管理局標準YBH00562010，將吸收系數修訂為：331～349。

2.2 鑒別

我國現行的兩個質量標準中均收載了化學反應、紫外光譜鑒別和紅外光譜鑒別。筆者通過對6批樣品進行考察，化學反應和紅外光譜鑒別未作修訂；紫外光譜鑒別考慮到樣品的溶解性，參照國家食品藥品監督管理局標準YBH00562010進行了統一：取“2.1.4”項下的溶液，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅣA紫外-可見分光光度法測定，在277 nm波長處有最大吸收，在241 nm波長處有最小吸收。

2.3 檢查

根據《化學原料藥質量標準制定指導原則》，檢查項目的設置應考慮藥品的有效性、純度要求和安全性。筆者參照現行質量標準設置了乙醇溶液的澄清度與顏色、酸堿度、一般雜質檢查（硫酸鹽、熾灼殘渣、重金屬）、水分或干燥失重、有關物質及殘留溶劑檢查項。

2.3.1 乙醇溶液的澄清度與顏色 取本品適量，加乙醇溶解并稀釋制成每1 ml中約含20 mg塞克硝唑的溶液。結果，6批樣品的溶液均澄清，其所顯溶液的顏色均淺于黃色或黃綠色2號標準比色液。

2.3.2 酸堿度 取本品約0.1 g，加水10 ml使溶解，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅥH測定。結合6批樣品的實際測定值，同時參照國家食品藥品監督管理局標準（試行）YBH09922005，將其酸堿度確定為：pH為5.5～7.5。

2.3.3 硫酸鹽 取本品1.0 g，加水100 ml使溶解，濾過，取續濾液40 ml，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧB檢查，與標準硫酸鉀溶液2.0 ml制成的對照液（0.05%）比較。結果，6批樣品的供試品溶液所顯渾濁均淺于對照溶液。

2.3.4 熾灼殘渣 取本品1.0 g，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧN法檢查，遺留殘渣不得超過0.1%。結果，6批樣品均符合規定。

北京市快遞運輸主要集中在街道、小區及各個單位。調查顯示，學生對學校快遞業務員的服務相對滿意，而小區、街道需要提高。反映的問題主要是送貨時間不準確、等的時間太久、業務員態度不好等。服務態度不佳的情況還有：服務熱線過“熱”，很難打進去，接電話的態度有時候惡劣，對于事故采用回避的處理方式。

2.3.5 重金屬 取“2.3.4”項下遺留的殘渣適量，依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧH第二法檢查。結果，6批樣品重金屬的質量分數均不超過百萬分之十。

2.3.6 水分和干燥失重 取本品適量，分別依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧM第一法水分測定法和附錄ⅧL干燥失重法測定，結果顯示兩種方法結果無顯著性差異。由于采用60 ℃減壓干燥的方法，操作更簡單快捷，所以擬定采用60 ℃減壓干燥至恒質量的方法來測定樣品的水分。由于本品含半分子結晶水[3]，按理論值計算含水量應為4.6%，考慮樣品的半分子結晶水和儲存過程中的吸附水，將其限度定為：干燥減失重應為4.0%～6.0%。

2.3.7 有關物質 采用HPLC法對有關物質進行考察。現行的質量標準中均收載有此檢查項，但色譜條件不盡相同，并且由于本品是以2-甲基-5-硝基咪唑作為起始原料，現行的標準均未對2-甲基-5-硝基咪唑進行控制，不利于控制產品質量[4-5]，因此有必要對其標準進行研究。

（1）方法的確定。依照2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅤD HPLC法測定[6]，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（20∶80，V/V）為流動相，檢測波長為318 nm。理論板數按塞克硝唑峰計算不低于2 000，塞克硝唑峰與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。取本品適量，加流動相溶解并稀釋制成1 ml中約含0.3 mg的溶液，作為供試品溶液；另取2-甲基-5-硝基咪唑對照品約15 mg，精密稱定，置于100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 ml，置于10 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。分別精密量取供試品溶液1 ml與對照品貯備液1 ml，置于同一100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液20 μl注入HPLC儀，調節檢測靈敏度，使塞克硝唑色譜峰的峰高為滿量程的10%～20%，再精密量取供試品溶液及對照品溶液各20 μl，分別注入HPLC儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。

（2）樣品有關物質檢查。取本品適量，按上述色譜條件檢查有關物質，結果見表1。

表1 有關物質檢查結果Tab 1 Results of related substances

2.3.8 殘留溶劑 由于原料生產工藝中可能使用了乙酸乙酯、二氯甲烷、甲苯，所以本研究對這3種殘留溶劑進行了考察。

（1）方法的確定。取本品適量，精密稱定，加二甲亞砜稀釋制成每1 ml中約含20 mg的溶液，作為供試品溶液；另取甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷各適量，精密稱定，加二甲亞砜溶解，制成每1 ml中約含甲苯0.017 8 mg、乙酸乙酯0.1 mg和二氯甲烷0.012 mg的溶液，作為對照品溶液。依2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧP第三法殘留溶劑法測定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷作為固定液；起始柱溫90 ℃，維持5 min，以每分鐘20 ℃的速率升溫至170 ℃，維持5 min；檢測器溫度為200 ℃；進樣口溫度為220 ℃。甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷的分離度應符合要求。精密量取供試品和對照品溶液各0.5 μl，注入GC儀，按外標法以峰面積計算，應符合要求。

（2）樣品殘留溶劑檢查。取本品適量，按上述方法檢查殘留溶劑，結果均未檢出甲苯、乙酸乙酯、二氯甲烷。

2.4 含量測定

由于本品分子結構中含有咪唑環，依據原料藥首選容量分析法測定含量的原則[7-8]，采用非水滴定法測定含量。由于現行質量標準中所選溶劑和指示劑不盡相同，故有必要對其進行研究和統一。

2.4.1 溶劑和指示劑的選擇 取本品（廠家：A公司，批號：201006F01）約0.13 g，共8份，其中2份加入冰醋酸20 ml，2份加入冰醋酸10 ml+醋酐10 ml、2份加入冰醋酸5 ml+醋酐15 ml、2份加入醋酐20 ml使溶解。在同一溶劑溶解的2份樣品中，分別加入結晶紫指示液及萘酚苯甲醇指示液，均用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，用電位滴定法指示終點。結果表明，采用冰醋酸20 ml作為溶劑時，滴定終點突躍明顯；采用結晶紫作為指示液時，突躍點時溶液的顏色突變為亮綠色；采用萘酚苯甲醇作為指示液時，突躍點時溶液的顏色突變為亮綠色，兩者無顯著性差異。考慮到檢驗的經濟性，選擇結晶紫作為指示劑。

2.4.2 方法的確定 取本品約0.13 g，加入冰醋酸20 ml使溶解，加入結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液現亮綠色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當于18.52 mg的C7H11N3O3。電位滴定曲線詳見圖1（樣品批號：201006F01）。

圖1 電位滴定曲線Fig 1 The profile of the potentiometric titration

2.4.3 電位滴定法與容量分析法的比較 取本品（A公司，批號：201006F01）約0.13 g，加入冰醋酸20 ml使溶解，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定，分別采用電位滴定法和容量分析法（結晶紫為指示液）進行測定。結果，兩種方法測定結果無顯著性差異，詳見表2。

表2 含量測定方法結果比較（%）Tab 2 Results of content determination（%）

2.4.4 回收率試驗 精密稱取本品（A公司，批號：201006F01）約0.052、0.065、0.078 g，各3份，分別置于錐形瓶中；另精密加入60 ℃減壓干燥至恒質量的塞克硝唑對照品約0.052、0.065、0.078 g，各3份，分別加入冰醋酸20 ml溶解后，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液現亮綠色，并將滴定結果用空白試驗校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當于18.52 mg的C7H11N3O3，結果見表3。

2.4.5 重復性試驗 取本品約0.13 g（A公司，批號：201006F01），共6份，精密稱定，加入冰醋酸20 ml溶解后，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1 mol/L）滴定至溶液現亮綠色，并將滴定結果用空白試驗校正。每1 ml的高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相當于18.52 mg的C7H11N3O3。結果，RSD＝0.42%（n＝6），表明該方法重復性良好。

表3 回收率試驗結果Tab 3 Results of recovery rates

2.4.6 樣品含量測定 樣品含量測定結果詳見表4。

表4 樣品含量測定結果（%）Tab 4 Results of sample’s content（%）

3 討論

塞克硝唑是硝基咪唑類化合物，與甲硝唑等傳統的硝唑類藥物有相似的化學結構，具有生理活性更強、不良反應少、半衰期長等特點[9]。本文統一了其性狀、鑒別、檢查與含量測定方法，可為塞克硝唑質量標準的修訂提供依據。

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[4]張錦琳，袁耀佐，錢文，等.HPLC法測定塞克硝唑的含量及有關物質[J].中國藥科大學學報，2009，40（6）：527.

[5]孟婷，趙敏，呂韶敏，等.高效液相色譜法測定塞克硝唑中有關物質[J].第四軍醫大學學報，2007，28（3）：282.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅤD.

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[8]申獻玲.塞克硝唑溫敏性水凝膠的處方設計與含量測定[J].中國藥房，2010，21（9）：840.

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